大黄蛰虫丸中水蛭薄层层析鉴别

摘 要：目的：大黄蛰虫丸中的水蛭进行薄层层析（TLC分析）。方法：采用薄层层析法。结果：在展开系统中，水蛭中所含的有效成分能分离，并得到清晰、特异性的斑点。结论：该法为大黄蛰虫丸的定性鉴别和质量标准提供了依据。

关键词：大黄蛰虫 水蛭 薄层

中图分类号：R692.5 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2012）11（b）-0254-01

大黄蛰虫丸的药理作用：主要有改善微循环，增加心肌营养血流量，降低血液粘度，抑制血栓形成和血小板凝集，抗动脉粥样硬化，防治肠粘连，保护慢性肝损伤，促进体内血决的吸收，减少血栓重量等。

药用水蛭的物理鉴别：体狭长稍扁，略呈圆柱形，体长3～5cm，宽4～5mm（固定）。日本医蛭背面绿中带黑，有黄色纵线5条。腹面子坦，灰绿色，无杂色斑纹。体环数103；环带不显著，占15环。雄生殖孔在31～32环沟间；雌孔在36～37环沟间。眼5对，列成弧形。体前端腹面有一前吸盘。食道纵褶6条，颚3片，半圆形，颚齿发达。后端腹面有一后吸盘，碗状，朝向腹面，肛门在其背侧。

药用水蛭的化学成分：含17种氨基酸，其中人体必需氨其酸7种，占总氨基酸含量39%以上。以谷氨酸（glutamic acid）、天冬氨酸（asparti acid）、亮氨酸（leucine）、赖氨酸（lysine）和缬氨酸（valine）含量较高。氨基酸总含量约占水蛭干重的49%以上。此外，水蛭主要含蛋白质、肝素（heparin）、抗凝血酶（antithrombin），新鲜水蛭唾液中含有一种抗凝血物质名水蛭素。（hirudin）另外水蛭还含有人体必需常量元素钠、钾、钙、镁等，并且含量较高。还含有铁、锰、锌、硅、铝等共28种微量元素。

药用水蛭的作用：（1）抗栓作用；（2）降低血脂作用；（3）改善微循环；（4）抗早孕作用，对于治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等有功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病和抗癌方面具有特效。

1 仪器与试药

1.1 仪器

超声波发生仪器（上海必能信超声有限公司），三用紫外灯（上海顾村电光仪器厂）。

1.2 试药

大黄蛰虫丸符合《中国药典》2010年版规定，并经鉴室鉴定为正品。对照药材水蛭对照药材，中国食品药品检定研究院生产，批号：200904。其它试剂均为分析纯。

2 试验方法

2.1 试验方法1

（1）水蛭薄层层析样品制备：取本品水蜜丸1.5 g，加水10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液用正丁醇提取2次，每次5 mL，弃去正丁醇液，水液蒸干。加乙醇5 mL溶解作为供试品溶液。

（2）对照药材溶液的制备：另取水蛭对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

（3）阴性样品溶液的制备：取缺水蛭的本品，按样品液制备方法制备。

（4）水蛭薄层层析分析：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μL，分别点于同一含0.2%羧甲基纤维素钠溶液为粘合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇—冰醋酸—水（3∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%茚三酮溶液，于100 ℃烘约5 min。

（5）结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，显相同的红色斑点，而阴性对照品无相应斑点。

2.2 试验方法2

（1）水蛭薄层层析样品制备：取本品1.5 g，加乙醇10 mL，加热回流30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

（2）对照药材溶液的制备：另取水蛭对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

（3）阴性样品溶液的制备：取缺水蛭的本品，按样品液制备方法制备。

（4）水蛭薄层层析分析：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μL、对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇—乙醇—冰醋酸—水（4∶1∶1∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.2%三酮试液，热风吹至斑点显色清晰。

（5）结果：供试品色谱中，分别在与对照药材色谱及两种对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，而阴性对照品无相应斑点。

3 讨论

（1）以上两种实验方法采用薄层层析法，对大黄蛰虫丸中的水蛭进行进行了定性鉴别，方法简便，灵敏，准确，可作为本品质量控制标准。

（2）在供试品项下分离很好的斑点和标准品相同的位置上，对照品、供试品呈相同的荧光斑点，分离效果、重现性好。

（3）本试验对《中国药典》2010版一部中的大黄蛰虫丸增加了水蛭的鉴别项。增加了对大黄蛰虫丸的可控性。

参考文献

[1]阴健.中药现代研究与临床应用[M].北京：中医古籍出版社，1997∶181.

[2]张贵君.常用中药鉴定大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993，12∶716.

[3]刘训红，王玉（尔）/（玉），房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别[M].天津：天津科学技术出版社，1990.

[4]《中国药典》2010版一部，大黄蛰虫丸[M].北京：中国医药科技出版社，2010，1.