马钱子几种炮制品质量控制研究

王 静，邓富文，蒋艳婷，张谊柱，段钗凤

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

马钱子又称番木鳖（拉丁名Semen strychni），是常用的大毒中药。其中的主成分士的宁和马钱子碱是中枢神经惊厥剂，能引起中枢和脊椎神经的强烈兴奋和惊厥。国内外学者研究证明马钱子碱具有显著的镇痛、抗炎、抗肿瘤、中枢神经系统兴奋等作用，药理和临床应用价值十分突出〔1〕。由于马钱子碱的箭毒样作用为一种神经毒，会使神经节阻断，引起呼吸麻痹等〔2〕，具有一定的惊厥作用和明显的镇咳、祛痰作用，因此，在马钱子及其制剂的质量控制中马钱子碱的含量不应忽视。2010版《中国药典》对马钱子碱的含量做了明确规定，要求不得少于0.80%。本文通过对几种马钱子炮制品的马钱子碱的含量测定，意在建立马钱子碱的紫外分光光度快速分析法及对马钱子的几种炮制方法进行筛选。

1 仪器和试剂

1.1 仪器 TU-1901双光束紫外-可见风光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；梅特勒电子天平AE240（梅特勒仪器有限公司）；DZKW-4电子很稳水浴锅（上海科析实验仪器厂）；超声波清洗器（上海科导超声仪器公司）；中药粉碎机FY-135（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂 马钱子碱对照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批号：MUST-10072602），氯仿、浓盐酸和浓氨水均为分析纯，马钱子买自四川广安康平药城（经大理学院药学与化学学院生药教研室杨月娥老师鉴定）。

2 实验方法和结果

2.1 对照品溶液的配制 精密称取马钱子碱标准品11 mg，用0.1 mol/L的盐酸（下称溶剂）溶解并定容于50 mL容量瓶中，摇匀。精密吸取此溶液5 mL置50 mL容量瓶中，用溶剂稀释并定容，摇匀。得标准品溶液。

2.2 吸收光谱及测定波长的确定 取标准品溶液1 mL于10 mL容量瓶中用溶剂定容，摇匀。用紫外分光光度计绘制马钱子碱的吸收光谱见。马钱子碱的最大吸收峰为262.6 nm。经扫描，马钱子对照品和样品吸收波长一致。

2.3 样品溶液的制备 取4份马钱子各100 g，分别用油炸〔3〕、沙炒〔4〕、甘草炙〔5〕、醋炙〔5〕对马钱子进行炮制，并将其粉碎过20目筛，准确称取过筛后的粉末0.5 g于100 mL具塞三角烧瓶中加20 mL氯仿，用氨水调pH至10，浸泡24 h。过滤，用5 mL氯仿洗涤滤渣，共洗3次，合并滤液。于50℃的水浴挥干氯仿，再加溶液并定容至100 mL容量瓶中，取此溶液2 mL于10 mL容量瓶用溶液定容。

2.4 标准曲线的绘制 分别取马钱子碱的对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL， 加溶剂定容至10 mL容量瓶中，在波长262.6 nm处分别测定其吸收值（ 见表1），计算ΔA值。 以吸光度（A）为纵坐标，对照品浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，结果表明，马钱子碱的浓度在2.2～13.2 mg/mL测定波长范围与ΔA值线性关系良好。回归方程为ΔA=927.29C+0.0851（ r=0.9995），见图1。

表1 样品测定（n=3）

图1 马钱子碱标准曲线

2.5 稳定性试验 取2.3项下的溶液，以溶剂为空白，每隔20 min测定1次吸光度，结果表明在60 min内样品溶液稳定。油炸马钱子RSD=0.3%（n=4），沙炒马钱子RSD=0.26%（n=4），甘草炙马钱子RSD=0.52%（ n=4），醋炙马钱子RSD=0.26%（ n=4），生马钱子RSD=0.12%（ n=4）。

2.6 精密度试验 同一样品液在262.6 nm波长处连续测定6次，在262.6 nm处测其吸光度，测得吸光度的RSD=0.058%（ n=6）。

2.7 重复性试验 精密称取油炸马钱子样品6份，各约0.5 g，按供试品溶液方法制备，再按2.2项下方法于262.6 nm处测定各样品的吸光度，其RSD=0.92%，表明该方法的重现性好，结果可靠。

2.8 加样回收率的测定 精密称取过筛后的油炸马钱子干燥粉末0.25 g三份，分别加入0.24 mg马钱子碱标准品，按照2.3项下的方法制备样品液，精密吸取各样品液2 mL于10 mL容量瓶中定容，摇匀，得样品液，测定并计算回收率，见表2。

表2 马钱子碱回收率测定（n=3）

2.9 样品含量的测定 分别取样品溶液4份和马钱子生品1份，按标准曲线的方法测定。并计算含量，见表3。

表3 样品含量测定（n=3）

3 讨论

本实验对马钱子不同炮制方法炮制前后有效成分（马钱子碱）的含量分别进行测定，采用的炮制方法是传统的油炸、沙炒、甘草炙、醋炙。在马钱子进行减毒增效、缓和其药性等方面来筛选出马钱子的最佳炮制方法。从结果中可知，不同方法炮制后的马钱子中的马钱子碱含量有着显著的变化，其变化由大到小的排列顺序是甘草炙马钱子、油炸马钱子、醋炙马钱子和沙炒马钱子。因此，在几种炮制方法中，采用甘草炙法对马钱子进行炮制，效果较好。

此外，若砂炒温度过高（达270℃），时间过长（达4 min），有效成份士的宁含量将大幅下降，严重影响临床疗效，故传统炮制时应严格控制〔6〕。用油炸法和砂炒法炮制马钱子时温度要达到240～250℃〔7〕。马钱子碱在波长262.6 nm处的吸收峰最大，根据紫外可见分光光度计的原理来测定马钱子中马钱子碱含量的方法是简便、快速、易行的，适合马钱子中马钱子碱的含量测定，以控制马钱子炮制品的质量。

〔1〕徐金华，陈军，蔡宝昌.马钱子碱的研究进展〔J〕.中国新药杂志，2009，18（ 3）:213-214.

〔2〕黄喜茹，孙泽东，曹冬，等.马钱子的质量控制方法研究〔J〕.光谱学与光谱分析，2006，2（ 2）:324-326.

〔3〕崔洪玲，李清.马钱子的炮制方法探析〔J〕.实用中医内科杂志，2008，22（ 8）:63.

〔4〕汤淮波，吴萍，胡海，等.改良砂烫法炮制马钱子的实验研究〔J〕.中南药学，2010，8（ 6）:462-463.

〔5〕李烨，梁华.浅析马钱子炮制方法〔J〕.中国民族医药杂志，2010（ 4）:31-32.

〔6〕占永良.炮制对马钱子生物碱含量及毒性的影响分析〔J〕.浙江中医杂志，2010，44（ 10）:760-760.

〔7〕龚千峰.中药炮制学〔M〕.北京:中国中医药出版社，2003.