肿瘤转移相关基因1与抑制基因KISS-1在胰腺癌中的表达及意义

刘 勇 刘建生 李居剑 王 艳

山西医科大学第一医院普外科，山西太原 030001

胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，具有局部侵袭力高、淋巴结转移早的特点，目前认为手术是其唯一的可治愈性手段，然而85%的胰腺癌患者就诊时已属晚期或发生远处转移，手术切除率仅为10%～15%[1]，故控制转移是提高患者预后的关键。近年来有关肿瘤转移相关基因1（metastasis associated 1，MTA1）和肿瘤转移抑制基因 KISS-1与肿瘤浸润和转移的关系日益受到人们的关注。笔者运用免疫组化法检测胰腺癌组织中MTA1与KISS-1蛋白的表达情况，在此基础上探讨其与胰腺癌病理指标的关系及二者的相关性，为胰腺癌的研究提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

山西医科大学第一医院2005年1月～2010年12月行手术切除并经病理证实的胰腺癌标本36例。其中，男23例，女13例，年龄45～77岁。高分化组11例，低中分化组25例。淋巴结转移组13例，无转移组23例。按2007年UICC标准TNM临床分期：Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期21例。所有患者术前均未接受放化疗治疗，临床资料完整。另取10例经病理证实的癌旁胰腺组织作为对照。

1.2 试剂与方法

MTA1兔抗人多克隆抗体，KISS-1兔抗人多克隆抗体以及二抗PV-6001均购自北京中杉金桥生物技术公司。所有石蜡标本均行4 μm连续切片，脱蜡至水后3%H2O2去离子水孵育，EDTA缓冲液加热修复抗原，依次滴加一抗二抗，用PBS液代替一抗做阴性对照，DAB显色，苏木素复染，树脂封片。每例均行Envision免疫组化二步法染色和HE染色，光镜观察。

1.3 结果判断

MTA1的表达主要在细胞核，而KISS-1的阳性表达则位于细胞质，均呈棕黄色颗粒。阳性结果判定方法参照刘源等[2]的标准，以染色强度及阳性细胞数综合判定。阳性细胞百分数：无细胞染色为0分，<10%为1分，10%～30%为2分，>30%为3分；显色强度：不显色或显色不清为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深棕色为3分。二项乘积0～1为阴性（-），2～3 为弱阳性（+），4～5 为中度阳性（++），>5 为强阳性（+++）。

1.4 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件包，进行χ2检验及Spearman等级相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTA1与KISS-1在胰腺癌中的表达情况

MTA1阳性染色主要位于细胞核中，部分位于胞浆，呈棕黄色。胰腺癌组织中的阳性表达率为77.8%（28/36），而在对照组癌旁胰腺组织中的表达为20.0%（2/10），二者相比较差异具有统计学意义（χ2=11.517，P ＜ 0.01）。

KISS-1蛋白阳性表达为细胞质中出现棕黄色颗粒物质。在36例胰腺癌组织中的阳性表达率[38.9%（14/36）]明显低于癌旁正常胰腺组织的 90.0%（9/10），（χ2=8.178，P ＜0.01）。

2.2 MTA1、KISS-1的表达与胰腺癌病理指标的关系

MTA1蛋白的阳性表达在不同的分化组、淋巴结转移组及临床分期组差异有统计学意义（P＜0.05），且随肿瘤分化程度的降低、淋巴结转移的产生及临床分期的提高而增高。而KISS-1蛋白的阳性表达则随分化程度的降低、淋巴结转移的出现及临床分期的进展而降低。同时，二者的表达均与患者的年龄、性别及肿瘤的部位无关（P＞0.05）。见表1。

表1 肿瘤转移相关基因1、肿瘤转移抑制基因KISS-1的表达与胰腺癌病理指标的关系（例）

2.3 MTA1与KISS-1在胰腺癌组织中表达的相关性

染色结果还发现，在28例MTA1表达阳性的胰腺癌组织中，仅有7例KISS-1亦表达阳性。经Spearman相关性分析表明MTA1与KISS-1的表达呈明显负相关（r=-0.533，P＜ 0.01）。 见表 2。

表2 肿瘤转移相关基因1与抑制基因KISS-1在胰腺癌中（例）

3 讨论

3.1 MTA1与胰腺癌的关系

该基因是1993年从鼠的乳腺癌细胞株中克隆出来的，因其参与肿瘤的转移，故命名为肿瘤转移相关基因1（metastasis associated 1，MTA1）。它是核小体重构及组蛋白脱乙酰基酶复合物NuRD （nucleosomeremodeling and histone deacetylase）的一个亚基。NuRD是一种具有染色质重构与组蛋白去乙酰化活性的多亚单基复合物[3]。MTA1蛋白在NuRD复合物中与去乙酰化酶（histone deacetylases，HDACs）紧密结合，并作为组蛋白去乙酰化酶的辅助启动因子，抑制转录过程。MTA1通过对细胞表面黏附分子、细胞骨架蛋白转录水平的调控使细胞间黏附力的下降，从而参与肿瘤细胞侵袭转移过程[4-7]。目前已有实验证实，MTA1基因表达与乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、非小细胞肺癌、前列腺癌等许多恶性肿瘤的浸润转移有密切关系[3]。本实验发现在胰腺癌组织中MTA1的阳性表达率为77.8%，高于癌旁组织中的表达。MTA1的阳性表达与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移情况及临床分期有关，且随肿瘤分化程度的降低、淋巴结转移的产生及临床分期增加而升高。提示临床上检测MTA1的表达可能有助于评估胰腺癌的分化程度及判断患者的预后。

3.2 KISS-1与胰腺癌的关系

该基因是在1996年发现的一个肿瘤转移抑制基因，可抑制肿瘤细胞的趋向性和侵袭性，并限制其迁移能力，从而抑制恶性肿瘤的侵袭与转移[8]。尽管到目前为止，KISS-1基因抑制肿瘤转移的具体机制尚未明确，但最新研究表明可能与信号传导途径有关，一方面它通过抑制MMP-9的活性和MAPK途径抑制细胞的移行能力；另一方面也可通过G蛋白耦联途径激发钙动员抑制肿瘤细胞增殖[9]。KISS-1在正常组织中如脑、胎盘、睾丸、肝脏和小肠中都有不同水平表达，而在多种存在转移的肿瘤组织中表达缺失[10]。大量研究已经证明KISS-1与黑素瘤、甲状腺癌、膀胱癌以及子宫内膜癌的转移密切相关[11-12]。本实验研究发现，KISS-1在胰腺癌组织中的阳性表达率38.9%显著低于癌旁胰腺组织的90.0%，并随分化程度的降低、淋巴结转移的出现及临床分期增加而降低。这说明KISS-1在胰腺癌的发生、发展及侵袭转移中起着重要作用，同时也预示KISS-1可能成为新的预测胰腺癌恶性潜能的标记物。

3.3 MTA1与KISS-1在胰腺癌组织中的关系

本实验结果表明MTA1和KISS-1存在负相关性，证实了二者在胰腺癌的浸润和转移过程中起着重要的相互作用。

总之，MTA1和KISS-1的异常表达与胰腺癌的发生、发展有密切关系。联合检测MTA1与KISS-1有望为预测胰腺癌侵袭和转移能力、选择临床治疗方案以及评价患者预后提供参考。

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