那他霉素稳定性研究

许艳芬

(通山县人民医院，湖北 通山437600)

那他霉素是一种从natalensis链霉菌中提取的多烯类抗生素，其作用机制与两性霉素B相同，属广谱抗真菌抗生素。在体外那他霉素具有抗多种酵母菌和丝状真菌，包括念珠菌、曲霉菌、头孢子菌、镰刀菌和青霉菌的作用。早期作为食品添加剂，是我国批准使用的食品添加剂之一。由于临床上普遍缺乏广谱、高效、安全的眼用抗真菌药物，国外将该产品制成5%混悬液型滴眼剂，商品名为那他真，用于治疗眼部真菌感染。该产品眼部能耐受且无毒性，是治疗浅层真菌性角膜炎的首选用药。作为治疗真菌性眼病的一线药物，本品也是唯一被美国药典收载的抗真菌性眼科用药。本文对该品种的稳定性进行了研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 仪器及试剂

LC-10AT液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器为(日本岛津公司生产);TL9900色谱工作站(北京泰立化电子技术有限公司);乙腈(色谱纯，Fisher公司，批号:081295)、四氢呋喃(色谱纯，天津市津科精细化工研究所，批号:20080122)、甲醇(色谱纯，Fisher公司，批号:080112)、氯化铵(分析纯，天津市化学试剂三厂，批号:20080629)、乙酸铵(分析纯，北京益利精细化学品有限公司，批号:20080407)。

供试品为黄石世星药业有限责任公司提供(批号:100101，100102，100103)，那他霉素对照品为USP对照品(批号:JOD180，含量:0.917mg/mg)。

1.2 方法

1.2.1 检测方法

①性状:肉眼直接观察;②pH值:pH计直接测定;③水份:卡氏法;④有关物质:HPLC自身对照法0;⑤含量测定:HPLC外标法10。

1.2.2 色谱条件

流动相:缓冲液(取乙酸铵3.0g和氯化铵1.0g溶于760ml水中)-乙腈-四氢呋喃(760∶240∶5);色谱柱:5μ 15cm ×4.6mm C18DIKMA Diamonsil;检测波长:303nm;流速:1.5ml/min;进样体积:20μl;柱温:室温。

1.2.3 溶液的配制

①供试品:精密称取本品约100mg，置100ml棕色量瓶中，加四氢呋喃5ml，充分振摇后再加甲醇60ml，再振摇使溶解并加水稀释至刻度，摇匀，即得。②对照溶液的配制:精密量取上述供试品溶液1ml置100ml棕色量瓶中，加甲醇60ml，再加水稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.4 测定方法

在上述液相色谱条件下，取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使那他霉素色谱峰的峰高为满量程的20% ～25%;再取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至那他霉素保留时间的约3倍。供试品中如含杂质峰(扣除溶剂峰)，用杂质峰的面积总和与对照溶液那他霉素主峰的面积做比较，计算杂质的量。

2 结果与讨论

2.1 高温试验

60℃试验:将批号为100101的本品，暴露放置于60℃的干燥箱中，于放置前和第5、10d取样，进行性状、pH值、水份、含量和有关物质的考察。结果见表1。

表1 那他霉素的高温(60℃)试验结果

结果表明，本品在60℃条件下放置10d，性状发生明显变化，pH值、水份、含量和有关物质基本不变，表明本品高温60℃不稳定。40℃试验:将批号为100101的本品，暴露放置于40℃的干燥箱中，于放置前和第5、10d取样，进行性状、pH值、水份、含量和有关物质的考查。结果见表2。

表2 那他霉素的高温(40℃)试验结果

结果表明，本品在40℃条件下放置10d，性状、pH值、水份、含量和有关物质基本不变，表明本品在40℃下比较稳定。

2.2 湿度试验

将批号为100101的本品，暴露放于盛有KNO3饱和溶液(相对湿度92.5%)的干燥器中，于室温下放置，于放置第5、10d取样，进行性状、pH值、水份、含量和有关物质考查，同时考查吸湿增重情况。结果见表3。

表3 那他霉素的高湿试验结果(RH92.5%)

结果表明，本品在 RH92.5%条件下放置10d，性状、pH值、水份、含量和有关物质均未发生明显变化，10d后增重只有0.02%，说明本品对高湿较稳定。

2.3 强光照射试验

将批号为100101的本品，于照度4500lx下放置，于放置前和第5、10d取样，进行性状、pH值、水份、含量和有关物质考查。结果见表4。

表4 那他霉素的强光照射试验结果

结果表明，本品在强光下照射10d，表层颜色变黄，水份变小，pH值、含量和有关物质未发生明显变化，说明本品对光不稳定。

2.4 加速试验及其结果

将本品三批100101，100102，100103用药用塑料袋分装，外面用圆纸桶密闭后，放于盛有NaCl饱和溶液(RH 75%)的干燥器中，将此干燥器放于40℃恒温培养箱中，于放置前和1、2、3、6月末取样，进行性状、pH值、水份、含量和有关物质考查。试验结果见表5、表6和表7。

表5 100101批那他霉素加速试验结果

表6 100102批那他霉素加速试验结果

表7 100103批那他霉素加速试验结果

试验结果表明，本品经加速试验6个月，三批供试品各项指标均无明显变化，比较稳定。

2.5 长期留样观察试验结果

将三 批 本 品(批 号 为 100101，100102，100103)用药用塑料袋分装，外面用圆纸桶密闭后，放于盛有NaNO3饱和溶液(RH 62%)的干燥器中，将此干燥器放于25℃恒温培养箱中，于放置前和第3、6、9、12、18 月取样，进行性状、pH 值、水份、含量和有关物质检查。结果见表8、9和表10。

表8 100101批那他霉素长期试验结果

表9 100102批那他霉素长期试验结果

表10 100103批那他霉素长期试验结果

结果表明，本品长期留样放置18个月，各项指标基本不变。

2.6 破坏性试验

溶剂的处理:分别量取溶剂(四氢呋喃∶甲醇∶水 =5∶60∶35)5ml，分别置于 3 个试管中，在 3个试管中依次加入3滴6mol/L的盐酸溶液、3滴饱和氢氧化钠溶液、3滴30%的双氧水，摇匀，放置过夜后，进样分析。

供试品溶液的处理:分别取本品100101批供试品溶液5ml置于3个试管中，与溶剂破坏性试验同法处理，进样分析。另将本品 100101批在105℃高温放置4h后和照度4500Lx下放置10d后，各取适量照供试品溶液配制方法配制，进样分析。结果见表11。

表11 破坏性试验结果

试验结果表明，本品经酸、碱过夜破坏后，主峰全部降解，表明本品对酸碱均不稳定。后取供试品溶液5ml 2份分别加入3滴6mol/L的盐酸溶液，3滴饱和氢氧化钠溶液，放置1h后进样。酸破坏后，相邻色谱峰与主峰的分离度为2.3和4.0，碱破坏后，相邻色谱峰与主峰的分离度为2.7和13.0，杂质峰不干扰本品有关物质测定;经氧破坏后，未产生新的杂质峰，表明本品对氧较稳定，相邻色谱峰与主峰的分离度为1.5和3.6，均与主峰良好分离;经高温破坏后，颜色变为深黄色，但未产生新的杂质峰，相邻色谱峰与主峰的分离度为1.7和3.8，均与主峰良好分离;经光照10d破坏后，表层颜色变黄，但未产生新的杂质峰，相邻色谱峰与主峰的分离度为1.7和4.0，均与主峰良好分离。

3 小结

①影响因素试验表明，本品在高温60℃放置10d颜色已变深黄色，pH值、水份、有关物质和含量基本不变，本品对高温60℃不稳定;40℃和RH92.5%放置10d，性状、pH值、水份、有关物质和含量基本不变;光照下10d后表层颜色变深，水份减小，pH值、有关物质和含量基本不变，本品对光不稳定。本品的贮藏条件为密闭、遮光保存。②本品3批加速试验表明，本品在40℃、RH 75%的条件下加速6个月，各项考察指标基本不变，比较稳定。③本品3批长期留样18个月的试验表明，各项考察指标基本不变，比较稳定。

综上所述，本品对高温、光照、强酸、强碱不稳定，宜密闭、遮光保存。