库存血液输注前血浆血红蛋白含量与显微镜下红细胞形态变化的研究

赵燕

库存血液输注前血浆血红蛋白含量与显微镜下红细胞形态变化的研究

赵燕

目的 探讨库存血液随时间变化对血浆血红蛋白含量及显微镜下红细胞形态变化的影响。方法 对2～6℃保存20 d、30 d输注的库存血各30袋血液，取样推薄层血涂片，血涂片经瑞士染色，显微镜下观察计数球形红细胞的百分数。血样在有分离胶的试管中离心，检测上血浆血红蛋白含量。结果 20 d内输注的库存血液，血浆血红蛋白为(71.2±8.3)mg/L，球形红细胞比率>5%的百分数为3.33%，第30天的库存血液血红蛋白为(106±10.5)mg/L，球形红细胞>5%的百分数为10%。储存20 d和30 d的库存血液，血浆血红蛋白含量、球形红细胞的百分数均不相同，差异有统计学意义(P<0.01)。结论 库存血液随时间变化血浆血红蛋白含量及显微镜下红细胞形态变化均有显著性变化，输注前部分成分的检测，可作为一种简便的血液质量判断方法。

库存血液；血红蛋白；红细胞；显微镜检查

临床实践中80%以上患者需要输注红细胞[1]。红细胞贮存期间的变化影响到临床输血的疗效。由于采集到的血液来自不同的个体,因此保存期相同的血液红细胞质量也不尽相同。本研究选择2013年4～7月血库库存红细胞悬液,采血后2～6℃保存20 d、30 d时检测血浆游离血红蛋白浓度，涂片经瑞氏染色镜检红细胞形态变化，报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 PCDA抗凝红细胞悬液(三联血袋为威海市威高输血技术有限公司生产)30袋,(4±2)℃冰箱贮存。

1.2 仪器与试剂 3000转/min钟离心机，721分光光度计(高密光学分析仪器厂)，热合机，Olympus普通光学显微镜，瑞氏染液，载玻片。血浆游离血红蛋白检测试剂：2 g/L邻甲联苯胺溶液、1%过氧化氢、10%醋酸溶液、100 mg/L标准血红蛋白溶液。

1.3 方法

1.3.1 血液样品的制备 血站采集血液后制备红细胞成分制品时，血袋外的样品管延长保留10 cm，并用热合机分段封口。血液在医院出库后，剪掉的两段样品管立刻放回(4±2)℃冰箱贮存，至采血后的20 d、30 d时检测血浆游离血红蛋白浓度,涂片染色镜检红细胞形态变化。

1.3.2 100 g/L血红蛋白标准液制备 取抗凝血离心除去血浆，用生理盐水洗涤红细胞三次，以红细胞比容为准，加入等量体积的蒸馏水和半量的氯仿，猛烈振摇5～6 min，高速离心，将上层Hb溶液分离出来，用HiCN方法测其浓度，并用生理盐水调节浓度至100 g/L，(4±2)℃冰箱贮存，用时稀释成100 mg/L标准应用液。邻-甲联苯胺法[2]测定血浆游离血红蛋白浓度。

1.3.3 血涂片制备及染色 取适量红细胞悬浮液在载玻片上推血涂片，自然晾干后用瑞氏染液进行染色[2，3]，显微镜下观察红细胞形态变化。

1.3.4 统计学方法 采用配对资料的t检验及率的t检验进行统计学处理,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 (4±2)℃冰箱贮存20 d、30 d红细胞悬液中游离血红蛋白含量分别为(71.2±8.3)mg/L、(106±10.5)mg/L。呈逐渐增高趋势，均数间的比较差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 每张瑞氏染色的血涂片显微镜下观察500个红细胞，球形红细胞比率>5%为异常。(4±2)℃冰箱贮存20 d红细胞悬液，球形红细胞>5%的有1袋，贮存至30 d时，球形红细胞>5%的有3袋，两个储存时间点比较呈逐渐增高趋势(P<0.01)。

3 讨论

(4±2)℃冰箱贮存的红细胞细胞形态正常为双凹圆盘状，直径7.5～8.3μm，厚度约1.7μm，体积8.3μm3，表面积14.5μm2，输入体内后，可以变形通过较红细胞小得多的毛细血管。红细胞在自然衰老过程中，细胞膜不断发生改变，由光滑双凹圆盘状、锯齿盘状、锯齿似盘状、锯齿似球盘状和光滑球形有规律的退行性变，球形红细胞的比表面积最小进行气体交换和自身变形能力最差并且球形是不可逆的[5]，输入体内后很快被破坏，而起不到作用甚至带来副作用。

由于库存血液分别采自不同的人体，个体差异必然导致不同的血液间质量差异[6]。尽管所用血袋一致，(4±2)℃保存条件下温度波动，成分血制备无菌操作[4]，运输条件不完全一致等许多因素都会对血液质量造成影响。35 d保存期内血液质量变化应是引起输血不良反应的主要因素。因此，血液自中心血站出库后，在医院保存至保质期末，红细胞在生理[5]、生化、免疫学、形态学[7]等很多方面发生的变化，依然应该引起重视。本文观察2～6℃保存20 d、30 d输注的30袋库存血样，经薄层血涂片，瑞士染色，显微镜下观察计数球形红细胞的百分数，并检测血浆血红蛋白含量。数据显示20～30 d之间血浆血红蛋白含量、球形红细胞比率>5%的百分数均呈增加趋势。提示库存血液质量变差的占3.33%～10%，这少部分的血液可能适用于很多患者，而对于血液病、肾功能不全的患者是否适合输注，输注后造成的损害我们认为还是值得探讨[8]。

结论：医院库存血液保存至30 d时，有很少量血液质量已变差，建议观察库存血液血浆血红蛋白含量及显微镜下红细胞形态变化，作为一种血液质量全程监控选择方法。

[1] 王殿昌,马玉翠,王秀英,等. MAP红细胞悬液保存期内生化指标的动态观察.中国医科大学学报,2006,35(2):207.

[2] 叶应妩,王毓三,申子瑜,等. 全国临床检验操作规程.东南大学出版社,2006:121.

[3] 李津婴.许燕群.红细胞形态学对溶血疾病的诊断意义.诊断学理论与实践,2010,9(3):214-217.

[4] 邓家栋.血液保存及血细胞成分分离.邓家栋.临床血液学.上海:科学技术出版社,1985:1175.

[5] 刘菲,刘春莲. 不同贮存期红细胞悬液中游离血红蛋白的变化.贵阳医学院学报,2005,30(6): 564.

[6] 成民,李家增,季阳.基础输血学.北京:中国科学技术出版,2001:80.

[7] Liu Q P,Sulzenbacher G,Yuan H,et al. Bacterial glycosidases for the production of universal red blood cells. Nat Biotechnol,2007,25(4):454-464.

[8] Horn J,Thon V,Bartonkova D,et al.Anti-IgA antibodies in common variable immunodeficiency (CVID);diagnostic workup and therapeutic strategy.Clin Immunol, 2007,122(2):156-162.

Research on plasma hemoglobin content before stored blood transfusion and changes of erythrocyte modality under microscope examination

ZHAOYan.

ZaozhuangCenterBlood,Zaozhuang277100,China

Objective To investigate the effect of time on the changes of blood plasma hemoglobin content and morphological of red blood cells under microscope. Methods Blood sample were stored at 2～6℃ cold room for 20 days and 30 days espectively, smeared blood stained by Switzerland was observed by microscope to get the percentage of spherocytosis. Blood samples were centrifuged gel in a test tube to determine the plasma hemoglobin content. Results The result show that plasma hemoglobin was (71.2±8.3)mg/L and the percent of spherocytosis ratio(>5%) was 3.33% for blood stored 20 days, while plasma hemoglobin was (106±10.5) mg/L and the percent of spherocytosis ratio(> 5%) was 10% for blood stored 30 days. There are much difference between storied for 20 days and 30 days in plasma hemoglobin content and the percent of red sphere blood, the difference was statistically significance (P<0.01) Conclusion There are significant changes of blood plasma hemoglobin content and morphological of red blood cells with different time, the microscopy should be developed as a simple method to test the quality of blood before Infusion.

Stored blood ; Hemoglobin; Erythrocyte; Microscopic examination

277100枣庄市中心血站