不同炮制方法对甘遂急性毒性影响的研究

张姗姗，孙立立，石典花，张 敏，虞慧娟，孙付军

（1.山东中医药大学，山东 济南 250014；2.山东省中医药研究院，山东 济南 250014）

甘遂为大戟科植物甘遂Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的干燥块根，始载于《神农本草经》，因其性苦寒，药性峻烈列为下品。甘遂具有泻水逐饮，消肿散结的功效，用于水肿胀满，胸腹积水，痰饮积聚，气逆喘咳，二便不利，风痰癫痫，痈肿疮毒等症［1］。现代研究表明，甘遂具有抗肿瘤、抗生育、抗病毒、调节免疫系统等活性［2］，临床常用于治疗晚期食道癌、乳腺癌等恶性肿瘤以及慢性支气管炎哮喘等症［3］。甘遂有生用或炙用之分，因其有毒，临床上多用其醋炙品，以降低毒性，缓和药性。目前对甘遂醋炙的研究主要集中在醋炙前后化学成分变化［4-8］、毒性［9-11］、泻下作用［10-11］变化等方面。对甘遂醋炙减毒的影响因素的研究尚未见文献报道，本实验通过对甘遂及不同炮制方法制备的炮制品进行急性毒性研究，以期明确甘遂醋炙减毒的影响因素，并在此基础上比较甘遂、醋甘遂对小鼠各脏器组织的影响，研究结果为揭示甘遂醋炙减毒机理提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 索氏提取器；HH—4型数显恒温水浴锅 (金坛市晶玻试验仪器厂)；RE—2000型旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂)；DFZ—6050型真空干燥箱 (上海精宏试验设备有限公司)；B3200S—T超声机 (上海必能信超声有限公司)。

1.2 试药 石油醚 (天津市化学试剂一厂，批号:100523)；乙酸乙酯 (天津市化学试剂一厂，批号:100531)；丙酮 (天津市富宇精细化工有限公司，批号:100627)；甲醇 (天津市化学试剂一厂，批号:100531)为分析纯；蒸馏水。

龙门米醋 (北京王致和味滋康食品有限公司，生产日期:20100127)。

甘遂药材由由安徽亳州沪谯中药饮片厂提供，产地为陕西，由山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定为大戟科大戟属植物甘遂Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的干燥块根。

醋炙甘遂、清炒甘遂、清炒拌醋甘遂、生品拌醋甘遂均为实验室自制。

1.3 实验动物及条件 昆明种SPF级小鼠 (20±2)g，雌雄各半，均由山东大学实验动物中心供应，许可证号:SCXK(鲁)20090001。按本实验室SOP进行饲养管理。饲养室温度19～24℃，相对湿度40%～65%。山东省中医药研究院实验动物中心，许可证号:SYXK(鲁)20050052，SPF级。全价营养颗粒饲料，山东省实验动物中心提供，许可证号:SCXK(鲁)20040014，自由摄食。

2 实验方法和结果

2.1 供试饮片的制备

2.1.1 醋炙甘遂 取净甘遂适量，加入30%的米醋，润透，置预热至230℃的铁锅内，不断翻炒30 min，取出，晾凉，即得。

2.1.2 清炒甘遂 取净甘遂适量，加入30%的蒸馏水，润透，置预热至230℃的铁锅内，不断翻炒30 min，取出，晾凉，即得。

2.1.3 清炒拌醋甘遂 取净甘遂适量，加入30%的蒸馏水，润透，置预热至230℃的铁锅内，不断翻炒30 min，取出，晾凉，再加入30%的米醋，晾干，即得。

2.1.4 生拌醋甘遂 取净甘遂适量，加入30%的米醋，润透，晾干，即得。

2.2 供试样品的制备 取甘遂生品和各炮制品粉末各250 g(过40目筛)，装入滤纸筒中，置于索氏提取器中，依次用750 mL石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇提取，直至无色，减压回收溶剂，得各极性部位浸膏备用。

2.3 甘遂生品和不同炮制品各极性部位急性毒性的研究［12］

2.3.1 有毒部位筛选 取甘遂生品和醋炙品的各极性部位浸膏适量，配成最大浓度，进行急性毒性实验，只有石油醚部位出现小鼠死亡，其他部位均无死亡。筛选出甘遂的有毒部位为石油醚部位。

2.3.2 实验浓度预实验 以最大浓度为初始给药浓度，按比例稀释，筛选出甘遂生品和各炮制品0～100%致死量范围。

取小鼠250只，随机分为5组，每组10只，根据预实验筛选出的实验浓度，设立由高到低5个实验浓度组，相邻组间的浓度稀释倍数为0.6，实验前小鼠禁食不禁水16 h，实验从低浓度开始，按20 mL/kg的剂量灌胃给药。给药后观察7 d，记录各实验组小鼠中毒反应、死亡数和死亡状态。给药0.5 h后，部分动物出现呼吸急促、蜷缩、抱团、全身抖动、竖毛等中毒症状；给药1 h后，甘遂生品高浓度组出现动物死亡，对死亡动物立即进行解剖，发现小鼠出现肠系膜充血，肠水肿等现象，未死亡小鼠出现泻稀黄黏稠便的现象，其余组也有小鼠出现泻稀黄黏稠便的现象；给药4 h内，甘遂各炮制品的高浓度组均有小鼠出现死亡，死亡状态与甘遂生品高浓度组死亡小鼠状态相似；给药24 h之内，甘遂生品及其炮制品的其他浓度组也有小鼠出现死亡；给药36 h后，各组小鼠均无继续死亡。根据最终死亡数，计算各组死亡率，按照改良寇氏法公式计算半数致死量LD50和95%可信限范围，结果见表1。

表1 甘遂生品及其各炮制品 (等生药量)石油醚部位LD50Tab.1 LD50of petroleum extract of Kansai Radix and different processed products(equivalent of the amont of crude drug)

由表1可以看出，甘遂生品毒性最大，醋炙品毒性最小，生拌醋品、清炒品、清炒拌醋品毒性居中，且依次减小。

2.4 甘遂生品及醋炙品对小鼠各脏器病理组织学影响的研究 取昆明种小鼠30只，雌雄各半，分为3组，即甘遂生品石油醚组 (1.296 g/mL)、醋品石油醚组 (1.296 g/mL)和空白对照组，每组10只，以20 mL/kg的剂量灌胃给药，给药后24 h，脱颈椎处死，立即取出小鼠的心脏、肝脏、脾、肺脏、肾脏和小肠组织作病理组织切片，实验结果见表2。

表2 甘遂生品及醋炙品对小鼠各脏器病理组织学影响实验结果Tab.2 Results of impact on histopathological of various organs of mice by Kansui Radix and stir-baked Kansui Radix with vinegar

3 小结与讨论

3.1 根据急性毒性实验结果，发现甘遂生品的毒性最大，醋炙品的毒性最小，生拌醋品、清炒品和清炒拌醋品的毒性居中，且依次减小；甘遂醋炙品采用先加醋后加热的炮制方法，清炒品采用单纯加热的炮制方法，清炒拌醋采用先加热后加醋的炮制方法，生拌醋采用单纯加醋的炮制方法，由此可见，加热是使甘遂毒性降低的主要因素，加醋是次要因素，两者合用更利于毒性的降低，且加热和加醋的顺序对甘遂毒性的降低也有一定的影响，先加醋再加热更利于毒性的降低，进一步验证了甘遂传统的炮制方法是科学、合理的。

3.2 为进一步比较和验证醋炙对甘遂的毒性影响，分别对生甘遂和醋甘遂对小鼠各脏器组织的影响进行病理组织学显微观察，结果空白对照组各脏器组织切片显微观察正常，生甘遂组和醋甘遂组均具有一定的肠毒性、肝毒性和脾毒性，且生品的毒性要明显强于醋炙品的毒性，此外，生甘遂还具有一定的肾毒性和肺毒性。该研究结果进一步诠释了甘遂醋炙确能降低毒性的炮制理论。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:81.

［2］郭晓庄.有毒中草药大辞典［M］.天津:天津科技翻译出版公司，1992:7.

［3］王立岩.甘遂的化学成分及其生物活性的研究 ［D］.沈阳:沈阳药科大学，2003.

［4］刘 悦，刘志强，李慧琳，等.传统中药甘遂根中二萜类化学成分的电喷雾质谱研究［J］.高等学校化学学报，2008，29(9):1727-1735.

［5］潘 勤，闵知大.甘遂中巨大戟萜醇型二萜酯类化学成分的研究［J］.中草药，2003，34(6):489-489.

［6］陈云利，袁 丹，徐 鑫.甘遂中麻风树烷型大环二萜类化学成分研究［J］.中国中药杂志，2008，33(15):1836-1839.

［7］任树林，张楠楠，刘竹兰，等.甘遂炮制前后整体化学成分变化的研究［J］.中药材，2007，30(6):639-640.

［8］刘艳菊，夏 艺，李水清，等.甘遂醋炙前后化学成分的变化［J］.中国医院药学杂志，2010，30(5):372-374.

［9］李水清，许 康，刘艳菊，等.甘遂炮制前后不同提取部位急性毒理实验［J］.湖北中医杂志，2010，32(10):71-72.

［10］耿 婷，黄海燕，丁安伟，等.甘遂炮制前后各部位刺激性和泻下作用研究［J］.中南药学，2008，6(4):385-388.

［11］黄海燕，束晓云，丁安伟，等.甘遂和醋甘遂醇提物及其不同极性部位的药效和毒性研究［J］.药物研究，2008，17(17):3-4.

［12］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海:上海科学技术出版社，1991:6.