CXCL5表达强度与不同类型乳腺癌关系

邵明亮 张巍 王伟群

常见女性的恶性肿瘤中，乳腺癌近几年的发病率一直呈上升趋势。尤其是我国主要大型都市乳腺癌发病率为81/10万，比十年前增长了4.28倍［1］。病理学研究发现乳腺上皮细胞在多种致癌因子作用下，基因突变，细胞发生病理转化。对于乳腺癌发病机理、浸润转化相关基因及其蛋白标志物的检测一直是一个研究的热点。趋化因子(CXCL)及其受体可激活或抑制上皮细胞、内皮细胞增殖、血管生成及迁移，和多种肿瘤疾病中修复组织损伤密切相关［2］。本研究探讨CXCL5与乳腺癌发生和进展的关系，观察CXCL5临床诊断价值。

1 临床资料

收集2010～2011年佳木斯大学第五临床医院手术患者中，经病理证实为乳腺癌组织标本共51例，乳腺纤维瘤组织标本20例。乳腺癌患者皆为女性，中位年龄50岁，术前均未行放化疗。

2 材料与方法

2.1 主要试剂 免疫组化试剂盒购自晶美生物技术有限公司，鼠抗人CXCL5单克隆抗体购自北京天根生化科技有限公司，各种国产试剂为分析纯级。

2.2 SABC免疫组织化学染色法

2.2.1 脱蜡和水化 脱蜡前将组织在室温中放置60 min，依次按常规经二甲苯，无水乙醇中，95%乙醇，70%乙醇中浸泡水化。

2.2.2 微波热修复 在微波炉里加热0.01 m枸橼酸钠缓冲溶液(pH6.0)至沸腾后将组织放入，断电，间隔5～10 min，反复1～2次。

表1 不同组织类型之间CXCL5比较

2.2.3 免疫组织化学染色 PBS洗2～3次各3 min;滴加5%BSA封闭液，室温20 min。甩去多余液体不洗。滴加Ⅰ抗50 μl，37℃1 h。PBS洗3次各3 min;滴加生物素化Ⅱ抗40 ～50 μl，37℃20 min;PBS洗 4次各 5 min;DAB 显色 5～10 min，在显微镜下掌握染色程度;PBS冲洗10 min;苏木素精复染2 min，盐酸酒精分化;脱水、透明、封片、镜检。

2 结果

表2 乳腺癌组与良性疾病组CXCL5表达差异

图1 阴性对照200倍镜下

图2 浸润性导管癌阳性200倍

图3 乳腺小叶癌阳性200倍

3 讨论

目前已报道的趋化因子有47种，与之对应的受体有21种，CXC类趋化因子亚家族包括CXCL1～CXCL16共16个成员，它们具有相近的结构特点，对白细胞有正向的趋化和激活作用，在机体防御、抗感染等过程中起重要作用［3］。CXCL5又名上皮来源的中性粒细胞活化肽78(ENA-78)，是促血管生成性(ELR+)CXC趋化因子中的一员。

本课题研究了CXCL5表达强度与乳腺癌恶性度关系，由不同病理分级组间比较可见，病理Ⅲ+IV期CXCL5表达显著增高，与病理Ⅰ+Ⅱ期比较差异显著。发生淋巴结转移的病例CXCL5表达增高，与未发生转移病例比较具有显著性，说明随着病理浸润的增强，淋巴结转移的发生CXCL5都参与了乳腺癌的恶性生物学行为，是受癌基因调节的环节之一。这一结论与CXCL5在胃癌表达情况一致，高表达者细胞分化程度降低，病理学分级、临床分期的增高［4］，淋巴结转移率高，因此检测CXCL5表达强度有助于判断乳腺癌恶性程度及患者的预后。

同时比较不同组织类型乳腺癌表达的差异，可发现乳腺癌组明显高于乳腺纤维腺瘤组，具有显著性，乳腺浸润性导管癌、乳腺小叶癌、乳腺髓样癌组间比较不具有显著性差异。CXCL5促进肿瘤进展的可能机制为CXCL5与其特异性受体(CXCR2)结合，作用于酪氨酸激酶受体，引起血管内皮细胞增殖、趋化运动及抑制内皮细胞凋亡等一系列促进肿瘤血管新生的生物学效应。通过MAPK和PI3 k信号通路，活化转录因子(ELK1)，从而激活与肿瘤形成相关的基因表达［5］。CXCL5过表达可提高乳腺癌细胞侵袭和转移能力，并可诱导内皮细胞产生于肿瘤转移密切相关的基质金属蛋白酶9(MMP9)，促进乳腺癌的转移。

CXCL5是乳腺癌发生发展过程中的重要成分，与乳腺癌的新生血管形成、基因调节通路以及乳腺癌的转移密切相关。有效的观察CXCL5可以有效地诊断、评估乳腺癌进展预后，同时也为以干预CXCL5为条件的抗肿瘤治疗提供思路。

［1］Xu YC，Zhang FC，Lin YM.The study on relationship between SNPs of ESR1 gene and endocrine therapy response in breast cancer patients.Breast cancer research(Pre-pub lication)，2005，1(5):20-22.

［2］Zlotuik A，Yoshie O，Nomiyama H.The chemokine and chemokine receptor superfamilies and their molecular evolution.Genome Biol，2006，7(12):243-245.

［3］Miyazaki H，Patel V，Wang H，Growth factor-sensitive Molecular targets identified in primary and metastatic head and neck squamous cell carcinoma using microarray analysis.Oral Oncol，2006，42(3):240-256.

［4］Miyazaki H，Patel V，Wang H，et al.Down-regulation of CXCL5 inhibits squamous carcinogenesis.Cancer Res，2006，66(8):4279-4284.

［5］欧周罗，邵志敏.趋化因子结合蛋白与乳腺癌.中华乳腺病杂志(电子版)，2011，4(5):396-401