荧光定量PCR 诊断66例肾结核的临床价值探讨

袁美琴

江西省鹰潭市人民医院，江西 鹰潭 335000

荧光定量聚合酶链反应(PCR)是一种新定量试验技术，能够通过荧光标记或者荧光染料特异性的探针，标记跟踪PCR产物，能够对反应过程进行实时在线监控，结合相应软件对产物给予分析，对待测样品的浓度进行计算。荧光定量PCR准确、快速，能够为诊断病原微生物提供良好的实验技术，提高了尿中结核分枝杆菌的阳性检测率，被广泛应用于临床诊断中［1］。选取66例疑为肾结核患者和10例正常人群使用荧光定量PCR诊断的效果进行对比观察，报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料 选取我院2010年1月至2012年10月收治的66例疑为肾结核患者使用荧光定量PCR诊断作为观察组，其中男性42例，女性24例，年龄17～70岁，病程20天－12年。从患者的临床症状分析，膀胱刺激症患者占40例，肉眼血尿患者占18例，腰痛症状患者占19例，镜下血尿患者占21例，伴发热等全身症状的患者占4例，伴尿痛、尿频以及血尿症状的患者占20例;把同时期10例健康体检者作为对照组，男性7例，女性3例，年龄18～72岁。两组诊断者均给予荧光定量PCR诊断，在年龄、性别等基本资料上差异性无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 先取1ml样品，以每分钟10000r的速度进行离心10分钟，弃上清之后沉淀，加用1ml无菌生理盐水打匀，以每分钟10000r的速度进行离心10分钟，弃上清之后沉淀，加用IDNA提取液50μl充分混匀，使用金属浴10分钟，取2μl上清液做PCR反应。另外取阳性和阴性质控品40μl进行测定，处理方法同上。

1.3 判定标准 对两组诊断方法的结构进行判定，Ct值为30则表明实验的结果呈阴性;Ct值在30以下则表明检测结果为阳性。

1.4 统计学方法 采用软件SPSS18.0对观察的数据进行统计学处理，使用χ2对计数数据进行检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

66例疑为肾结核患者中，尿培养为阳性的患者占34例，阳性率为51.5%;检测出来结合分枝杆菌患者占42例，阳性率为63.6%;肺结核性泌尿系统感染患者占14例，其样品均是阴性。对照组10例健康者均为阴性，观察组患者在尿中结核分枝杆菌的检出率明显比对照组高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

肾结核在泌尿生殖系统中有非常重要的地位，泌尿生殖系的其他器官结核多继发在肾结核，因此对肾结核患者给予早期诊断，能够为临床治疗提供较为准确的信息，提高临床疗效。肾结核的临床诊断方法较多，X线检查以及根据患者的临床表现对肾结核患者进行诊断，极易造成漏诊和误诊;尿沉渣的抗酸杆菌呈现的阳性率较低，不能够对结合杆菌以及其他抗酸杆菌进行有效鉴别;结核菌素试验被广泛应用于临床诊断中，但是非结核分枝杆菌也会由于致敏作用导致假阳性。荧光定量PCR技术作为一种新型的检测技术［2］，其优点主要包括核酸高效扩增、高特异性的探针技术、高敏感性的光谱技术以及高精确定量，能够对PCR过程中的荧光信号变化进行直接探测，从而获得定量结果。

荧光定量PCR准确、快速，能够为诊断病原微生物提供良好的实验技术，提高了尿中结核分枝杆菌的阳性检测率，被广泛应用于临床诊断中。荧光定量PCR能够对抗结核治疗过程中结核菌量变化进行有效反映，但是在采集标本的过程中也要注意避免标本间的相互污染，掌握好标本处理前的实验条件［3］。上述结果显示:66例疑为肾结核患者中，尿培养为阳性的患者占34例，阳性率为51.5%;检测出来结核分枝杆菌患者占42例，阳性率为63.6%;肺结核性泌尿系统感染患者占14例，其样品均是阴性。对照组10例健康者均为阴性，观察组患者在尿中结核分枝杆菌的检出率明显比对照组高(P＜0.05)。荧光定量PCR应用于诊断肾结核效果显著，能够提高尿中结核分枝杆菌的阳性检测率，值得临床推广应用。

［1］李静，王晓平，肖慧霞，等.荧光定量PCR诊断肾结核的临床应用价值［J］.宁夏医学杂志，2011，33(10):1019－1020.

［2］李文涛，王俊东，杨利峰等.实时荧光定量PCR技术及其应用［J］.生物技术通讯，2009，17(1):112－114.

［3］郭杨，陈世界，郭万柱等.荧光定量PCR技术及其应用研究进展［J］.动物医学进展，2009，30(2):78－82.