血浆与血清同型半胱氨酸在不同检测条件下比较及稳定性研究

张秀梅，李洪利，聂庆东，祁瑞环，武天石

（清华大学医院 检验科，北京100084）

同型半胱氨酸（Hcy）作为心脑血管疾病独立危险因素分析指标已经广泛应用于临床，Hcy水平预报心血管疾病的能力是胆固醇指标的40倍，Hcy水平的微小增加就使心脑血管危险度大大增加，Hcy水平每增加5μmol／mL，心脏病危险增加240%，Hcy每增加一个标准差，患静止性脑梗塞机率就增加24%。有研究报道，糖尿病人，血浆Hcy水平每升高5μmol／ml，未来5年内死亡率增加3倍；Hcy每增加1μmol／L血栓危险性就增加4%，心血管疾病危险性增加3%［1］。因此了解Hcy在不同保存条件的稳定性，确保Hcy检测的准确性，对正确判断病人病情尤为重要。但目前关于其稳定性极其操作的标准化问题一直没有明确解决，我国Hcy检测的样本准备等标准化操作程序尚未出台，检测样本到底使用血清还是血浆，及Hcy在其中是否能稳定存在还有待进一步研究。了解血清及血浆Hcy的浓度差异，及其在不同时间的变化是目前需要明确解决的问题。由于全血中红细胞的甲基化进程对Hcy的稳定性影响很大［2］，因此选择EDTA－K2抗凝血分离血浆和血清进行研究，报告如下。

1 材料和方法

1.1 真空采血管 EDTA－K2抗凝真空采血管、血清分离胶真空采血管使用奥地利VACUETTE产品，由北京健峰公司提供。

1.2 样本收集及处理 本院健康体检人员42名，年龄35～60岁，男22名，女20名。分别抽取EDTA－K2抗凝管2ml及无抗凝剂分离胶管4ml各2管，EDTA－K2抗凝管取血后反复混匀8次，取血后立即离心分离血浆，室温3 000转离心10min，分离胶管取血后半小时待血液凝固后分离血清进行检测；另两管血液分别于室温放置3h离心分离血浆和血清于1h内测定Hcy浓度，观察血浆与血清浓度差异及全血放置时间对Hcy浓度的影响。另分别取血浆与血清中的20份样本于3h、6h及2－8℃24h后放室温平衡30min后进行检测Hcy浓度与分离后1h内检测浓度比较，观察血浆与血清Hcy的稳定性。

1.3 方法学 采用直接化学发光发法，使用德国西门子公司ADVIA Centaur XP化学发光分析仪及配套试剂及校准质控品，由北京若华公司提供。

1.4 统计分析 采用SPSS16.0软件进行统计分析，不同离心分离血清或血浆时间、离心后血浆或血清放置时间检测结果以±s表示，数据采用配对资料t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血浆Hcy水平 取血后即刻离心检测血浆浓度为9.14±2.89；取血后室温放置3h离心检测血浆浓度为10.28±3.45。两者比较，差异有统计学意义（t＝－9.163，P＜0.05），放置3h离心检测血浆中浓度较即刻离心检测增加12.47%。结果见表1。

2.2 血清Hcy水平 取血后放置30min待血液凝固后离心检测血清浓度为10.35±3.23；取血后室温放置3h离心检测血清浓度为11.65±3.7。放置3h离心检测比取血后放置30min测之血清中浓度增加12.56%，两者之间差异有统计学意义（t＝－17.890，P＜0.05），结果见表1。

2.3 血浆与血清Hcy的比较 无论是取血后即刻离心，还是室温放置3h离心分离，血浆和血清Hcy浓度之间差异有统计学意义，取血后即刻（30min）离心分离血清高于血浆13.24%（t＝－22.945，P＜0.05（以1小时分离血浆检测之浓度计算），室温放置3h分离血清浓度高于血浆13.33%（t＝－9.454，P＜0.05），结果见表1。

表1 即刻离心与放置3h离心分离血浆与血清Hcy浓度的比较（差异分析）（n＝42，μmol／ml）

2.4 分离血浆与血清后放置时间对Hcy影响 离心后在室温分别放置1h、3h、6h，及2－8℃放置24h分别检测Hcy浓度，与1h相比，即刻（30min）离心血清浓度在室温3h、6h分别增加2.5%（t＝－2.257，P＞0.05）、3.45%（t＝－2.656，P＞0.05），2－8℃24h减低－1.25% （t＝2.623，P＞0.05），放置3h离心分别增加1.01%（t＝－2.973，P＞0.05）、2.53% （t＝－4.172，P＞0.05）、－1.43%（t＝3.687，P＞0.05）；血浆浓度即刻离心分别增加1.52%（t＝－1.047，P＞0.05）、2.3%（t＝－1.256，P＞0.05）、－0.4%（t＝0.847，P＞0.05），室温放置3h离心检测分别增加1.35%（t＝－1.467，P＞0.05），3.19%（t＝－3.578，P＞0.05），－0.87%（t＝0.916，P＞0.05），Hcy浓度在室温放置呈时间依赖性增加，2－8℃放置24h浓度减低，但离心分离后血清或血浆在室温6h内及2－8℃24h内检测结果均无统计学意义，结果见表2－5。

表2 即刻离心分离血浆与血清Hcy浓度的比较（稳定性分析）（n＝20，μmol／ml）

表3 放置3h离心分离血浆与血清Hcy浓度的比较（稳定性分析）（n＝20，μmol／ml）

表4 即刻分离与放置3h分离血浆Hcy浓度的比较（稳定性分析）（n＝20，μmol／ml）

表5 取血30min离心后与放置3h分离血清Hcy浓度的比较（稳定性分析）（n＝20，μmol／ml）

3 讨论

人体内同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）的水平可以更准确的预测患心脏病或中风发生，而且可以更好的预测患老年痴呆症的危险，高Hcy还可以帮助预报多种疾病风险，包括冠状动脉粥样硬化、新生儿缺陷、习惯性流产、早衰、抑郁症等。

结果显示，分离胶管取血放置30min后离心分离血清Hcy浓度较即刻分离的血浆Hcy浓度高13.24%，结果差异有统计学意义（P＜0.05）。若取血后3h分离血清或血浆，其Hcy浓度都比取血后即刻分离血清或血浆检测浓度有较明显增加，分别增加12.47%和12.56%，结果差异有统计学意义（P＜0.05）。由此可见，Hcy检测的标准化及设定不同条件的参考区间尤为重要。Hcy浓度与1h相比，即刻（30min）离心血清浓度在室温3h、6h分别增加2.5%、3.45%，2－8℃24h减低－1.25% ，放置3h离心分别增加1.01%、2.53%、－1.43%；血浆浓度即刻离心分别增加1.52%、2.3%、－0.4% ，室温放置3h离心检测分别增加1.35%，3.19%，－0.87%，Hcy浓度在室温放置呈时间依赖性增加，2－8℃放置24h浓度减低，但离心分离后血清或血浆在室温6h内及2－8℃24h内检测结果均无统计学意义。

有报道［3］全血样本在3h内如不能尽快离心分离，应置于0－4℃碎冰上保存，以阻止红细胞的甲基化过程。NCCLS提出关于Hcy检测血液样本处理及保存的建议是［9］：相同病人的血浆和血清样品不能互换使用，使用血清检测，应在血液离心之前使样品充分凝结；始终保持样本盖好并直立，样品只能冷藏一次；应尽快分离血清或血浆；不能尽快分离的应储存在冰上直至离心分离；禁止在室温下储存样品；在2－8℃冷藏盖好盖子。何俊等［10］报道EDTA－NaF和EDTA－3DA管采集全血，置于室温保存，可使血浆Hcy浓度至少稳定3h，能够较好地解决临床工作中由Hcy稳定性带来的问题。

在实际工作中，使用EDTA－K2抗凝血浆时，由于一些其他全血检测项目（如血常规、糖化血红蛋白等）有相同抗凝样本要求的，为减少样本采集量等各种因素，常常共用一管EDTA－K2抗凝血，因此取血后检测血常规、糖化血红蛋白约3h分离血浆可能是常规工作条件，此时应使用室温放置3h分离血浆Hcy浓度参考区间：比即刻分离血浆参考区间高12.47%左右；因各方面原因如使用血清为检测样本，应待血液凝固后尽快离心分离检测，并使用血清样本的参考区间分析检测结果。如实际工作不能保证取血后即刻离心分离，保证在3h内分离检测，应使用室温放置3h分离血清的Hcy浓度参考区间，比即刻分离血清参考区间高13%左右。离心分离后的血清或血浆Hcy在室温放置3h、6h及2－8℃放置24h，虽有浓度递增，但差异无统计学意义。总之，Hcy的检测应依据各实验室检测条件，建立相应条件的检测参考区间。

［1］王清涛，秦晓光.同型半胱氨酸的检测和临床应用［J］.中华检验医学杂志，2006，29（3）：1935.

［2］Yadavl AS.Bhagwat VR.Pre－Analytical Errors in Blood Homocysteine Assays［J］.Al Ameen J Med Sci，2009，2：78.

［3］Refsum H，Smith AD，Ueland PM，et al.Facts and recommendations about total homocysteine determinations：an expert opinion［J］.Clin Chem，2004，50：3.

［4］National committee for Clinical Laboratory Standards.Procedures for handling and processing of blood specimens；second edition；approved guideline［S］.NCCLS Document H18－A2； Wayne（PA）：NCCLS，40.

［5］何 俊，班艳娜，张晓清，等.血浆同型半胱氨酸及其相关硫醇物在全血中的稳定性研究［J］.中华检验医学杂志，2011，34（7）：598.