快速融化离心法与虹吸法制备冷沉淀的质量评价

蒋燕，陈宝葵，林敏诗

(佛山市顺德区中心血站，广东佛山528300)

冷沉淀是新鲜冰冻血浆在1～5℃条件下不溶解的白色沉淀物，主要含有第Ⅷ因子、纤维蛋白原、血管性血友病因子等有效成分。冷沉淀制剂中的第Ⅷ因子、纤维蛋白原含量是直接影响治疗效果的重要因素，且与制备过程密切相关。笔者对虹吸法和快速融化离心法制备冷沉淀的质量与制备效率进行了比较，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 数字控制水浴式血浆融化箱(CT-4T.6C型)，大容量冷冻离心机(日立 CR-7)，热合机(日本泰尔茂)，电子天平(G＆G)，四通道半自动血凝仪(欧家隆Coag-A-Mate.XM)。

1.1.2 耗材与试剂 乏Ⅷ因子血浆，活化剂，氯化钙溶液，缓冲液，标准人血浆，上述整套试剂均为德国Dade Behring Marburg公司提供。400 ml五联采血袋(四川南格尔)。

1.1.3 原料血浆 全血采集后6 h内经2次离心，分离出新鲜液体血浆，放入－50℃速冻机速冻后，置入－30℃以下的低温冰箱保存［1］。

1.2 方法

1.2.1 取样 取原料血浆420袋，分为2组，每组有200 ml原料血浆90袋，100 ml原料血浆120袋，4名成分制备人员连续2日分别采用虹吸法与快速融化离心法制备冷沉淀。每组实验均按照30袋200 ml原料血浆、40袋100 ml原料血浆分批浸没于水浴箱进行融化。

1.2.2 虹吸法制备冷沉淀 将原料血浆浸没于2～6℃血浆融化箱中融化，另一空转移袋悬挂于水浴箱外。新鲜冰冻血浆融化时，上清血浆随时被虹吸入转移袋内，冷沉淀留在原袋中。待融化至仅有15～30 ml冷沉淀和血浆时，将冷沉淀袋和冷上清袋之间的导管热合分离［2］。

1.2.3 快速融化离心法制备冷沉淀 将原料血浆浸没于2～6℃血浆融化箱中完全融化时，批量取出所有血浆于0℃ 2 000×g离心10 min。离心后用分离夹分离袋底沉淀的冷沉淀与血浆，热合分离冷沉淀袋和冷上清袋之间的导管［2］。

1.2.4 Ⅷ 因子和纤维蛋白原的检测 每组随机抽取100 ml原料新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀30袋，严格按照血凝仪和试剂操作说明书进行检测。

1.3 质量标准［3］

100 ml新鲜冰冻血浆制备冷沉淀:(25±5)ml/袋，Ⅷ因子含量≥40 IU，纤维蛋白原含量≥75 mg，符合质量标准者为合格。

1.4 统计方法

采用SPSS10.0统计软件，两总体方差齐同的成组t检验和χ2检验。

2 结果

2.1 两种方法制备冷沉淀的Ⅷ 因子和纤维蛋白原含量比较

快速融化离心法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量为(70.9±8.3)IU，合格率为 100%，高于虹吸法制备冷沉淀的Ⅷ因子含量(45.9±7.6)IU与合格率90%，差异有统计学意义;两种方法制备的纤维蛋白原含量及合格率差异亦有统计学意义。见表1。

表1 两种方法制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原的含量与合格率比较 n=30

2.2 两种制备方法工作效率比较

见表2。4名成分制备人员采用快速融化离心法制备300 U冷沉淀较虹吸法快1个小时。即按照一天6.5小时工作时间计算，4名人员采用快速融化离心法可以比虹吸法多制备40 U冷沉淀。

表2 两种方法制备冷沉淀的工作效率比较

3 讨论

本次实验结果显示，快速融化离心法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量与纤维蛋白原含量均较虹吸法高，前者制备的冷沉淀合格率亦较后者高。与文献报道结果一致［4，5］。分析原因:虹吸法在原料新鲜冰冻血浆融化过程中，部分冷沉淀不能形成大的凝聚团块或絮状，无法聚集吸附在中央未融化的冰碴上或袋壁上，有部分散在的细小冷沉淀由于虹吸作用直接流到另一冷上清转移空袋中，因此冷沉淀袋内的冷沉淀减少，降低了Ⅷ因子含量与纤维蛋白原含量。同时，由于虹吸法制备冷沉淀时，原料血浆融化的速度不一致，部分血浆融化为少量冰碴的时间较为集中，工作人员来不及取出部分冷沉淀袋，致使袋内的少量冰碴继续融化，甚至完全融化，冷沉淀直接流入冷上清的转移袋内，导致冷沉淀量减少，Ⅷ因子含量与纤维蛋白原含量降低，致使冷沉淀合格率降低。而快速融化离心法制备冷沉淀时，原料血浆为全部融化后批量0℃强离心，使冷沉淀凝聚黏附于袋底或袋壁，冷沉淀流失量少，回收率高，因此Ⅷ因子含量与纤维蛋白原含量较高，冷沉淀合格率亦较高。

冷沉淀制备的工作效率直接影响临床的供应量。本次实验显示，快速融化离心法的制备效率高于虹吸法。分析原因:融化原料血浆过程中，虹吸法融化剩余适量冰碴的速度不一致，融化过程需要工作人员密切观察袋内的冰碴量以确保血液质量;此种制备方法为非批量操作，降低了制备效率。而快速融化离心法需要完全融化原料血浆，工作人员可充分利用融化等待时间，完成上一批冷沉淀的离心分离热合与贴签速冻工作;整个制备过程均为批量操作，提高了制备效率。应用快速融化离心法，科室可以根据工作人员数量优化工作流程，进一步提高制备效率。实际工作中我们发现，200 ml原料血浆与100 ml原料血浆交替融化制备可充分利用原料血浆融化等待的时间，冷沉淀制备效率较高。

Ⅷ因子是不稳定因子，随着时间的延长或制备期间温度的升高，Ⅷ因子活性会降低［6］。因此，制备过程应尽快分离速冻新鲜冰冻原料血浆;原料血浆融化过程应严格控制恒温冰水浴;冷沉淀分离贴签速冻时间应尽量缩短，严格控制整个冷链过程，确保冷沉淀的质量。

综上所述，快速融化离心法制备冷沉淀具有优质高效的特点，值得推广使用。

［1］王培华.输血技术学［M］.北京:人民卫生出版社，2002:33－34.

［2］高峰.临床输血与检验［M］.北京:人民卫生出版社，2003:140.

［3］GB18469—2001，全血及成分血质量要求［S］.

［4］史艾娟，谭明科.虹吸法与离心法制备冷沉淀的质量对比［J］.中国当代医药，2010，17(13):149 －150.

［5］杨玉峰，黄春萍，赵云，等.两种制备冷沉淀方法的比较［J］.实用医技杂志，2007，14(8):1007 －1008.

［6］苗翠英，李蓬，孙波，等.新鲜冰冻血浆中FⅧ:C检测结果分析［J］.中国输血杂志，2002，15(1):34.