连翘抗菌、抗病毒的药理作用研究△

史洋，王小平，白吉庆，龙凯花

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

连翘抗菌、抗病毒的药理作用研究△

史洋，王小平，白吉庆*，龙凯花

(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)

近年来关于连翘在抗菌、抗病毒方面的研究报道不断增多，特别是应用连翘在抗疫病方面的作用引起了人们的广泛高度关注。作者对近年连翘在抗菌、抗病毒方面的研究进行系统归纳，以期为阐明连翘清热解毒作用机理进行探讨，并提出要研究不同组分的药效和机制，结合体内、体外及临床疗效对连翘抗菌、抗病毒的效果进行全面评价的建议。

连翘；抗菌；抗病毒

连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”；果实熟透时采收，晒干，除去杂质，习称“老翘”。具有清热解毒，消肿散结、疏散风热的功能，用于痈疽，瘰疬，乳痈，丹毒，风热感冒，温病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋涩痛[1]。连翘是我国40种大宗药材之一，临床上广泛用于由细菌、病毒引起的感染类疾病，双黄连口服液、双黄连粉针剂、清热解毒口服液、连草解热口服液、银翘解毒冲剂、Vc银翘片等以连翘为主要原料药制备成的中药制剂被广泛应用。作者就连翘抗菌、抗病毒研究报道进行系统归纳，以期为进一步的研究和开发提供参考。

1 抗菌作用研究

1.1 对大肠杆菌的作用

李德成等[2]用连翘的提取液，采用纸片法，以抑菌圈大小为参考指标，观察抑菌效果。研究结果显示水提液,30%、50%、70%、95%乙醇提取液的抑菌圈分别为9.5，10.0，12.2，9.3，10.1 mm。马雪梅等[3]用不同极性的溶剂提取连翘，用K-B纸片扩散法对提取物的抑菌活性进行了初步研究，研究结果表明，连翘的乙酸乙酯提取液具有抑制大肠杆菌的作用。

1.2 对金黄色葡萄球菌的作用

虹韬等[4]用连翘提取液，采用纸片法，以抑菌圈大小为参考指标，研究结果显示水提液,30%、50%、70%、95%乙醇提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为15，16.33，17.0，17.31，19.07 mm。徐坤[5]采用滤纸片扩散法测定抑菌效果，结果表明连翘挥发油对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大于10 mm，具有中、强度抗菌活性。

1.3 对伤寒沙门菌的作用

程晓莉等[6]用连翘乙醇提取物腹腔注射感染鼠伤寒的小鼠，观察小鼠的生存时间，脾脏的重量指数，脏器菌落计数，检测血清中抗体IgG水平，用ELISA法测定小鼠脾脏释放的细胞因子，结果显示经连翘乙醇提取物治疗的小鼠，与对照组相比，生存时间均延长，脾脏重量指数均降低，脾脏菌落计数均降低，血清中抗体IgG水平均升高，脾脏细胞分泌细胞因子IFN-γ水平均上升。说明连翘乙醇提取物能够通过增强抗体的产生，调节细胞因子的释放，增强宿主的体液免疫和细胞免疫功能，保护宿主抵抗胞内菌的感染。

1.4 对大肠埃希菌的作用

任玲玲等[7]用连翘干粉的双蒸水溶液作用于多重耐药性大肠埃希菌，通过对连翘作用后的多重耐药性大肠埃希菌AcrA基因产物的序列分析，可以看出多重耐药性大肠埃希菌AcrA基因发生了24个碱基突变，说明连翘能够改变大肠埃希菌AcrA基因的外排系统结构，使大肠埃希菌对环境的适应能力及抗菌药耐药水平下降，从而达到抑制大肠埃希菌的作用。

1.5 对多重耐药性鲍曼不动杆菌的作用

黄瑞玉等[8]用对环丙沙星外排表型和外排泵编码基因均为阳性的多重耐药性鲍曼不动杆菌作为实验菌株，应用琼脂对倍稀释法检测连翘水煎剂作用前后环丙沙星对细菌的最小抑菌浓度(MIC)，选取作用前后MIC变化较大的代表菌株进行基因测序，并将作用前后的测序结果进行比对分析。结果显示连翘水煎剂可降低环丙沙星对多重耐药性鲍曼不动杆菌的MIC；测序分析表明，连翘作用后鲍曼不动杆菌adeB基因序列共有12个碱基突变；突变发生氨基酸替换的有E140V、K145I、A147V、K150N、A151V、K153I。说明连翘水煎剂可引起鲍曼不动杆菌的主动外排泵编码基因ade-ABC序列发生突变，抑制鲍曼不动杆菌的主动外排泵，从而达到抑制多重耐药性鲍曼不动杆菌的作用。

1.6 对内毒素的作用

傅强等[9]用致病大肠杆菌制造大鼠腹膜炎模型，分别采用庆大霉素、连翘提取液进行治疗，观察各组动物血浆中IL-1、TNF-ɑ水平及其肝组织TNF-ɑ、IL-1 mRNA原位杂交结果。结果显示连翘组血浆中IL-1、TNF-ɑ水平和肝组织TNF-ɑ、IL-1 mRNA表达水平低于庆大霉素组和腹膜炎模型组。说明连翘能抑制细菌内毒素诱发的炎性因子的过度表达，从而具有拮抗内毒素的作用。王耀等[10]以脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞，用连翘提取物进行干预，测定NO和TNF-ɑ含量，Western blot法检测iNOS蛋白表达水平。结果显示连翘在12.5～100 μg·mL-1浓度范围内可明显抑制RAW264.7细胞释放TNF-ɑ及NO，并可显著抑制iNOS蛋白表达；说明连翘通过下调iNOS蛋白表达，抑制炎症介质TNF-ɑ及NO而发挥抗炎作用。

1.7 对表皮葡萄球菌的作用

李仲兴等[11]采用连翘提取液对140株表皮葡萄球菌进行体外抗菌活性的测定，结果显示连翘对表皮葡萄球菌能抑制50%菌株的最低细菌浓度(MIC50)为0.122 g·L-1，抑制90%菌株的最低抑菌浓度(MIC90)为0.244 g·L-1。说明连翘对表皮葡萄球菌具有较好的体外抑菌效果。官妍等[12]采用体外构建表皮葡萄球菌生物膜、XTT减低法评价连翘苷对表皮葡萄球菌生物膜内细菌代谢的影响，显微镜下观察用药后表皮葡萄球菌生物膜形态和结构改变。结果显示连翘苷对表皮葡萄球菌生物膜菌的SMIC50为31.25 μg·mL-1，在显微镜下观察，连翘苷使部分表皮葡萄球菌被膜的形态发生改变。说明连翘苷对生物膜菌的代谢和生物膜形态均有显著影响。

2 抗病毒作用研究

2.1 对甲型流感病毒的作用

段林建等[13]用甲型流感病毒核蛋白(NP)基因转染Hela细胞，用甲型流感病毒胶体金法检测连翘苷对转染后细胞内和上清核蛋白表达情况，用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Hela细胞内NP基因的拷贝数。重复4次转染后48 h连翘苷组NP基因表达量为(2.1±0.3)×105拷贝数·μL-1，NP重组质粒组NP基因表达量为(61.5±15.0)×105拷贝数·μL-1，连翘苷组NP基因表达量低于NP重组质粒组。说明连翘苷可以抑制甲型流感病毒NP基因转染后表达。

2.2 对人巨细胞病毒的作用

张丹丹等[14]用细胞病变法和MTT法，检测连翘、槲皮素抗人巨细胞病毒的最小有效浓度，并与更昔洛韦进行比较。结果显示更昔洛韦、连翘及槲皮素的最小有效浓度分别为10，30，0.3 mg·L-1，槲皮素抗人巨细胞病毒的效果远高于更昔洛韦和连翘。证明连翘尤其是槲皮素具有良好的体外抗人巨细胞病毒效果。

2.3 对乙型脑炎病毒的作用

洪文艳等[15]以白纹伊蚊C6/36细胞为宿主细胞，阿昔洛韦为阳性对照药物,通过细胞病变效应(CPE)观察法和改良MTT法来测定药物抗乙型脑炎病毒对细胞的吸附作用以及药物对乙型脑炎病毒在细胞内复制增殖的抑制作用。结果显示连翘浓煎液在16.0 mg·mL-1以上浓度用药时有抗乙型脑炎病毒吸附细胞的作用，也能抑制乙型脑炎病毒在细胞内的复制增殖，半数有效浓度为7.6 mg·mL-1。说明连翘浓煎剂在体外细胞模型中有较好的抗乙脑病毒感染作用，作用机理可能是干扰病毒对细胞的吸附及抑制病毒在细胞内的复制增殖。

2.4 对呼吸道合胞病毒的作用

田文静等[16]采用细胞培养技术，以病毒唑为阳性对照药，比较观察连翘水提液对呼吸道合胞病毒(RSV)引起的细胞病变的抑制作用。结果显示连翘水提液抗呼吸道合胞病毒的半数有效浓度(EC50)为0.15 mg·mL-1；于感染呼吸道合胞病毒后0，2，4，6，8 h加入连翘水提液均有抑制呼吸道合胞病毒活性的作用。说明连翘在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用。陈杨等[17]将连翘水提液经水提醇沉法、大孔吸附树脂柱层析法，洗脱剂洗脱分离得到连翘抗病毒有效部位LC-4，采用细胞病变效应(CPE)观察法和中性红实验法，以利巴韦林为阳性对照药，测定LC-4在最大无毒浓度下于Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的治疗作用。结果显示LC-4的半数有效浓度(EC50)为2.11 μg·mL-1。说明连翘抗病毒有效部位LC-4在体外对感染呼吸道合胞病毒的Hela细胞有明显的治疗作用。

2.5 对单纯胞疹病毒的作用

刘颖娟等[18]通过细胞培养和活细胞染色计数法(MTT)，观察研究连翘的有效成分在Hep-2细胞上抗单纯胞疹病毒Ⅰ型的作用。结果显示连翘4个部位的有效成分均有不同程度的抑制病毒复制的作用，其ED50分别为8.63、2.65、3.50、8.90 mg·mL-1。

3 讨论

中药连翘抗菌、抗病毒的研究结果表明，连翘不仅具有显著的抗菌、抗病毒作用，而且还具有逆转耐药菌的作用。由于其成分复杂多样，决定其作用机制的复杂性和多样性，因此，有必要对连翘的全组分进行提取，定向分离，研究不同组分的药效和机制，尤其是提高其抗菌、抗病毒的有效成分的含量。目前大多数有关连翘抗菌、抗病毒的研究都是体外试验，体内试验还相对较少，应选择合适的实验方法，结合体内、体外及临床疗效对连翘抗菌、抗病毒的效果进行全面评价。在临床治疗中，抗菌药的使用频率较高，但滥用现象也很普遍，导致了药物不良反应和耐药菌的增加，降低了药物的疗效，造成药品浪费。中药抗菌、抗病毒由于其特殊的作用机制以及不易产生耐药性等特点，愈发受到学者们的关注，成为研究的热点[19]。

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StudyonAnti-bacterial、Anti-viralEffectsoftheForsythiasuspensa

SHI Yang，WANG Xiao-ping，BAI Ji-qing*，LONG Kai-hua

(ShanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang712046，China)

Recently，the reports on the study about the antiviral，antibacterial effects ofForsythiasuspensaare increasing，especially its application in epidemic have attracted wide attention at present.In this paper，we systematically sum up the research findings about the antiviral，antibacterial functions ofForsythiasuspensa，to clarify the mechanisms ofForsythiasuspensain clearing heat and removing toxin.We try to investigate the possible pharmacodynamic effects and mechanisms of different components fromForsythiasuspensa，and furtherly put forward the overall evaluation methods about the antiviral，antibacterial effects ofForsythiasuspensaby in vivo，in vitro test and clinic trial.

Forsythiasuspensa；Anti-bacterial；Anti-viral

2013-05-02)

国家科技型中小企业技术创新基金(11C26216103652)

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白吉庆，副主任中药师，从事中药资源开发与抗肿瘤机制研究,Tel：(029)38184880，E-mail：baijiqing323@126.com