男性Y染色体amelogenin、DYS456及DYS458缺失1例分析

王伟妮 杨雅冉 任 贺 刘 芳

1.山西医科大学法医学院(太原，030001);2.中国科学院北京基因组研究所 ;3.北京人民警察学院;4.北京市公安局昌平分局刑侦支队

男性Y染色体amelogenin、DYS456及DYS458缺失1例分析

王伟妮1杨雅冉2任 贺3刘 芳4

1.山西医科大学法医学院(太原，030001);2.中国科学院北京基因组研究所 ;3.北京人民警察学院;4.北京市公安局昌平分局刑侦支队

1 资料

某对父子在进行亲子鉴定时，用Goldeneye 20A(基点认知)对父与子DNA进行扩增，amelogenin基因座分型结果如图1，父与子均只显示X等位基因，Y等位基因缺失。同时用 PowerPlex®16 System(Promega)进行了验证，结果一致。为验证受检者性别，采用AmpF STR Y－filer kit(ABI)对父与子进行了YSTR的检验，分型结果如图2，均显示 DYS456及DYS458的缺失。根据NCBI数据库提供的Y染色体上的序列信息，避开试剂盒中amelogenin Y、DYS456及DYS458引物结合区，将原产物片段分别延长至696bp、743bp和745bp自行设计引物(表1)进行扩增。电泳结果如图3所示，正常男性amelogenin、DYS456及DYS458条带均清晰，而受检者均无产物。

图1 父子的amelogenin基因座检测结果

图2 父子的DYS456及DYS458基因座检测结果

图3 amelogenin、DYS456及 DYS458基因座电泳图

表1 针对amelogenin Y、DYS456及DYS458设计的引物

2 讨论

amelogenin是编码牙釉质蛋白的基因，位于X(p22.1 －22.3)和 Y(Yp11.2)的同源染色体中，为单拷贝。其特异PCR引物最早由FSS(英国法庭科学服务部)设计，扩增X和Y染色体可同时分别得到106pb和112bp的产物，这样的片断差异在法医鉴定中常用于性别鉴定［1］。

本例用Goldeneye 20A(基点认知)对父子DNA分型进行检验时，结果出现amelogenin Y等位基因的缺失。基于 PowerPlex®16 System中 amelogenin基因的扩增产物片段与Goldeneye 20A(基点认知)的序列有两个碱基的差异，使用PowerPlex®16 System进行了验证，分型结果与Goldeneye 20A(基点认知)一致，仍见amelogenin Y等位基因的缺失。为验证父子性别而进行Y－STR扩增，结果DYS456及DYS458基因座的等位基因缺失。DNA检验中，等位基因丢失有多种原因，如DNA严重降解、抑制物的存在或低拷贝模板、引物区点突变等均可导致等位基因缺失。本案检材良好，电泳荧光峰高(RFU值)大于500且重复扩增结果一致，因此认为本实验结果中等位基因的缺失不是模板质量的原因。且为排除引物区点突变，避开试剂盒中amelogenin Y、DYS456及DYS458引物结合区而自行设计引物，扩增结果显示仍出现缺失。因此推断是Y染色体的部分缺失导致扩增失败。

Chang等［3］曾报道18个缺失 amelogenin的男性均出现DYS458的缺失，并且认为amelogenin与DYS458相隔1.13 Mb通常会出现同时缺失，本文验证了此结论。但Jobling等［4］报道来自12个不同国家的45名amelogenin缺失的男性中，有4名没有出现DYS458的缺失。因本案两位受检男性确认为父子关系，显然amelogenin、DYS456及DYS458的缺失没有影响其生殖功能。Turrina等［2］也报道过相同案例，认为amelogenin与 DYS458缺失是不影响生育的，且在父子之间表现出垂直遗传。张清健等［5］曾报道影响男性生育的原因通常是Y染色体长臂的变异，而短臂对生育影响较小。

综上所述，法庭科学应用amelogenin基因判断性别时应谨慎，在实际办案中若发现amelogenin对性别的判定结果与其线索或证据不符时，应考虑是否有Y等位基因丢失的可能，需结合其他方法(如SRY［6］、Y－STR)加以核实。Y染色体为男性所特有，在司法鉴定中具有优势，尤其是在父系相关鉴定及性侵犯案件中具有明显优势。基于少数男性可能会出现Y染色体的部分缺失，为了提高法医应用的信息量，建议在现有的Y－STR基础上增加新的基因座。

1 Sullivan KM，Mannucci A，Kimpton CP，et al.A rapid and quantitative DNA sex test:fluorescence－based PCR analysis of XY homologous gene amelogenin［J］.Biotechniques ，1993，15(4):636 －638.

2 Turrina S，Filippini G，Voglino G，et al.Two additional reports of deletion on the short arm of the Y chromosome［J］.Forensic Sci Int Genet.，2011，5(3):242 －246.

3 Chang YM，Perumal R，Keat PY，et al.A distinct Y －STR haplotype for amelogenin negative males characterized by a large Yp11.2(DYS458 － MSY1 － AMEL － Y)deletion［J］.Forensic Sci Int，2007，166(2－3):115－120.

4 Jobling MA，Lo IC，Turner DJ，et al.Structural variation on the short arm of the human Y chromosome:recurrent multigene deletions encompassing amelogenin Y［J］.Hum Mol Genet，2007，16(3):307－316.

5 张清健，郑立新，田佩玲，等.人类男性Y染色体变异对男性生育力影响的临床分析［J］.中国计划生育学杂志，2006，14(5):289－292.

6 Kastelic V，Budowle B，Drobnic K.Validation of SRY marker for forensic casework analysis［J］.J Forensic Sci，2009，54(3):551 －555.

2011－12－22

2012－03－01

［责任编辑:裴开颜］