HPLC法测定杨硼洗剂中水杨酸和硼酸的含量

张玉玺 杨姣 刘春鹤 姚晓颖 王丽红

杨硼洗剂是我院自制的外用制剂，用于治疗真菌性皮肤疾患。通过参阅相关水杨酸、硼酸在其他剂型中含量测定的文献［1-3］，我们建立了用HPLC法测定杨硼洗剂中水杨酸和硼酸两种成分含量的方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪(Agilent 1100，美国);电子天平(AG204，瑞士)。

1.2 试剂 水杨酸、硼酸对照品(中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱级，水为重蒸馏水;样品为医院制剂。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-水(45∶55);流速:1.3 ml/min;检测波长289nm;进样 20 μL;柱温:25℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取水杨酸对照品、硼酸对照品各16 mg，置100 ml棕色量瓶中，加流动相适量使溶解，稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取杨硼洗剂1 ml，置100 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，以0.45 μm滤膜过滤即得供试品溶液。

2.4 阴性样品制备 按处方配比制备缺水杨酸、硼酸的阴性杨硼洗剂，按供试液制备方法制备成阴性样品溶液。

在此色谱条件下，阴性样品、对照品和供试液的色谱图见图1。水杨酸和硼酸的理论塔板数均不低于2500，相邻两组分间的分离度大于2，保留时间分别为3.6 min和5.7 min，阴性样品无干扰。

2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。在“2.1”项下色谱条件下分别进样20 μL，以对照品浓度为纵坐标(Y)，峰面积为横坐标(X)进行线性回归。水杨酸的回归方程为Y=12.56X-201.23(r=0.9962);硼酸的回归方程为Y=19.12X+121.2(r=0.998)。实验表明水杨酸和硼酸分别在16～128 μg/ml的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取“2.2”项下水杨酸、硼酸浓度为160 μg/ml的对照品溶液 20 μL，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，测得水杨酸峰面积的RSD为1.21%(n=6)，硼酸峰面积的RSD为0.82%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取“2.3”项下的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别于制备后 0，2，4，6，8，24 h 测定峰面积，测得供试品溶液中水杨酸峰面积的RSD=0.81%(n=6)，硼酸峰面积的RSD=1.41%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验 取同一批号杨硼洗剂样品6份，按“2.3”项下方法的制备后，在“2.1”项下色谱条件各进样3次测定，测得水杨酸和硼酸的RSD分别为0.82%和0.76%，结果表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验 精密量取同一批号已知浓度的供试品溶液1 ml置于10 ml棕色量瓶中，共9份，加流动相稀释至刻度，摇匀。再精密吸取上述溶液各1 ml置于10 ml棕色量瓶中，分别精密加入水杨酸、硼酸浓度为160 μg/ml的对照品溶液 1.0，1.0，2.0，2.0，3.0，3.0 ml，加流动相稀释至刻度，摇匀，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.1 0 样品含量测定 取3批杨硼洗剂，按“2.3”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件各进样20 μL，测定色谱峰面积，计算两种成分含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 从紫外光谱可见水杨酸和硼酸在289nm波长处均有较大的吸收，故选择此波长作为含量测定的检测波长。

3.2 经反复试验发现以甲醇-水(45∶55)作为流动相时，两种组分离效果好，两峰的分离度和保留时间也较合理，因此选用此流动相配比做为测定用流动相。

3.3 实验结果表明，采用本法同时测定杨硼洗剂中的水杨酸和硼酸的含量，方法简单、快速，结果准确、可靠，分离效果好。阴性对照表明，在该色谱条件下，其他辅料对两种主成分的测定无干扰，可用本法作为该制剂的质量控制标准。

［1］李季静，杨小孟，胡凤婷.RP-HPLC法测定氯霉素水杨酸酊中氯霉素和水杨酸的含量．首都医药，2009，15(5):62．

［2］李长福.HPLC法测定复方水杨酸擦剂中水杨酸和苯甲酸的含量.中国伤残医学，2011，3(19):37．

［3］冀宛丽，赵家太.HPLC法同时测定阿司匹林咀嚼片中阿司匹林和水杨酸的含量．生命科学仪器，2007，10(5):39．