急性淋巴细胞白血病中Bcl-2的表达与早期化疗效果的关系分析

杜春辉徐 丽

（1 新疆喀什地区第一人民医院 新疆 喀什 844000；2 广州中山大学血液学研究所 广东 广州510630）

急性淋巴细胞白血病中Bcl-2的表达与早期化疗效果的关系分析

杜春辉1徐 丽1

（1 新疆喀什地区第一人民医院 新疆 喀什 844000；2 广州中山大学血液学研究所 广东 广州510630）

急性淋巴细胞白血病；Bcl-2表达；化疗；效果

急性淋巴细胞白血病（acute lymphocyte leukemia ，ALL）属造血干细胞异常增生的恶性肿瘤疾病，其发病机制目前尚不清楚[1]。一般认为凋亡基因参与许多恶性肿瘤细胞的增殖调控[2]。Bcl-2是主要的抗凋亡基因，存在于人体多种细胞中，如未成熟的造血细胞、神经细胞、上皮细胞及多种癌株中，其编码的Bcl-2蛋白主要位于细胞的核膜、线粒体膜和内质网膜上[3]。Reed的研究表明，Bcl-2的表达状态可决定细胞的生存和死亡，其编码的Bcl-2蛋白能有效阻止多因素介导的细胞凋亡[4]。多种肿瘤如淋巴瘤、神经母细胞瘤、乳腺癌中Bcl-2基因均有高表达，表明肿瘤的发生与Bcl-2基因的异常表达有一定关系。本研究采集32例急性淋巴细胞白血病患者的骨髓，检测bcl-2表达水平，并分析其与疾病早期化疗效果的相关性，以探讨该凋亡基因表达与急性淋巴细胞白血病临床治疗的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2011年10月至2012年10月新疆喀什地区人民医院血液科32例ALL患者，男22例，女10例；年龄9～78岁，平均59岁，符合FAB诊断标准。FAB分型：L121例，L28例，L33例。对照组选择自愿受试的骨髓象正常的非白血病患者标本15例，近期均未应用过糖皮质激素及其它免疫抑制剂，其中男8例，女7例，年龄14～72岁，平均60岁。两组对象构成比无显着性差异。

1.2 分组原则

治疗前按照危险因素评定标准将所有入选病例分为不同等级，其中高危组4例，中危组7例，低危组21例。危险因素包括年龄、免疫分型、染色体核型、白细胞计数、髓外浸润、分子生物学改变。治疗上采用标准化疗方案，ALL的诱导缓解方案为DVLP或CODP（D：柔红霉素、V/O：长春新碱、L-Asp：左旋门冬酰胺酶、P：强的松、C：环磷酰胺）。所有病例的治疗反应都依据d8泼尼松试验（即泼尼松60mg/m2连用7d，联合鞘内注射1次）和/或d19骨髓检测来确定。

1.3 实验方法

在化疗前及d19所有入选病例均抽取2mL骨髓，使用Ficoll单核细胞分离液进行分离涂片，使用乙醇乙醚固定液进行固定，并用锡纸封存于4℃冰箱内备用。染色采用S-P免疫组化法，SP通用试剂盒（SP9000）及单克隆抗体Bcl-2均购自北京中山生物技术有限公司，系美国ZYMED公司生产。使用正常羊血清进行封闭，滴加一抗后在4℃湿盒内过夜（Bcl-21：100），继而滴加二抗（羊抗鼠IgG抗体1∶200），1h后滴加链酶卵白素在37℃下孵育，链酶卵白素使用1∶300稀释的辣根过氧化酶标记。每一步骤后均以PBS缓冲液冲洗，镜下控制DAB显色，然后以流水冲洗，冲洗后使用苏木素复染。结果判定：阳性细胞为细胞质和（或）细胞核着色呈棕褐色或棕黄色者，并计算1000个细胞中的阳性细胞数及阳性细胞表达率。

1.4 统计学分析

数据均采用SPSS软件进行相关分析、t检验及F检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Bcl-2表达水平与初治ALL临床相关危险因素的关系与对照组相比，ALL组Bcl-2蛋白的表达水平明显增高，差异有统计学意义（t=312558，P＜0101）；不同危险分层的患者，治疗前后组间比较采用F检验，F分别为314317、411132，三组均有显著性差别P＜（0.05），见表1。

2.2 Bcl-2表达水平在儿童ALL缓解前后不同的早期治疗反应的比较32例患者，早期治疗反应好者23例，早期治疗反应差者9例。儿童ALL缓解前后早期治疗反应好组较反应差组均有显著性差异，差异有统计学意义（P＜0.01、0.05）；结果表明，早期治疗反应好者，缓解后Bcl-2蛋白表达水平明显降低治疗期，差异有统计学意义（t=117309；P＜0.05），反应差者Bcl-2蛋白表达水平较治疗前降低，但无显著性差异（t=111875；P＞0.05），不过其Bcl-2蛋白表达水平仍显著高于对照组（t=214164；P＜0.05），见表2。

3 讨 论

Bcl-2是主要的抗凋亡基因，位于18号染色体长臂2区1带（18q21），由230kb组成。共编码2种蛋白质，即p26-bcl-2A和p22-bcl-2B，目前研究较多的是p26-bcl-2A。Bcl-2家族成员至少有一个名为Bcl-2同源（BH）区域的保守结构。基于BH区域的功能和数量，Bcl-2家族被分为三个亚组，他们都是重要的凋亡调节蛋白。抗凋亡的家族成员包括Bcl-2和Bcl-XL，含BH1-4。研究发现，多种恶性肿瘤如胃肠道肿瘤[5]、肾癌[6]、肝母细胞瘤[7]等中Bcl-2均呈高表达状态，且高表达的Bcl-2可抑制细胞凋亡，使细胞生长加速，进而导致恶性肿瘤的发生发展。白血病的体外研究表明，在Bcl-2高表达的患者中，白血病细胞生存时间明显延长，Bcl-2可抑制或阻断由多种因素介导的细胞凋亡[8]。本组实验表明，与正常对照组相比，ALL患者中Bcl-2阳性表达率明显增高，并且不同的临床危险因素分层差异有统计学意义，提示：与体外研究相似，Bcl-2对ALL预后有至关重要的影响。ALL预后的评判主要取决于早期治疗反应的好坏，治疗反应差者提示单纯化疗耐药，属高危型，预后不良。本组研究表明，在早期治疗反应好组与早期治疗反应差组的两组病例中，Bcl-2的阳性表达有显著性差异，并且反应差组治疗后Bcl-2表达状况与治疗前相比无显著性差异，与对照组及治疗后缓解组相比仍明显增高，提示Bcl-2蛋白表达可作为临床评估ALL预后的一个重要的高危因素，用于早期判断疾病的预后，其动态监测结果可能更有意义。

[1] 欧阳仁荣,沈志祥.血液肿瘤学[M].北京:人民卫生出版社,1999: 11-43.

[2] Plaetzer K, Kiesslich T, Oberdanner CB, et al.Apoptosis following photo-dynamic tumor therapy: induction, mechanisms and detection [J].Curr Pharm Des,2005,11(9):1151.

[3] Campos L, Rouault JP, Sabido O, et al.High expression of bcl-2 pro-tein in acute myeloid leukemia cells is associated with poor response to chemotherapy.Blood,1993,81(11):3091-3096.

[4] Reed JC.Bcl-2: prevention of apoptosis as a mechanism of drug resistance[J].Hematol Oncol Clin North Am,1995,9(2):451-473.

[5] Kim R, Emi M, Tanabe K, et al.Therapeutic potential of antisense Bcl-2 as a chemosensitizer for patients with gastric carcinoma[J]. J Clin Oncol,2005, 23(16S):4050.

[6] Molto L, Rayman P, Paszkiewicz-Kozik E, et al .The Bcl-2 transgene protects T cells from renal cell carcinoma-mediated apoptosis[J].Clin Cancer Res,2003,9(11):4060-4068.

[7] Lieber J, Kirchner B, Eicher C, et al .Inhibition of Bcl-2 and Bcl-X enhances chemotherapy sensitivity in hepatoblastoma cells[J].Pediatr Blood Cancer,2010,55(6):1089-1095.

[8] Reed JC.Bc-l2: prevention of apoptosis as a mechanism of drug resistance[J].Hematol Oncol Clin North Am,1995,9(2):451-473.

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1671-8194（2013）19-0212-02