HPLC法测定川黄醒脑口服液中黄芪甲苷的含量

郑绯，徐娟

1.解放军302医院药学部，100024. 2.北京军区总医院药理科，100700

黄芪(Radix astragali)是多年生草本豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranceus(Fisch.) Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao 或膜夹黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根。含有多种化学成分，如皂苷类、黄酮类、多糖类等，黄芪甲苷(ASI)为黄芪中10多种皂苷的主要成分，为黄芪制剂质量检定的指标成分，结构为三萜皂苷。其中皂苷类是黄芪的主要活性成分，具有降血压、镇静、镇痛等作用。目前，关于黄芪皂苷的定量测定多采用比色法、薄层扫描法、HPLC-UV法、HPLC-示差折光检测器法。

川黄醒脑口服液是由黄芪、川芎、当归等五味药材组成的纯中药复方制剂，具有益气活血、化瘀通络之功效，主要用于脑梗塞急性期的治疗。本文采用高效液相色谱法对其中的主要成分黄芪中的黄芪甲苷进行了定量测定，实验表明，测定方法回收率及精密度都较好，结果准确可靠。

1 仪器、药品与试剂

1.1 仪器 日本岛津液相色谱仪，LC-6A泵，SIL-6A自动进样器，SPD-6AV紫外检测器及C-R3A数据处理装置。

1.2 药品 黄芪甲苷对照品，购自中国药品生物制品检定所(批号110781-200512；规格：20mg，供含量测定用)；川黄醒脑口服液:沈阳市康元制药厂生产；

1.3 试剂 甲醇和乙腈均为色谱纯，水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 实验方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱：YWG-C18柱(4.6mm×250mm)，流动相:乙腈:水(1:2)，磷酸调PH值=3；流速：0.8mL/min；检测波长：205nm；灵敏度：0.1AUFS。在该色谱条件下，黄芪甲苷的保留时间约为18分钟。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并定容至每1mL含0.5mg的溶液作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取样品20mL，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用水洗涤2次，每次15mL，弃去水液，正丁醇溶液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2mL的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照样品溶液的制备 取不含黄芪药材的处方其他药材，按相同工艺制得阴性对照样品，再按上述供试品溶液制备方法，制得阴性对照样品溶液。

2.5 线性关系考察 分别精密吸取标准品溶液5、10、15、20、25μL，按上述色谱条件测定，以峰面积的对数为纵坐标，黄芪甲苷进样量的对数为横坐标，绘制标准曲线，结果表明，黄芪甲苷在2.5～12.5μg范围内线性关系良好，其线性回归方程为Y=1.0097X+5.9010，r=0.9998。

2.6 精密度实验 分别精密吸取黄芪甲苷标准溶液15μl，按色谱条件连续进样5次，测定峰面积，结果RSD为1.78%(n=5)，精密度良好。

2.7 加样回收率试验 精密称取已测黄芪甲苷含量的川黄醒脑口服液样品20mL，5份(已知含量为34.0μg/mL)。分别精密加入黄芪甲苷对照品，按样品测定项下供试品溶液制备方法操作，进样测定，计算平均回收率为95.32%，RSD=1.69%，结果见表1：

2.8 稳定性实验 样品溶液在室温放置，每隔0.5h测定一次，共测定4次，测定峰面积，计算黄芪甲苷的含量(μg/mL)，分别是0.0341、0.0349、0.0345、0.0342，RSD为1.04%，证明样品溶液中黄芪甲苷含量至少在2h内稳定。

2.9 重复性试验 分别平行取同一批号样品6份，依法处理后，进样10μL测定，计算黄芪甲苷的含量，平均值为34μg/mL，RSD=1.98%。

表1 加样回收率试验结果Tab 1 The results of the recovery test

3 讨论

3.1 黄芪甲苷的测定 黄芪中有十几种皂苷，以黄芪甲苷含量最高，为主要有效成分，我们参照中国药典(95版)的提取方法，有效的去除了其他皂苷的干扰。

3.2 测定波长的选择 黄芪甲苷在紫外区仅在200nm左右有末端吸收，因此在200～210nm范围内选择测定波长，实验表明，波长越长，噪音越小，但灵敏度也随之降低，综合这两个因素，我们选205nm为测定波长。

3.3 流动相的选择 本文考察了乙腈:水(1:2.0，1:2.2，1:2.4，1:3.0)等不同流动相，根据实验结果选择乙腈:水(1:2)，磷酸调PH=3为最佳流动相，且PH值越小，峰型越好，保留时间越短，考虑到柱子的寿命，所以我们选PH=3。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.212.

[2] 李 妍,吴庆淼,朱艳宇.HPLC-ELSD 测定醒脑再造胶囊中黄芪甲

[3] 孙健, 刘泓, 范斌.HPLC-ELSD 法测定百草精口服液中黄芪甲苷的含量[J].中国实验方剂学杂志,2009,15(1):6-7.

[4] 覃红萍,鲁静, 林瑞超.HPLC-ELSD 法测定黄芪药材中黄芪皂苷[J].中草药.2009,40(3):471-473.

[5] 徐忠坤,徐海娟,宋娟,等.PLC 法测定芪葛颗粒中黄芪甲苷.中草药[J].2011,42(1):94-95.