HPLC测定可达灵片中脱氢延胡索碱的含量

彭艳红，李嫦玲，刘新义

（1.益阳市第一中医医院，湖南 益阳 413000；2.中南大学湘雅二医院，湖南 长沙 410011）

HPLC测定可达灵片中脱氢延胡索碱的含量

彭艳红1，李嫦玲1，刘新义2

（1.益阳市第一中医医院，湖南 益阳 413000；2.中南大学湘雅二医院，湖南 长沙 410011）

目的 建立高效液相色谱法测定可达灵片中脱氢延胡索碱含量的方法。方法 采用Aglient 1200高效液相色谱仪；Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）； 流动相为 0.05moL/L 磷酸盐溶液-乙腈 （68∶32）， 流速为1.0 ml/min；检测波长为340 nm。结果 脱氢延胡索碱在0.1～1μg进样量内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9997)，平均回收率为99.3%，RSD为1.0%。结论 本方法简便、可靠、重复性好，可用于可达灵片的质量控制。

可达灵片；脱氢延胡索碱；高效液相色谱法

可达灵片为延胡索的中药制剂，主要药理成分为脱氢延胡索碱与延胡索乙素，临床上用于冠心病、心绞痛和急性心肌梗死等疾病的治疗[1]。现代药理研究结果表明脱氢延胡索碱可明显扩张冠状动脉、增加冠脉血流，从而改善心肌缺血状态；而延胡索乙素具有镇痛、镇静作用[2-3]。目前报道可达灵片中脱氢延胡索碱的含量测定方法仅见纸色谱法，存在重复性差、精密度低等缺点[4]。为了更好的控制该制剂质量，本文选择脱氢延胡索碱为指标，采用高效液相色谱法（HPLC）对其进行含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Aglient 1200高效液相色谱仪 （美国安捷伦科技有限公司，配备G1313A自动进样器和G1315B二极管阵列检测器，G1311A四元梯度泵，G1316A柱温箱，Aglient色谱工作站）；FC204型电子分析天平（西安精大检测设备有限公司）；HH-24电热恒温水浴锅（湖南东大科学仪器设备有限公司）。

1.2 试药

可达灵片（浙江康恩贝制药股份有限公司生产，批号：20111215，20111217，20111219，20111221，20111223）；脱氢延胡索碱对照品（中南大学药学院天然药化实验室自制，湖南省食品药品检验研究院标化，纯度99.2%)；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺等试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5-6]

色谱柱：Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.05moL/L 磷酸盐溶液（0.05moL/L磷酸二氢钾溶液用0.05moL/L磷酸调节pH 3.0）-乙腈（68∶32），流速：1.0 mL/min，检测波长：340 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取药粉约1 g，置100 mL棕色量瓶中，加0.1moL/L盐酸甲醇溶液至相应刻度，称重，回流提取1 h，取出，冷却后称重，再用0.1moL/L盐酸甲醇溶液补足损失的溶剂，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取脱氢延胡索碱对照品10.2mg置100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方配比称取除延胡索以外的药用辅料，按制备工艺制成缺延胡索的阴性样品，同法制备缺延胡索的阴性样品溶液。

2.2.4 系统适应性试验 分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按“2.1色谱条件”进行分析。按上述色谱条件进样测定，记录色谱图，结果脱氢延胡索碱 (t=7.35min)与其他组分别达到了基线分离，峰形对称，且阴性无干扰，专属性良好，见图1。

2.3 色谱条件[5-6]

色谱柱：Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.05moL/L 磷酸盐溶液（0.05moL/L磷酸二氢钾溶液用0.05moL/L磷酸调节pH 3.0）-乙腈（68∶32），流速：1.0 mL/min，检测波长：340 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。在此色谱条件下，记录供试品溶液和对照品溶液色谱图（见图1），以脱氢延胡索碱计算理论板数应不低于3000，分离度大于1.5，峰形对称。

图1 脱氢延胡索碱对照品及可达灵片样品HPLC图谱

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分别置 10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进样10 μL，注入液相色谱仪，记录脱氢延胡索碱峰面积。以进样量（X）对峰面积（Y）作图，得到标准曲线。回归方程为：

表明脱氢延胡索碱在进样量0.1～1 μg范围内的线性关系良好。

2.4.2 精密度试验 精密吸取稀释2倍的对照品溶液10 μL，连续进样6次。结果脱氢延胡索碱峰面积的RSD为0.8%(n=6)，表明该仪器的精密度良好。

2.4.3 稳定性试验 取同一份供试品溶液，于室温放置 2、4、8、12、16、18 h 后进样，测定脱氢延胡索碱峰面积，RSD为1.3%，结果表明供试品溶液在18 h内基本稳定。

2.4.4 重复性试验 取同一批号(20111219)可达灵片药粉5份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，进样，测定脱氢延胡索碱峰面积，并计算样品平均含量为4.82mg/g，RSD为1.7%(n=5)，表明该方法重复性较好。

2.4.5 回收率试验 取同一批号(20111219)已知含量的可达灵片(脱氢延胡索碱含量为4.82mg/g)粉末约0.25 g，精密称定，平行5份，置50 mL棕色量瓶中，各份分别精密加入对照品溶液(脱氢延胡索碱浓度为0.102mg/mL)10 mL，继续添加0.1moL/L盐酸甲醇溶液至相应刻度，其余同“2.2.1供试品溶液的制备”，进样，测定脱氢延胡索碱峰面积，计算回收率，结果如表1。脱氢延胡索碱平均回收率为99.3%和 RSD 为 1.0%(n=5)。

表1 加样回收率试验 （n=5）

2.5 样品的含量测定

精密称取5批可达灵片样品粉末约1 g（每批平行两份），按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，以上述色谱条件进行含量测定，结果见表2，批间平均含量为2.45mg/片。

表2 样品含量测定 （n=5）

3 讨论

在实验过程中，笔者曾比较过用乙醇、50%乙醇、甲醇、50%甲醇和0.1moL/L盐酸甲醇溶液等5种溶剂进行样品的回流提取，结果发现以0.1mol/L盐酸甲醇溶液提取脱氢延胡索碱的含量最高，故选择该溶液作为提取溶剂。

脱氢延胡索碱为生物碱成分，笔者曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水-三乙胺、甲醇-乙腈-磷酸水系列流动相，结果该成分均存在严重的拖尾现象。本研究参照文献报道[5，7]，采用乙腈-0.05moL/L磷酸盐溶液 （0.05moL/L磷酸二氢钾溶液用0.05moL/L磷酸调节 pH 3.0）（32∶68）作为流动相，结果脱氢延胡索碱峰型对称，分离度高，保留时间短，且样品也比较稳定，因此被采用。

试验结果表明，本研究建立的HPLC测定脱氢延胡索碱含量，具有样品处理简单，测定结果可靠，可用于可达灵片的质量控制。

[1]王五保，吉信宾，徐玉欣，等.可达灵片治疗不稳定性心绞痛42例临床观察[J].河南职工医学晚学报，2011，23(4):417-418.

[2]刘骏鸿.可达灵片治疗冠心病心绞痛疗效观察[J].现代中西医结合杂志，2005，14(24):3246.

[3]李绍敏.可达灵片治疗冠心病心绞痛疗效分析[J].浙江中西医结合杂志，2001，11(4):226-227.

[4]包丽霞，包家范.纸色谱法测定可达灵片脱氢延胡索碱含量[J].实用中医药杂志，1999，15(12):64.

[5]姜舜尧.高效液相色谱法测定元胡止痛片中脱氢延胡索碱的含量[J].中国中药杂志，2000，25(8):479-481.

[6]商小金，钱俊青，郭 辉.响应面法优化延胡索生物碱乙醇提取工艺研究[J].林业化学与工业，2010，30(2):32-36.

[7]陈峰阳，叶益萍，李晓誉，等.HPLC测定元胡药材中脱氢延胡索碱的含量[J].中国现代应用药学杂志，2009，26(1):58-60.

Determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC

PENG Yan-hong1,LI Chang-ling1,LIU Xin-yi2
(1.First Traditional Chinese Medicine Hospital of Yiyang,Hunan 413000,China;2.Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,Hunan 410013,China)

Kedaling Tablets； dehydrocorydaline；HPLC

R284.2

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2012.09.009.037.03

〔Absrract〕Objective To establish a method for the determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC.Methods Aglient 1200 HPLC with Diamonsil C18column(4.6mm×250mm， 5μm)was used,the mobile phase was 0.05moL/L phosphates-acetonitrile(68:32)(v/v)，the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 340 nm.Results Dehydrocorydaline showed a good linear relationship with peak area integral value within 0.1～1.0 μg(r=0.9997).The average recovery was 99.3%，and RSD was 1.0%.Conclusion The method was simple， reliable and reproducible for the quality control of Kedaling Tablets.

2012－06－12

彭艳红（1970-），女，湖南益阳人，副主任药师，主要从事药事管理与中药的研究与检验。

（本文编辑 杨 瑛）