高效液相色谱法测定肾宝合剂中淫羊藿苷的含量

熊水莲 ，袁秀红 ，侯 莉

（1.江西制药有限责任公司质量检验部，南昌 330052；2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，南昌 330006）

肾宝合剂药理作用是调节阴阳，温阳补肾，扶正固本；主要用于腰腿酸痛、精神不振、夜尿频多、畏寒怕冷及妇女月经过多、白带清晰等。为确保产品质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定肾宝合剂中淫羊藿苷的含量，获得良好效果，为肾宝合剂的质量控制提供一种简便快速的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括G1379A真空脱气机，G1310A四元泵，G1313A自动进样器，G1314A紫外检测器。色谱柱Diamonsil C18，5 μm，4.6 mm×250 mm。

1.2 药品和试剂

淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号: 200501），肾宝合剂样品（江西制药有限责任公司，批号:1107062、1107063、1107064、1107065、1 107066）。甲醇、乙腈均为色谱纯，试验用水:新鲜纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Diamonsil C18，5 μm，4.6 mm×250 mm；流动相为乙腈-水（27∶73）；流速:1.0 mL·min-1，检测波长为 270 nm，柱温:30 ℃ ，进样量:20 μL。

2.2 溶液的制备

1）对照品溶液的制备:精密称取105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品10.3 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；再精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2）供试品溶液的制备:精密量取本品2 mL置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理10 min，放冷至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系的考察

分别吸取对照品溶液 1、2、4、6、8 mL，用甲醇稀释并定容至10 mL量瓶中，分别吸取20 μL，注入液相色谱仪中，以对照品选择量为横坐标，以峰面积为纵坐标做标准曲线。

回归方程为:Y=2.188217×104X-2415.6，r=0.9998。 线性范围为:1.04～8.32 μg·mL-1。

2.4 精密度测定

取同批样品5份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项所述的色谱条件分别进样平行测定5次，计算RSD为0.9%。说明精密度高，重复性好。

2.5 稳定性考察

按本品供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，室温密闭放置，于 0、2、4、6、8、10 h，分别进样20 μL，结果RSD为0.9%。结果表明本品按本法检测，其结果稳定性较好。

2.6 回收率实验

精密吸取已知含量的样品5 mL，置25 mL量瓶中，定量加入淫羊藿苷对照品溶液,加甲醇稀释至刻度，摇匀。共测定同批号的5个样品，结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.7 样品测定

取各批次样品按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项所述的色谱条件，分别精密量取对照品溶液及供试品溶液各20 μL，测定峰面积。按外标法计算，结果表2。结果表明，该5批肾宝合剂样品的含量均符合规定（每mL本品淫羊藿苷不少于0.10 mg）。

表2 5批次肾宝合剂含量测定结果

3 讨论

肾宝合剂其有效成分淫羊霍苷含量测定方法原为薄层色谱扫描法。但原测定方法在检测时样品处理较为复杂，实验耗时长，若处理不当，杂质较多，且难分离；相对误差较大，结果重现性差［1］。

为改进实验方法，本文采用HPLC测定肾宝合剂中淫羊藿苷的含量，用乙腈－水（27∶73）为流动相，样品分离度好。

因HPLC检测器为紫外检测器，所以HPLC波长的选择和紫外波长选择一致，均为选择最大吸收。通过全波长扫描，读取对应物质吸收峰最大时候的波长为270 nm，因而选用此波长，基线平稳，使理论板数和分离度达到高要求。

本研究结果显示用HPLC测定肾宝合剂中淫羊藿苷的含量具有操作简便、测定时间短、检测成本低、精密度高、重现性好、结果准确可靠的优点，可作为肾宝合剂的质量控制方法。

［1］郭拓云，于新兰，李革.肾宝合剂高效液相含量测定方法的研究［J］.新疆中医药，2010，28（3）:283-284.