HPLC法测定舒筋定痛片中大黄酚的含量

颜春华

（丹东市食品药品检验所，辽宁 丹东 118002）

舒筋定痛片具有活血散瘀，消肿止痛的功效，主治跌打损伤，慢性腰腿疼，风湿痹痛，由大黄、当归、红花、骨碎补等九味药材组成。该中成药收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册[1]，标准中无定量指标，不能有效控制其质量，我们采用了HPLC法[2]对方中大黄的主要有效成分之一的大黄酚进行含量测定。方法简便、准确，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本Shimadzu公司LC-10ATVP高效液相色谱仪；检测器：SPDM10AVP；Class-vp工作站。

1.2 试药

大黄酚对照品：由中国药品生物制品检定所提供，批号为110796-200309（供含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；其他试剂均为分析纯；舒筋定痛片为市售品（批号为061202，061203，061204）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Diamonsil®（钻石）C18（5μm，250×4.6mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；检测波长：430nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；理论板数按大黄酚峰计算不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄酚对照品10.30mg，置25mL量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取此液5mL，置100mL量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液至刻度，摇匀，即得（每1mL含大黄酚20.6μg）。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，置水浴上加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，加盐酸2mL，摇匀，置水浴中加热回流1h，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15mL，合并三氯甲烷液，置水浴上蒸干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解，移置50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，结果见图1A、B。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品储备液1、3、5、7、9mL，分别置10mL量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液至刻度，摇匀。分别吸取各浓度溶液10μL注入液相色谱仪中，测定峰面积，以大黄酚进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得回归方程为：Y=57076.75+1140308.131X，r=0.99997，表明大黄酚在0.412～3.708μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 阴性对照试验

按处方比例配制不含大黄的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备，测定，结果在大黄酚对照品吸收峰位置处无干扰（见图1C）。

2.6 精密度试验

分别精密吸取20.6μg/mL的大黄酚对照品溶液10μL，按正文含量测定项下色谱条件，连续进样5次，测定峰面积，结果平均峰面积为4802857，RSD=1.07%。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液分别放置2、4、8、12、16、20、24h测定供试品中大黄酚的峰面积，测得其峰面积的平均值为4882147，RSD为1.12%，表明供试品溶液至少在24h内稳定。

2.8 重现性试验

图1 HPLC色谱图

表1 大黄酚回收率实验结果

取同一批号的供试品适量，精密称定6份，按含量测定项下的方法操作，制备供试品溶液，测定供试品中大黄酚的含量，结果平均含量为0.53mg/片，RSD=1.26%。

2.9 回收率试验

取已知大黄酚含量的舒筋定痛片样品（批号为061204，大黄酚含量为0.52mg/片，平均片重为0.2566g）约1g，精密称定，共计6份，分别精密加入大黄酚对照品溶液（0.4132mg/mL）5mL，按含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定舒筋定痛片中大黄酚的含量，计算回收率，测定结果见表1。

2.10 样品含量测定

按本质量标准含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批舒筋定痛片中大黄酚的含量，测定结果分别为0.56、0.53、0.52mg/片。

3 讨 论

3.1 本实验以甲醇与乙醇为溶媒对供试品进行提取，并加以考察，测定结果表明，两种溶媒提取效率基本相同，由于乙醇提取供试液中其他组分较多，易污染色谱柱，所以选用甲醇为提取溶剂。

3.2 在供试品提取方法的考察过程中，曾将酸水解后的供试品，滤过后直接进行测定，结果测定效果不理想，故采用酸水解后再用三氯甲烷进行提取，蒸干后，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液溶解定容，滤过后进行测定，结果杂质峰较少，且分离效果良好，故确定为供试品的提取方法。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.中药.中药成方制剂[S].第十五册.1997.

[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典:一部[S].北京:化学工业出版社,2005.