高效液相色谱法测定盐酸川芎嗪注射液的含量

江苏省泰州市食品药品检验所（225300）帅玲

盐酸川芎嗪注射液（Ligustrazine Hydrochloride Injection）临床用于闭塞性脑血管疾病。现行大多采用紫外吸收系数法测定其含量，专属性差。本文采用高效液相色谱法测定含量，操作简便，专属性强。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪，Waters2996二极管阵列检测器；岛津UV－2550紫外分光光度计；盐酸川芎嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号110817-200305）；盐酸川芎嗪注射液（上海现代哈森药业有限公司，规格：2ml∶40mg，批号：11032912）；水为娃哈哈纯化水，甲醇为色谱纯。

附表1 回收率试验结果（n＝6）

附表2 样品含量测定结果（标示量/%）

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：waters symmetry C18柱（150mm×4.6mm,3.5μm）；流动相：甲醇－水（40∶60）（用三乙胺调pH值至7.0）；流速0.8ml/min；柱温：35℃；检测波长：280nm；进样量：20μl。

2.2 溶液的制备 对照品溶液：精密称取盐酸川芎嗪对照品19.51mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液：精密量取样品1ml（约相当于盐酸川芎嗪20mg），置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。取注射用水作为空白溶液。

2.3 专属性考察 分别取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液，按“2.1”项下色谱条件试验。结果空白溶液无干扰，且盐酸川芎嗪峰与相连峰的分离度符合规定，理论板数按盐酸川芎嗪计算约为10000。

2.4 标准曲线的制备 精密量取对照品储备液1，2，3，4，5ml，分别置20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。按照“2.1”项下色谱条件试验，记录色谱图。以峰面积（A）对质量浓度（C）进行线性回归，方程为A=51996C+11096（r＝1.000）。结果表明，盐酸川芎嗪质量浓度在9.755～48.78mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度与重复性实验 取对照品溶液（19.51mg/L），重复进样5次，测定峰面积RSD为0.25%(n＝5)；取供试品，平行制备5份供试品溶液，分别测定。盐酸川芎嗪的平均含量为102.5%，结果RSD为0.40%（n＝5），表明本方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取供试品，分别于0、6、12、18、24h进样20μl，记录峰面积，RSD分别为0.42%，表明其在24h内稳定。

2.7 回收率试验 精密量取已测知含量的样品1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品储备液；精密量取供试品储备液5ml置50ml量瓶，共6份，分别精密加入对照品储备液4.0，4.0，5.0，5.0，6.0，6.0ml，加水稀释至刻度，按样品含量测定项下方法测定，计算回收率（见附表1）。

2.8 样品含量测定 取对照品溶液与样品溶液各20μl，按“2.1”项下色谱条件测定，记录盐酸川芎嗪峰面积，按外标法计算含量，并与紫外-可见分光光度法测定结果作比较（见附表2）。

3 讨论

在试验中，参照文献[1][2]中的流动相，采用甲醇－水（40∶60）（用三乙胺调pH值至7.0）为流动相时，出峰时间适宜，峰形较好。利用Waters 2996检测器对供试品溶液和对照品溶液在200～350nm进行3D图谱扫描，结果在280nm处有最大吸收，据此选择280nm为测定波长。结果显示，高效液相法专属性强，测定结果准确，而紫外-可见分光光度法吸收系数法专属性差，且易受外界干扰。