HPLC法测定左归丸中马钱苷的含量

孟建升 王伟丽 杨文文 朱明伟

（1 河南省商丘市食品药品检验所，商丘476000；2 天津天狮集团有限公司，天津301700）

HPLC法测定左归丸中马钱苷的含量

孟建升1王伟丽1杨文文2朱明伟1

（1 河南省商丘市食品药品检验所，商丘476000；2 天津天狮集团有限公司，天津301700）

目的 建立HPLC法测定左归丸中马钱苷含量的方法。方法 采用Eclipse XDB-C18色谱柱，以乙腈-水（15:85）为流动相；流速1.0ml•min-1；检测波长240nm。结果 马钱苷在0.3701～1.2336μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为99.86%，RSD=1.20%（n=6）。结论 本方法快速简便，准确可靠，可用于左归丸的质量控制。

马钱苷；高效液相色谱法；含量测定；左归丸

左归丸是由山茱萸、熟地黄、菟丝子、牛膝等药材加工制成的制剂，具有滋肾补阴之功效。用于真阴不足，腰酸膝软，盗汗遗精，神疲口燥。本实验采用高效液相色谱法测定马钱苷，以马钱苷为指标性成分[1]，控制本制剂的内在质量，方法易于操作，结果准确，重现性良好，可用于该制剂质量的控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪，AUW 220D电子分析天平

1.2 试药 马钱苷对照品（批号：111640-200604，中国药品生物制品检定所提供）；乙腈为色谱纯（科密欧公司），水为娃哈哈纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Eclipse XDB-C18色谱柱（50mm× 4.6mm，5um）；检测波长240nm，柱温：25℃，流动相：乙腈:水（15:85）；体积流量：1.0ml·min-1；自动进样10μl。

2.2 对照品溶液的制备 称取马钱苷对照品适量，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加80%甲醇制成0.20mg/ml溶液，作为对照品储备液；精密量取2ml，置于10ml棕色量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 左归丸供试品及阴性样品溶液的制备 取本品，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；按处方配比，取除山茱萸的各位药材，按处方工艺制成样品，同法制成阴性样品溶液。

2.4 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性样品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果表明阴性样品溶液对测定无干扰，结果见图1。

图1 HPLC色谱图

2.5 标准曲线的制备 精密量取马钱苷对照品溶液（40ug/ml)，按照“2.1”项色谱条件，分别进样6、8、10、12、15、20μl，记录马钱苷峰面积值，以马钱苷对照品进样量（X）对峰面积积分值（Y）进行线性回归，得回归方程：Y=1325.37X-158.04 r=0.9999。结果得出马钱苷对照品的线性范围为0.3701～1.2336μg。

2.6 精密度试验 精密量取马钱苷对照品溶液（40ug/ml)10μl，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，记录峰面积，计算得RSD为0.92%（n=5）。

2.7 稳定性试验 取同一样品，制备供试品溶液，分别在0、1、2、3、4、5、6、8h进样，测定马钱苷峰面积，结果RSD为0.86%，表明供试品溶液在8h内测定稳定。

2.8 重复性试验 分别精密称取同一样品6份，研细，制备供试品溶液，进样分析，测定每份样品中马钱苷的含量，结果马钱苷平均含量为0.9896mg/g，RSD为0.91%（n=6）。

2.9 加样回收率试验 分别称取已知含量为0.9893mg/g的样品约0.6g，6份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入对照品储备液2ml，按“2.3”项下供试品制备方法制备，按照“2.1”项下色谱条件，分别测定，结果见表1。

2.10 样品测定 取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，各进样10μl，按外标法计算马钱苷的含量，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果

表2 样品中马钱苷的含量

3 讨论

山茱萸味酸，性微温，有补益肝肾、收敛固脱的功能。具有明显的免疫调节、强心、抗休克、抗心律失常、降血糖、抗氧化和抗衰老作用。其成分主要为环烯醚萜和鞣质[2]，马钱苷为其中环烯醚萜类成分之一，本文以高效液相色谱法测定马钱苷的含量，结果准确，重现性好，可用于控制左归丸的质量。

通过紫外扫描发现，马钱苷在240nm处有最大吸收，故选择240nm为测定波长。参考有关文献[3-4]，比较了不同的流动相，发现采用乙腈:水（15:85）为流动相时，样品中马钱苷峰分离度较好。

本方法操作简便，具有较强的专属性，回收率好，能够更有效地控制该制剂的质量。

[1] 刘洪,许惠琴.山茱萸及其主要成分的药理学研究进展[J].南京中医药大学学报,2003,19(7):254.

[2] 杨学东,丁小军.山茱萸属植物化学成分和药理活性研究进展[J].时珍国药国药,2007,20(9):2284-2286.

[3] 席美凤.HPLC法测定知柏地黄颗粒中马钱苷[J].中草药,2006,37(7): 1036-1037.

[4] 李文兰,赵稷,王晓冬,等.HPLC法测定金匮肾气丸中马钱苷、芍药苷的含量[J].哈尔滨商业大学学报,2008,24(1):13-15.

HPLC Determination of Loganin in Zuogui Pill

Meng Jiansheng1Wang Weili1Yang Wenwen2Zhu Mingwei1
(1 Shangqiu Insititute for Food and Drug Control, Shangqiu 476000, China; 2 Tianjin Tiens Group Co. Ltd, Tianjin 301700, China)

Objective To establish a HPLC method for the determination of Loganin in Zuogui Pill. Methods The chromatographic system consisted of Eclipse XDB-C18 column,using Acetonitrile-water (15:85) as mobile phase.The flow rate was 1.0ml•min-1, and the detecting waveleng was 240nm. Results The Loganin have a good tincar rolatim in the range of0.3701～1.2336μg（r=0.9999）, the average recovery was 99.86% and RSD=1.20%（n=6）. Conclusions The method is simple, accuracy, and suitable for the determination of constituent in Zuogui Pill.

Loganin; HPLC; Determination; Zuogui Pill

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.18.107

1672-2779（2012）-18-0152-02

2012-08-01）