复方栀子油软胶囊的长期毒性实验研究

陈雅慧 朱 梅 李宝莉 朱建文 张正祥 成延萍

1.延安大学医学院生理教研室，陕西延安 716000；2.广西山云生化科技有限公司，广西柳州 545600

酸枣仁油、栀子油配伍柏子油制成复方栀子油软胶囊，有学者已对其最佳组方、主要药效学、制剂工艺学进行了研究，该复方具有安神、益智、耐缺氧、改善体能等作用[1-3]，并由药食同源原料组成，既安全又符合中药组方理论。本研究为了对复方油栀子油软胶囊的安全性评价作进一步的研究，观察长期服用该胶囊的毒性作用，通过大鼠连续灌胃给药90、120 d，并于停药14 d后，观察大鼠外观、血常规、肝肾功能等改变和脏器组织的毒性变化，以便为临床用药提供参考，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物

SD大鼠[SCXK（军）2002-005]，二级合格动物。

1.2 实验药品及试剂

1.2.1 药品 酸枣仁油购自陕西旭煌植物科技发展有限公司（批号：XHS-080107）；柏子油由广西山云生化科技有限公司提供（批号：081012）；栀子油由广西山云生化科技有限公司生产（批号：080501）。酸柏栀油软胶囊是将酸枣仁油、柏子仁油、栀子油按3∶3∶1比例配伍，由西安东盛医药研究所制备成0.5 g/粒（批号：081120）。血液生化所需试剂均选用中生北控生物科技股份有限公司。

1.2.2 试剂 脂肪酸甲酯标准品、正己烷、甲醇、石油醚（60～90℃）、无水甲醇、无水乙醚、无水硫酸钠、氢氧化钠均为分析纯。

1.3 方法

取SD大鼠120只，体质量60～90 g/只，每组30只，雌雄各半，依体质量随机均为四组：空白对照组灌胃注射生理盐水7 mL/kg，大剂量组灌胃复方栀子油20 mL/kg，中剂量组灌胃复方栀子油6 mL/kg，小剂量组灌胃复方栀子油2 mL/kg。每天给药1次，连续120 d，每周称体质量1次，并观察动物活动、毛发、粪便情况，分别于用药90、120 d和停药14 d结束后，每组各取1/3（10只）动物（雌雄各半，其余动物继续饲养观察），采血检查血常规、血生化，致死，取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、皮肤、脑、十二指肠、小肠、睾丸（卵巢）、附睾（子宫）、直肠共13个脏器组织做病理学检查[4]。

1.4 统计学方法

采用统计软件SPSS 15.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差表示，采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠不同时期体质量的变化

四组大鼠在90、120 d及停药2周试验期内均活动均正常，毛发光润，体质量增长正常，未见粪便异常，无一死亡。四组动物体质量增长情况，90、120 d后中剂量雄性组动物体重增长较大，与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 复方栀子油软胶囊给药90、120 d及停药14 d各组大鼠体质量的经时变化（±s，g，n=15）

表1 复方栀子油软胶囊给药90、120 d及停药14 d各组大鼠体质量的经时变化（±s，g，n=15）

注：与正常组比较，*P＜0.05

?

2.2 各组大鼠在不同时期血液学指标

四组动物连续给药90、120 d后及停药2周后血常规化验结果显示，小剂量组90 d后及停药2周后中间细胞百分比及粒细胞百分比，120 d后中间细胞百分比及粒细胞百分比；中剂量90 d后及停药2周后中间细胞百分比；大剂量90 d后中间细胞百分比及粒细胞百分比，120 d后及停药2周后中间细胞百分比，与正常组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01），其余各组指标无异常。见表2。

表2 各组大鼠在不同时期血液学指标的变化（±s，n=10）

表2 各组大鼠在不同时期血液学指标的变化（±s，n=10）

注：与正常组比较，**P＜0.01

组别 时间 红细胞（×1012 g/L）血红蛋白（g/L）白细胞（×109 g/L）淋巴细胞百分比（%）中间细胞百分比（%）粒细胞百分比（%）血小板（×109 g/L）凝血酶原时间（s）正常组小剂量组中剂量组大剂量组90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后7.36±0.42 7.37±0.56 7.35±0.33 7.35±0.95 7.37±1.13 7.34±0.86 6.91±0.85 7.70±0.44 6.90±0.82 7.53±0.61 7.73±0.95 7.73±0.62 154.90±14.69 161.00±26.58 148.80±15.69 150.80±21.85 148.80±21.69 146.40±21.50 142.00±18.43 153.20±11.57 143.00±19.42 157.80±12.18 151.20±27.81 154.20±28.82 5.80±1.52 4.72±1.97 4.66±1.95 5.43±1.55 6.04±1.88 6.18±3.77 4.76±1.71 3.63±0.77 4.36±1.70 4.90±0.49 3.94±0.85 3.94±0.94 54.34±2.85 57.42±9.09 52.88±2.84 56.96±5.92 52.84±3.04 54.04±4.16 51.64±6.72 51.24±4.77 50.74±7.72 55.46±2.12 54.74±2.28 53.74±2.23 14.96±2.03 10.98±1.57 11.78±1.03 19.69±3.45**21.86±3.39**20.12±4.40**19.06±4.52**12.98±2.72 19.86±4.62**22.18±2.43**20.88±5.97**20.78±6.97**30.98±5.94 30.47±8.12 35.34±2.43 23.35±4.57**27.66±3.98 23.84±4.06**29.8±6.12 34.34±6.91 29.4±6.90 19.81±2.80**26.45±7.57 25.44±7.55 917.20±107.61 840.09±133.82 906.80±136.26 794.80±132.43 789.80±60.07 804.40±241.04 873.83±177.65 780.67±98.02 864.80±167.75 970.21±146.71 890.90±141.04 899.00±241.04 10.50±1.69 10.54±1.73 11.34±1.74 9.28±1.42 10.14±1.41 9.92±2.41 12.18±1.22 11.76±3.65 11.47±2.64 8.44±0.66 8.60±0.36 9.58±1.39

2.3 各组大鼠不同时期血液生化学指标

四组动物连续给药90、120 d后及停药2周后血生化结果显示，小、大剂量组90 d后及中剂量组120 d后，尿糖水平较对照组降低，可能与禁食时间太长有关；中、大剂量组尿素氮增加；大剂量组90 d后尿蛋白及γ-谷氨酰胺转移酶减少，白蛋白、血清谷草转氨酶及碱性磷酸酶增加；中剂量组120 d后尿蛋白、γ-谷氨酰胺转移酶、碱性磷酸酶降低，尿素氮、白蛋白、血清谷丙转氨酶、血清谷草转氨酶增加，停药2周后，血清谷丙转氨酶降低，碱性磷酸酶增加；小剂量组120 d尿蛋白降低，血清谷草转氨酶均升高，90、120 d后γ-谷氨酰胺转移酶减少，与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。见表3。

表3 各组大鼠不同时期血液生化学指标（±s，n=10）

表3 各组大鼠不同时期血液生化学指标（±s，n=10）

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

（mmol/L）（g/L）（g/L）（U/L）氨酶（U/L）γ-谷氨酰胺转移酶（U/L）正常组小剂量组中剂量组大剂量组90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后9.42±1.10 8.75±1.53 10.27±3.29 5.08±1.20**8.02±1.54 13.16±2.25 6.93±1.08 5.94±2.44*9.25±2.59 6.59±3.08*8.17±3.60 11.70±0.78 0.37±0.33 0.09±0.02 8.31±2.38 0.96±0.37 0.92±0.81 4.93±1.04 2.82±1.11**1.08±0.89 9.02±5.01 2.89±1.73**0.58±0.59 5.10±0.38 82.22±3.72 70.62±5.55 145.96±94.99 77.86±3.16 49.04±5.77**73.10±5.66 58.52±17.29**25.06±2.68**102.77±110.09 29.6±0.95**73.26±25.28 77.15±3.32 41.56±1.52 36.06±6.06 35.38±1.68 41.78±1.46 38.26±1.24 31.58±15.57 38.58±2.83 42.66±7.48*37.97±3.25 35.98±3.81*38.92±2.04 38.05±2.05 45.90±9.36 39.60±27.24 52.27±26.31 34.23±6.32 70.36±44.04 43.35±8.07 42.37±21.08 106.43±52.27*27.35±18.27*47.80±10.67 72.51±44.51 87.30±39.30 3.20±2.89 7.06±9.45 138.72±23.86 232.80±38.03**225.82±61.63**56.77±55.72*222.94±90.21**301.60±90.89**204.90±56.85 231.64±69.50**219.86±48.11**125.24±42.78 11.19±10.87 1.12±0.73 28.86±49.41 0.42±.034**0.59±0.30**12.65±3.39 0.46±0.29**1.09±0.84**9.60±0.66 1.69±1.26**0.64±0.46**11.85±0.69碱性磷酸酶（U/L）64.00±25.08 4.73±2.20 141.60±59.29 63.60±25.51 5.89±4.16 103.40±38.10 115.80±45.75*2.88±1.89 888.25±948.21**152.80±26.56**2.97±1.95 101.50±9.19

2.4 各组大鼠不同时期血脂及离子水平指标

结果显示，中剂量组90 d总胆固醇增加，总胆红素降低，胆固醇大剂量减少；120 d K+减少，停药2周后，Na+增加；大剂量组90 d后总胆红素及肌酸磷酸激酶减少，120 d后肌酸酐及肌酸磷酸激酶上升，总胆红素降低，与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），表明复方栀子油软胶囊对肝肾功能的影响并不确定。见表4。

表4 各组大鼠不同时期血脂及离子水平指标（±s，mmol/L，n=10）

表4 各组大鼠不同时期血脂及离子水平指标（±s，mmol/L，n=10）

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 时间 胆固醇 三酰甘油 肌酸酐 总胆红素 肌酸磷酸激酶 K+正常组小剂量组中剂量组大剂量组90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后3.01±2.68 123.60±31.35 3.70±3.14 2.17±0.18 141.40±22.81 2.14±0.56 7.13±2.49**111.20±7.46 2.32±0.72 1.10±0.92*1.17±35.13 2.04±0.54 1.21±0.18 0.75±0.30 0.65±0.17 0.60±0.13 0.57±0.18 0.68±0.12 0.62±0.29 0.70±0.10 0.66±0.15 0.21±0.01 0.66±0.13 0.53±0.09 19.52±1.76 22.48±12.10 87.58±19.15 6.06±2.31 21.94±6.11 92.08±41.07 16.40±3.50 11.32±11.44 71.72±11.16 16.86±5.55 25.54±14.68**10.65±2.33 57.08±17.56 6.14±2.58 7.14±2.85 56.72±32.34 13.04±6.50 13.01±5.50 14.80±2.00**10.40±2.57 11.40±4.57 13.46±4.77**23.02±8.94**14.20±7.85 1 014.20±984.37 708.40±170.69 556.60±326.47 538.60±293.55 810.00±229.11 907.60±768.70 522.60±225.89 849.20±320.61 681.25±510.67 88.60±44.25**2 226.80±1 525.06**620.50±152.02 5.26±0.81 3.16±0.29 3.86±0.55 5.46±0.41 3.54±0.36 4.10±0.90 5.16±0.15 4.20±0.10*3.32±0.33 5.28±0.55 3.33±0.56 3.27±0.02 Na+ Cl-123.40±7.76 141.39±0.85 140.04±1.25 128.80±7.46 140.10±0.55 131.06±1.10*137.20±1.64 142.12±2.95 137.20±1.39*138.00±1.73 139.81±1.02 137.30±3.11 90.40±6.65 102.04±1.04 103.56±1.18 94.40±5.45 104.30±7.33 101.74±1.66 103.80±1.09 97.98±1.59 101.87±1.92 102.60±1.14 100.02±1.32 105.10±0.70

2.5 各组大鼠不同时期脏器系数

四组动物连续给药90、120 d后及停药2周后13种脏器外观正常，各组大鼠不同时期脏器系数统计结果显示：90 d后各剂量组脑系数和肺脏系数均增加；中、大剂量肾上腺系数减少；各剂量组睾丸系数均增加；中剂量组附睾系数增加；120 d后各剂量组脑系数均增加；心脏系数中剂量增加；肺脏系数中剂量增加。停药2周，肾上腺系数中剂量减少；胸腺系数小剂量减少；卵巢系数均增加，与正常组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。见表5。

表5 各组大鼠不同时期脏器系数（±s，‰，n=10）

表5 各组大鼠不同时期脏器系数（±s，‰，n=10）

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 时间 大脑 心脏 肝脏 脾脏 肺脏 肾脏正常组小剂量组中剂量组大剂量90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后6.802±1.985 4.334±0.419 5.340±1.343 5.248±0.459**5.742±0.298**5.554±0.385 5.272±0.22**6.708±1.046**5.795±0.857 5.290±0.387**5.732±0.805**6.030±0.113 3.394±0.122 3.180±0.201 3.618±0.54 3.448±0.300 3.246±0.076 3.406±0.22 3.622±0.281 4.058±1.163*3.550±0.28 3.942±0.325 3.624±0.607 3.695±0.16 29.028±1.898 31.886±3.595 32.674±6.482 30.692±3.491 34.64±1.932 29.310±2.247 30.184±0.871 31.900±4.429 32.102±3.952 32.666±2.354 29.820±3.409 30.875±1.817 1.816±0.363 1.820±0.218 2.144±0.325 1.870±0.277 1.570±0.151 1.768±0.195 2.034±0.130 1.780±0.216 1.882±0.160 1.718±0.211 1.604±0.280 1.805±0.176 3.674±1.709 5.166±0.311 4.666±1.877 6.828±1.507**5.436±0.555 5.342±0.450 6.242±0.628*6.356±0.642*5.390±0.070 7.064±1.528**5.942±0.651 6.220±0.761 3.222±0.379 3.010±0.412 3.732±0.630 3.456±0.251 3.046±0.342 3.298±0.350 3.036±0.145 3.406±0.438 3.407±0.131 3.090±0193 3.174±0.273 3.450±0.056组别 时间正常组小剂量组中剂量组大剂量90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后90 d后120 d后停药2周后肾上腺 胸腺 子宫0.228±.0690 0.150±0.072 0.180±0.050 0.172±0.035 0.360±0.354 0.136±0.032 0.146±0.082*0.152±0.049 0.120±0.017*0.116±0.056**0.478±0.711 0.159±0.062 0.831±0.483 0.526±0.048 1.088±0.290 0.714±.3970 0.514±0.127 0.420±0.155**0.750±0.119 0.596±0.187 0.607±0.357 0.540±0.287 0.590±0.086 0.587±0.192 0.992±0.388 2.846±2.955 2.606±0.953 0.846±0.544 2.862±0.811 3.228±0.923 0.814±0.484 2.472±0.809 4.032±0.945 1.172±0.444 3.358±0.993 4.085±1.944卵巢 睾丸 附睾0.164±0.094 0.376±0.366 1.100±1.147 0.252±0.104 0.342±0.193 0.312±0.114*0.316±0.247 0.288±0.172 0.236±0.091*0.289±0.076 0.378±0.185 0.221±0.016*3.926±0.706 3.064±0.439 4.914±2.550 4.684±0.248*3.512±0.771 3.666±0.463 4.700±0.352**3.202±0.631 3.352±0.498 4.936±0.177**3.922±0.536 4.117±0.708 1.236±0.553 1.468±0.312 1.004±0.325 1.336±0.563 1.470±0.208 1.454±0.446 2.002±0.442**1.306±0.083 1.408±0.296 1.286±0.645 1.576±0.417 1.655±0.286

2.6 组织病理学检查结果

光镜检查脑（大脑、小脑、脑干），脊髓（颈、胸、腰段），垂体，胸腺，甲状腺，甲状旁腺，食管，唾液腺，胃，小肠和大肠，肝脏，胰腺，肾脏，肾上腺，脾脏，心脏，气管，肺脏，主动脉，雄性动物前列腺、睾丸及附睾，雌性动物乳腺、子宫及卵巢，膀胱，坐骨神经，骨髓，淋巴结（局部淋巴结、肠系膜淋巴结），给药局部，均未发现有明显病变。

3 讨论

复方栀子油软胶囊由药食同源原料组成既安全又符合中药组方理论。酸枣仁油、栀子油含有多种植物脂肪酸有关。超临界CO2萃取的酸枣仁油、栀子油和柏子仁油组成较为简单，主要成分为不饱和脂肪酸，占84.1%，且油酸和亚油酸为82%[5]。亚油酸在体内可转化成γ-亚麻酸、花生四烯酸等，花生四烯酸是人体中含量最高、分布最广的一种多不饱和脂肪酸。在维持膜的物理特性和功能方面起着非常重要的作用，所以该复方具有广泛的作用。

笔者在急性毒性试验中，大鼠以40 mL/（kg·d）给予灌胃最大耐受量，14 d未见明显的毒性。为了进一步考察其长期毒性，又做90、120 d连续给药及停药2周后实验，对动物外观、血常规、血生化等指标及13种脏器组织的毒性变化无明显影响，其中该药对肝功能的影响并不确定，其余指标显示未见严重毒性作用。以上结果提示该药剂符合临床用药安全标准[6]。

[1]李宝莉，陈雅慧，张正祥，等.复方酸枣仁油栀子油对小鼠学习记忆的影响[J].西安交通大学学报，2010，31（6）：673-676

[2]李宝莉，陈雅慧，胡锐，等.复方酸枣仁油栀子油对小鼠的镇静、催眠和抗惊厥作用[J].南方医科大学学报，2008，28（9）：1636-1639.

[3]高枫，符兆英，李宝莉.枣仁柏仁栀子油配方的安神与益智作用研究[J].中国应用生理学杂志，2011，27（2）：240-245.

[4]徐淑云.药理实验方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社，1994：1433-1439

[5]张正祥，李宝莉，陈雅慧，等.复方酸枣仁油栀子油软胶囊脂肪酸成份测定[J].陕西医学，2009，38（7）：792-793

[6]国家药品监督管理局.中药新药研究的技术要求[S].1999-11-12.