替米沙坦对自发性高血压大鼠左心室重构的影响

刘 佳 李修英 张 婧 冷吉燕 (吉林大学第一医院干部病房，吉林 长春 130021)

替米沙坦对自发性高血压大鼠左心室重构的影响

刘 佳 李修英 张 婧 冷吉燕 (吉林大学第一医院干部病房，吉林 长春 130021)

目的 研究替米沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)左心室重构的影响。方法 16只12周龄雄性SHR，随机分为替米沙坦组和SHR空白对照组，每组8只;另设同龄Wistar大鼠(WKY)8只为正常对照组。治疗组给予替米沙坦10 mg·kg－1·d－1灌胃给药，饲养8 w后处死动物，测量左心室重量及心肌厚度，计算左心室重量与体重比(LVW/BW);通过Van Gieson染色法观察左心室心肌胶原纤维变化，对左心室心肌胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积(PVCA)进行分析;电镜和HE染色观察左室心肌超微结构。结果 与正常对照组WKY大鼠相比，SHR空白对照组的尾动脉收缩压(SBP)、LVW/BW、左室壁厚度、CVF、PVCA均显著增高(P＜0.01);与SHR空白对照组相比，替米沙坦组能有效降低SHR的SBP，改善左心室肥厚(P＜0.01)，减少心肌间质及心肌小动脉周围的胶原(P＜0.01)，组织病理及电镜显示，替米沙坦治疗能显著改善SHR左心室重构。结论 替米沙坦能有效降低SHR血压，改善左心室重构。

替米沙坦;高血压;心室重构

高血压的主要危害在于其对重要靶器官如心、脑、肾、视网膜等结构和功能的影响。其中，左心室肥厚是心脏在长期超负荷下，通过增加室壁厚度来维持室壁应力的一种适应性反应，是高血压最常见的并发症之一〔1〕。高血压性心室重构主要表现为左室肥大和心肌纤维化。心室重构使心肌硬度增加、顺应性下降，导致心肌收缩和舒张功能障碍，与心力衰竭、心律失常等心脑血管疾病的发生和发展密切相关。因此，抑制心肌纤维化、预防和逆转心室重构有极其重要的临床意义。非肽类长效血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂(AR1B)替米沙坦，不仅用于心衰治疗，而且是高血压治疗的一线药物，并且是高血压心肌肥厚的首选药物〔2〕。本文研究替米沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)收缩压以及左心室结构的影响，探讨替米沙坦逆转心室重构的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物

健康12周龄雄性SPF级SHR 16只，体重200～220 g;另设同龄雄性WKY大鼠为正常对照8只，体重(230±6)g;均由吉林大学实验动物中心提供。

1.2 药品和试剂

替米沙坦由德国勃林格殷格翰公司提供(进口商品注册证号：X20010324，商品名：美卡素)。

1.3 方法和指标检测

1.3.1 实验分组与给药 将SHR大鼠随机分成2组，分别为替米沙坦组及SHR空白对照组，各8只。所有实验动物均在清洁、通风、温度20℃ ～22℃、相对湿度40% ～70%环境下单只分笼喂养。治疗组以替米沙坦10 mg·kg－1·d－1配成溶液3 ml灌胃，SHR空白对照组和WKY组给予等量蒸馏水灌胃。所有动物均以标准饲料喂养，实验共进行8 w。

1.3.2 血压的测定 采用大鼠尾动脉血压计于实验前及实验8 w末测量大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压(SBP)，重复3次，取平均值。比较3组大鼠不同时间血压变化。

1.3.3 左心室重量/体重(LVW/BW)测定 治疗8 w后，测量两组大鼠体重(BW)后处死动物，经腹腔注射戊巴比妥40 mg/kg麻醉，迅速开胸，取出心脏，沿主动脉根部剪去大血管，冰生理盐水充分灌洗，滤纸吸干，沿房室交界处去除心房和大血管，紧贴室间隔右侧剪下右心室游离壁，剩余部分称重，为左心室重量(LVW)。同时测量左室壁厚度，计算LVW/BW。

1.3.4 心肌组织病理及电镜观察 动物处死后，用锐利的刀片切取左心室心尖部心内膜下小块心肌，10%中性甲醛固定，石蜡包埋，切片厚度5 μm，HE染色，光镜下观察。同时取心尖部心内膜下小块心肌，3%戊二醛固定;然后经1%四氧化锇固定，乙醇梯度脱水，环氧树脂包埋剂包埋，超薄组织切片，JEM-1200EX型透射电子显微镜下观察心肌组织超微结构变化。

1.3.5 心肌胶原组织学测定及定量分析(Van Gieson法) 石蜡切片常规脱蜡至水，1%酸性品红和0.5%的饱和苦味酸染色。心肌细胞呈黄色，胶原呈红色。切片装在Olympus CX40型显微镜下观察，采用CIAS-1000细胞图像分析系统对结果进行分析。经标准灰度校正后，随机取5个视野计算胶原容积百分比(CVF，%)=胶原面积/全视野面积×100%，血管周围胶原面积(PVCA，%)为每一标本测量5支呈横切面壁内小动脉的周围胶原面积与管腔面积的比值，取其均值。

1.4 统计学处理

软件进行统计处理。多组间比较用ANOVA方差分析，组间比较用q检验。

2 结果

2.1 收缩压和左心室肥厚的变化

随机分组前SHR血压明显高于WKY大鼠(P＜0.01)，SHR组与替米沙坦组之间血压差异无统计学意义(P＞0.05)。实验8 w后，WKY组大鼠血压基本不变，替米沙坦组血压明显低于SHR组(P＜0.01)，但仍高于WKY组大鼠血压。替米沙坦治疗8 w后，其LVW/BW和左室壁厚度与SHR组相比差异有统计学意义(P＜0.01)，但仍高于WKY组大鼠，说明替米沙坦治疗8 w后，能在一定程度上抑制SHR左心室。肥厚的增加。见表1。

2.2 胶原容积分数的变化

心肌纤维化主要表现为心肌胶原成分增多，与WKY组比较，SHR对照组的心肌间质和血管周围胶原显著增加，可见大量胶原纤维联结成网状包绕心肌组织，其CVF和PVCA均显著高于WKY组(P＜0.01);与SHR对照组相比，替米沙坦组心肌间质和血管周围胶原均显著减少，其CVF和PVCA明显降低(P＜0.01)。见表2。

表1 两组大鼠尾动脉压、LVW/BW、左室壁厚度的比较(± s，n=8)

表1 两组大鼠尾动脉压、LVW/BW、左室壁厚度的比较(± s，n=8)

与WKY组比较：1)P＜0.01;与SHR对照组比较：2)P＜0.01;下表同

组别 SBP(mmHg)治疗前 治疗后LVW/BW(mg/kg)左室壁厚度(mm)109.0±2.8 109.6±2.3 2.71±0.05 2.98±0.05 SHR组 176.2±4.31) 191.8±8.51) 4.39±0.051) 4.50±0.041)替米沙坦组 174.5±3.31)149.8±3.51)2)3.27±0.061)2)3.75±0.031)2)WKY组

表2 两组胶原容积分数的比较(%± s，n=8)

表2 两组胶原容积分数的比较(%± s，n=8)

3.44±0.19 1.14±0.05 SHR组 5.80±0.041) 1.99±0.061)替米沙坦组 4.44±0.061)2) 1.39±0.051)2)CVF PVCA WKY组组别

2.3 心肌病理学检测

2.3.1 两组心肌的形态学改变(光镜观察) WKY组心肌细胞排列整齐，无增粗，细胞核大小均一，胞质染色均匀;SHR对照组心肌排列稀疏、紊乱，肌纤维明显增粗;治疗组可见心肌纤维稍有增粗，排列较整齐紧密，较SHR组稍有改善。

2.3.2 两组心肌超微结构的比较 SHR对照组与WKY组相比，心肌纤维排列稀疏、紊乱，线粒体结构肿胀、破坏甚至呈空泡状，Z线增宽模糊，可见细胞核染色质边聚;替米沙坦组较SHR组好转，多数肌纤维排列紧密，线粒体结构完整，排列适当，细胞核无边聚，核间间隙尚可。

3 讨论

本实验结果说明替米沙坦能有效降低SHR血压及逆转左室肥厚;替米沙坦能有效抑制SHR心肌纤维化。这与吴进寿等〔3〕研究结论一致。另外，从组织病理学HE染色及超微结构也可见，替米沙坦组较SHR组有明显好转。

心肌肥厚是独立于血压的心血管疾病主要危险因素之一。高血压性心室重构主要表现为左室肥大和心肌纤维化，在自发性高血压大鼠模型中，此病变存在于大鼠模型的整个高血压阶段，并随鼠龄的增加而逐渐加重〔4〕。心室重构是由一系列复杂的分子和细胞机制导致的心肌结构、功能和表型的变化，循环和局部的肾素-血管紧张素系统(RAS)激活在心室重构的发生发展过程中起到了重要作用〔5〕，不仅影响血流动力学，还参与心室重构的形成过程。RAS的这种作用主要通过血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)而实现，AngⅡ主要有两种受体，即AT1和AT2受体〔6〕。AngⅡ通过与其受体结合进而激活 G蛋白、磷脂酶 C(PLC)及第二信使三磷酸肌醇(IP3)、二酰甘油(DAG)、MAPK系统，调控胞质钙离子浓度与PKC，激活原癌基因c-fos、c-myc，刺激心肌纤维细胞有丝分裂，促进成纤维细胞胶原合成〔7〕，抑制胶原分解酶基质金属蛋白酶活性及胶原蛋白合成等机制诱导心肌细胞肥大和间质增生，最终导致心室重构。但AngⅡ除了经典的ACE途径外，还可来源于局部的糜蛋白酶等各种途径，在心脏左心室约有80%的AngⅡ是由糜蛋白酶途径形成，这种心脏局部RAS在心室重构中的作用较循环RAS更为重要，并且不能被 ACEI阻断〔8〕。替米沙坦作为新一代长效AR1B，脂溶性较强，易与心脏、血管及肾脏等靶器官AT1受体特异性结合，能减少AT1受体介导AngⅡ引起的心室重构，同时反馈性增加AngⅡ与AT2受体的结合，抑制心肌细胞分化、增殖，发挥保护心脏和改善心功能的作用。

综上所述，替米沙坦有效降压同时还有逆转SHR的左室重构的作用，此实验为该药的临床运用提供了实验依据。

1 Schillaci G，Verdecchia P，Porcellati C，et al.Continuous relation between left ventricular mass and cardiovascular risk in essential hypertension〔J〕.Hypertension，2000;35：580-6.

2 WHO-ISH.Hypertension Guidelines Committee.1999 World Health Organization-International Society of Hypertension guide-lines for the management of hypertension〔J〕.Hypertension，1999;17(1)：151-85.

3 吴进寿.自发性高血压大鼠(SHR)心肌壁内小动脉重构及替米沙坦的干预作用〔D〕.福建医科大学，2003.

4 余国龙，梁晓秋，谢秀梅，等.高血压大鼠心脏肥厚过程中心肌细胞凋亡心肌纤维化动态观察〔J〕.高血压杂志，2001;9(3)：322-5.

5 余江恒，李法琦，胡咏梅，等.替米沙坦对压力超负荷性大鼠心室重构及心肌营养素-1表达的影响〔J〕.中国心血管病研究杂志，2005;11(8)：850-3.

6 余江恒.压力超负荷性左室肥厚大鼠AngⅡ、AT1R、Cardiotrophin-1与gp130在心肌组织的变化及替米沙坦的干预影响〔D〕.重庆医科大学，2004.

7 张雅娟，赵玉兰，董 静.替米沙坦对异丙肾上腺素所致心肌肥厚大鼠GATA4表达的影响〔J〕.中国现代医药杂志，2011;2(1)：10-2.

8 朱伟旺，赵凤琴.替米沙坦对自发性高血压大鼠左心室重塑的影响〔J〕. 中国心血管病研究，2007;8(6)：600-2.

R544

〕 A 〔

1005-9202(2012)22-4938-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.22.039

吉林省科学技术厅资助项目(No.20090473)

冷吉燕(1965-)，女，博士生导师，教授，主要从事老年高血压、冠心病的临床及基础研究。

刘 佳(1984-)，女，医师，主要从事老年高血压机制及治疗相关研究。

〔2012-01-29收稿 2012-02-10修回〕

(编辑 曲 莉)