麦门冬汤对大鼠肺纤维化形成阶段肺病理损害及下丘脑多巴胺、去甲肾上腺素、五羟色胺的干预作用

杨美凤 谢忠礼 宋建平▲

1.河南省濮阳市中医院风湿免疫科，河南濮阳 457000；2.河南中医学院基础医学院，河南郑州 450008

肺间质纤维化简称肺纤维化。其起病隐袭，以进行性呼吸困难、活动后加重为突出症状，部分患者可出现干咳或有少许白色黏液痰。可伴有食欲减退、消瘦、乏力等全身症状[1]。肺纤维化属于中医肺痿、肺痹范畴，而与肺痿更相似。肺痿是指肺气虚弱，失于宣肃，肺叶痿弱不振所致的以咳吐浊唾涎沫为主的一种病症，有虚热和虚寒两种，而以虚热者多见，多种肺部疾病迁延不愈，最终都会发展为肺痿。现代医学认为肺纤维化是多种弥漫性肺间质疾病的不良转归，目前西医常用糖皮质激素等治疗，但其有效率较低，远期效果差；另一方面若长期大量应用激素药物治疗，易引起代谢紊乱、免疫抑制、继发感染等不良反应。近年来中药治疗肺纤维化少有报道，笔者导师在前期研究工作中观察了瓜蒌薤白汤、麦门冬汤、肾气丸和大黄蟅虫丸对平阳霉素所致大鼠肺纤维化模型（1～28 d）的影响，结果表明四方均能减轻肺泡炎及纤维化的程度，抑制肺组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的过度表达[2-4]。“辨证论治”是中医的灵魂，在疾病的不同病变阶段，其中医病机多不同，为了观察肺纤维化不同阶段与中医病机的相关性，在导师指导下，本课题通过观察麦门冬汤对肺纤维化模型形成阶段（造模后14～28 d）肺部病理及下丘脑NE、DA、5-HT水平的影响，了解该阶段神经系统微观变化及麦门冬汤对其干预作用，以此推断该阶段的中医病机，为肺纤维化中医药防治提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

普通级雌性健康 Wistar大鼠，体重（200±20）g，由河南省动物实验中心提供，饲养于河南中医学院动物实验中心，室温（22±2）℃，相对湿度60%，常规饲料喂养，饮水量不限。

1.1.2 主要实验药品

1.1.2.1 平阳霉素 哈尔滨博莱制药有限公司产品，批号：07010203，规格：8 mg/支，按 3 mg/kg体重给药，使用时用生理盐水配制成3 mg/mL，按0.1 mL/100 g气管内给药。

1.1.2.2 麦门冬汤颗粒剂 三九医药公司产品，麦门冬3 g/袋，批号：0704021；半夏 1 g/袋，批号：0706011；人参 1.5 g/袋，批号：0705081；甘草 1 g/袋，批号：0706011，上述药物均购于河南中医学院第三附属医院。麦冬、制半夏、生甘草、生晒参比例为 42∶6∶6∶9，参照动物与人体的体表面积折算系数，计算动物每日用药量，麦门冬6 g/kg、半夏0.84 g/kg、甘草0.54 g/kg、生晒参0.54 g/kg，用蒸馏水配制药液后按1.5 mL/100 g体重灌胃给药。

1.1.2.3 标准品和其他实验药品 生产厂家及批号同文献[5]。

1.1.3 主要实验仪器

F-4500荧光分光光度计，日立（HITACHI）。752N型紫外可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品。HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统武汉清平公司产品。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组

实验大鼠正常饲养3 d后，按体重随机分为正常组、模型组、麦门冬汤组，每组动物13只。

1.2.2 造模与用药

1.2.2.1 造模 本实验除正常组正常饲养外，模型组及麦门冬汤组造模具体方法同文献[5]。

1.2.2.2 用药 从造模后第14天开始，麦门冬汤组灌胃药液1.5 mL/100 g，模型组灌入等量蒸馏水。每日给药1次，1周后复查动物体重调整给药量，各组于造模后第28天处死。

1.2.3 肺脏病理组织学检查

实验结束时腹主动脉取血处死动物，取右肺下叶固定、脱水、包埋、切片，分别进行HE染色，参照文献[6]方法确定肺纤维化（-～+++级）的程度。

1.2.4 下丘脑NE、DA、5-HT含量测定

实验结束时快速断头取全脑，在经冰冻处理的玻片上分离出下丘脑，置于聚丙烯管中于-80℃保存至测定，采用荧光分光光度法检测。操作程序见文献[7]。

1.3 统计学方法

数据采用SPSS 13.0统计软件包处理，双侧检验，取α=0.05，对服从正态分布的计量资料数据以均数±标准差（±s）表示，组间差异性判断采用单因素方差分析，方差齐时用LSD法，方差不齐时用Dunnett T3检验；肺纤维化程度为等级计数资料，采用Radit分析，以R值表示，组间R值的显著性检验采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

正常组大鼠活泼好动，强壮肥硕，皮毛光滑，体重逐渐增加，呼吸平稳；模型组精神不振，行动迟缓，拱背蜷缩，皮毛干枯稀疏、无光泽，身体较其他组消瘦，呼吸急促；麦门冬汤组皮毛尚可，身体较壮，饮食较正常。

2.2 肺指数比较

模型组肺指数明显高于正常组（P<0.05），麦门冬汤肺指数明显低于模型组（P<0.05）。见表1。

表1 各组肺指数比较（±s）

表1 各组肺指数比较（±s）

注：与正常组比较，▲P＜0.05；与模型组比较，★P＜0.05

组别 只数 肺指数正常组模型组麦门冬汤组13 13 13 5.35±0.67 8.74±0.19▲6.82±0.65★

2.3 肺组织病理形态学观察

2.3.1 大体形态观察

正常大鼠肺呈粉红色，表面光滑；模型组肺脏体积缩小，肺表面凹凸不平，呈暗红色，边缘有出血点，弹性降低，表面有大小不等的灰白色结节。麦门冬汤组双肺色泽、体积、硬度、弹性、结节样改变等情况稍好，两肺颜色略暗红，双肺表面较模型组光滑，肺弹性尚可，偶见点状灰白色斑块。

2.3.2 肺病理学观察

HE染色正常组大鼠肺组织及肺泡间隔结构正常。模型组肺泡间隔明显增宽，成纤维细胞增生，炎症细胞浸润；肺泡结构破坏，部分肺泡腔萎缩消失。表明模型复制成功。麦门冬汤组与模型组比较，肺纤维化程度较轻。各组肺纤维化程度经Radit分析，模型组明显高于正常组（P<0.05），麦门冬汤组轻于模型组（P<0.05），纤维化程度由重到轻为：模型组＞麦门冬组＞正常组。见表2。

表2 各组肺纤维化程度比较

2.4 下丘脑 NE、DA、5-HT 比较

各组下丘脑NE值由大到小为：模型组＞麦门冬汤组＞正常组，模型组与正常组差异有统计学意义（P＜0.05）；DA值由大到小为：模型组＞麦门冬汤组＞正常组，模型组与正常组、麦门冬汤组差异有统计学意义（P＜0.05）。5-HT值由大到小为：模型组＞麦门冬汤组＞正常组，模型组与正常组、麦门冬汤组差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 下丘脑 NE、DA、5-HT 比较（±s，ng/g）

表3 下丘脑 NE、DA、5-HT 比较（±s，ng/g）

注：与正常组比较，▲P＜0.05；与模型组比较，★P＜0.05

组别 只数 NE DA 5-HT正常组模型组麦门冬汤组13 13 13 12.19±2.31 42.62±6.18▲27.24±5.11 16.40±1.71 57.95±5.15▲27.63±3.46★184.42±10.29 672.48±25.08▲325.52±17.69★

3 讨论

由本研究结果可以看出，无论从大鼠一般情况、肺指数比较还是从其肺组织病理形态学观察、检查，麦门冬汤组大鼠情况均较好，肺纤维化程度轻于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示麦门冬汤对肺纤维化模型形成阶段的肺部病理损害有防治作用。肺纤维化患者以呼吸困难、活动后加重为突出症状，且多伴有食欲减退、消瘦、乏力等全身症状，部分患者可出现干咳或有少许白色黏液痰。中医诊断应为胃脾纳运失常，肺胃气阴两虚，津不上承肺失宣肃，呼吸不利痰浊上逆。麦门冬汤是《金匮要略》中治疗虚热肺痿的主方，文中曰：“火逆上气，咽喉不利，止逆下气者，麦门冬汤主之。”该方由麦门冬、半夏、人参、甘草、粳米、大枣组成。诸药共凑清养肺胃，止逆下气之功以治疗肺胃阴液耗损，虚火上炎之证。喻嘉言云：“凡肺病有胃气则生，无胃气则死。胃气者，肺之母气也……”。强调了胃气的重要作用，所以，方中人参、甘草、粳米、大枣与麦冬相配，温而不燥以补益脾胃之气。培土生金，有助肺之气阴恢复；补气健脾以助麦门冬滋养胃津；于大量甘润之剂中加入辛燥之半夏，其辛燥之性被抑，而降逆之功犹存，既降肺胃之逆气又不致燥伤阴津，使麦门冬滋而不腻、补而不滞。可见麦门冬汤所治之证与肺纤维化的病机有很多相符之处，其能防治肺纤维化应在必然之中。提示在肺纤维化形成阶段有气阴两虚病机存在（由于操作不便，在模型灌胃麦门冬汤时，笔者没有配用大枣和粳米，可能对治疗效果有一定的影响）。肺纤维化中晚期，肺体积缩小，重量减轻，与肺痿原意相合；肺纤维化晚期呈蜂窝（网格状改变），甚至毁损肺，肺功能丧失殆尽[1]，与肺痿沉疴之肺叶萎弱不用，迁延反复，久治不愈颇相合。

现代医学认为神经、内分泌与免疫系统互相调控，研究三者神经递质在疾病过程中的变化和相互影响意义重大。下丘脑是中枢神经系统中能使机体内环境平衡的最重要部位，是皮质下内脏活动中枢，能调节交感和副交感神经以维持机体适宜的内环境。去甲肾上腺素能纤维起自蓝斑，终止于下丘脑背内侧核、视上核及室旁核。脑干的单胺能传入纤维对下丘脑神经元的各种亚型活动起作用。此外下丘脑可以通过垂体门脉和下丘脑-垂体束来调节垂体的功能，参与体温、体液平衡和内分泌系统的调节。故下丘脑是调节内分泌系统的重要中枢，对外周的单胺能神经系统也具有调节作用。

本研究发现模型组下丘脑NE、DA、5-HT含量均高于正常组（P＜0.05），提示下丘脑去甲肾上腺素能神经、多巴胺能神经和5-羟色胺能神经的活动在肺纤维化形成过程中发生了变化。麦门冬汤组下丘脑DA、5-HT含量明显低于模型组（P＜0.05），提示麦门冬汤防治肺纤维化机制可能与调节下丘脑多巴胺能、5-羟色胺能神经活动有关。

单胺能神经在中枢神经系统的活动是非常复杂的，神经组织之间和各神经系统之间存在着复杂的联系及各种相互调控作用。目前在肺纤维化形成过程中神经、内分泌和免疫系统的变化报道较少，本研究显示肺纤维化形成阶段下丘脑中NE、DA、5-HT含量均升高，麦门冬汤能使下丘脑中NE、DA、5-HT含量降低，肺纤维化程度减轻。曾有文献报道麦门冬汤加减治疗特发性肺间质纤维化取得良效[8]。

辨证论治是中医特色，近年来研究发现中医的证和现代医学微观指标之间存在联系，如发现肝郁时NE、DA、5-HT和肾上腺素等中枢神经递质，以及皮肤电位[9-10]等多项指标发生改变，并且多伴有交感神经偏亢。说明中医证型确实有其物质基础，但寻求它们之间的确切关系却较为困难。

以往发现瓜蒌薤白汤、麦门冬汤、肾气丸和大黄蟅虫丸都能减轻平阳霉素复制大鼠肺纤维化模型的纤维化程度。尽管本实验还不能表明肺纤维化模型的中医证型归属及NE、DA、5-HT含量变化与中医“证”的关系，但至少说明其在肺纤维化形成过程中，气阴两虚、阴阳两虚、痰瘀阻滞之病机可能同时存在，也可能某一时间以痰瘀为主，某一时间以虚为主。不论方药在哪一时间段发生作用，都可以减轻肺纤维化的程度，所以在临床上面对病机复杂的肺纤维化患者可以根据患者的具体情况认真辨证分析，在大量的作用相似方药面前有针对性地选用实验所用经方，减少盲目性，大大提高临床疗效。同时要想在中医“证”客观本质研究方面取得突破性进展，还需要从各方面作出艰苦的努力。

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[3]宋建平，李瑞琴，李伟，等.《金匮要略》不同方药对肺纤维化模型早期阶段的影响[J].中华中医药杂志，2006，21（11）：692-693.

[4]宋建平，刘方州，李伟，等.金匮肾气丸对肺纤维化大鼠肺组织中肿瘤坏死因子 α 表达的影响[J].中成药，2006，28（1）：78-80.

[5]宋建平，谢忠礼，李伟，等.瓜蒌薤白汤对大鼠肺纤维化形成阶段（造模后 14d-28d）下丘脑、海马 DA、NE、5-HT的干预作用[J].中国中医基础医学杂志，2011，17（6）：624-626.

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