ELISA自动化检验影响因素探讨

李瑞丽 张颖 吴瑞霞

进入21世纪以后, 我国血液ELISA检验逐步由手工操作过渡为更方便、准确的自动化仪器检测。但在血液ELISA自动化检测过程中, 如果一些细微之处注意不到就可能造成假阳性、假阴性的产生, 影响实验结果的准确性。作者根据实际工作经验就ELISA试验检测结果出现偏差的常见原因进行总结分析, 以确保结果的准确, 提高血液检测质量。

1 人员与环境

1.1 操作人员素质 自动化仪器检测操作人员应具备扎实、过硬的血液ELISA检验基础知识和操作技能, 对计算机、机械、电子与光电技术和仪器的工作原理、程序有一定的了解,以便出现问题时及时应对。

1.2 熟读全自动仪器的说明书 彻底了解仪器的工作原理和使用注意事项, 仪器和用户软件的使用方法、仪器的维护程序与方法、使用中可能出现的故障及可能的原因等。

1.3 室温保证 实验室需配备空调、暖气、加湿器等设备,保证室温在规定的范围内, 每天测量并记录室内温湿度, 以防过冷或过热造成仪器报警不运行。

2 血液标本的处理

2.1 ELISA检验多用血清(血浆)标本, 标本的处理直接影响仪器的运行和检测结果, 应控制离心转速和离心时间, 使血清(血浆)标本离心分离彻底。

2.2 血液标本离心后, 应检查标本的离心情况, 防止血凝块、血细胞、纤维蛋白悬浮在血清(血浆)中, 避免全自动加样器向酶标板微孔中加入上述物质, 造成洗板头的吸液针堵塞而出现假阳性结果。

2.3 不能立即检测的血液标本放在2～8℃冰箱储存, 最好使用可监控报警的专用冰箱, 以防温度过高或过低对血液标本造成影响。

3 检验试剂的准备

3.1 查看试剂 应检查试剂的包装是否破损, 污染、潮湿；试剂是否浑浊、变色；试剂是否在有效期。遇到这些情况均应重新更换新的试剂。

3.2 试剂平衡 取出试剂盒中的酶标板和各组分, 在室温平衡30 min后, 再开启酶标板和各组分的包装, 开始使用。试剂是否平衡、平衡时间是否足够将直接影响试剂对弱阳性标本的检出。

3.3 酶标板检查 如果酶标板框架不规整、微孔条不平整,微孔内有塑料屑、泡沫屑等异物, 将影响洗板, 导致出现假阳性结果。

3.4 试剂盒清洗 全自动仪器使用的试剂盒应每周用刷子刷洗干净, 蒸馏水冲洗后晾干备用。阴阳对照及质控品也要及时更换, 以防时间过久影响实验结果。

4 标本加样

4.1 自动化仪器使用的一次性加样针要把针盒和一次性针放置到位, 要注意检查一次性针是否变形或不通。

4.2 注意观察加样针进入酶标板微孔的深度和分配速度,保证加样时液体不溅出、不挂珠, 确保加样准确。

4.3 加样后, 及时检查酶标板的加样情况, 查看微孔中有无血细胞、血凝块、纤维蛋白；标本量是否足够；应变色的微孔是否都已变色。如有异常, 应手工处理。

5 酶标板洗板

5.1 各厂家的洗液是根据各自试剂的条件配制的, 因此采用不配套的洗液常会得到不正常的反应结果, 包括本底升高,所以不同厂家的洗液不能混用。

5.2 洗液应按规定的倍数稀释使用。试剂盒提供的洗液是浓缩的, 过多稀释洗液, 会影响洗液的效果, 而使反应的本底升高。反之造成假阴性。

5.3 稀释洗液的水应该是新鲜的蒸馏水, 如果存放时间过长或受到灰尘等污染, 水中含钙镁离子增多使实验本底增高,灰尘等异物容易堵塞洗板针孔造成花板。

5.4 洗板时, 洗液应注满每孔, 如果加入的洗液液量不够,极易产生高值阴性和假阳性。不同试剂厂家的酶标板孔规格不一样, 洗板时一定要选择配套的板模式进行洗板, 以保证洗板效果。

5.5 严格按照说明书规定的次数, 浸泡时间进行洗板。如果次数少于规定要求, 没有按设洗板浸泡时间, 会使孔内多余的抗原(抗体)或酶结合物不能彻底去除, 引起本底升高和假阳性。

优质的试剂, 良好的仪器和正确的操作是保证ELISA试验检测结果准确可靠的必要条件。实际操作中, 除了选择的优良试剂、保证仪器设备的正常运转外, 必须严格执行试剂操作说明, 认真做好ELISA实验的每一步, 掌握影响实验检测结果的各类因素以及解决办法, 做好仪器设备的日常维护保养工作。必须以严谨的工作作风对待每一份检测标本, 才能保证检测质量和血液产品的安全。