HPLC法测定蒙药额日敦-7汤中栀子苷的含量

朝鲁门 吴香杰

(内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000)

额日敦-7汤由诃子、栀子、川楝子、土木香、悬钩子木、山奈、苦参等7味药组成的传统蒙药制剂，具有清瘟解热、解表、止痛之功效;用于瘟病初期感冒发烧、咳嗽、全身酸痛、头痛、咽喉肿痛等病症［1］。为了确保疗效，本实验采用高效液相色谱法测定其栀子中栀子苷的含量。本方法先进、简便.，结果准确可靠，为控制该剂制的质量提供依据。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器:AUW220D型电子分析天平 (d=0.1mg/0.01mg)，日本岛津;LC-10AT高效液相色谱仪，日本岛津;SPD—10AVP检测器，日本岛津;N3000色谱工作站，日本岛津;DiamonsilC18 色谱柱(250 ×4.6mm，5μm)，迪马公司;KQ-100型超声波清洗器，昆山市超声波仪器有限公司。

1.2 药品与试剂:额日敦-7汤由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供(批号20110221、20100617、20110916)。栀子苷对照品(批号:110749-200511，纯度＞98%)由中国药品生物制品检定所提供。甲醇为色谱纯;水为高纯水;所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［2］:DiamonsilC18 色谱柱(250 × 4.6mm，5μm，迪马公司)色谱柱;以甲醇:水:0.5%磷酸水(65:35:0.05)为流动相;流速为1.0ml·min-1;检测波长为203nm;柱温为25℃;进样量以μl。

2.2 对照品溶液的制备:取栀子苷对照品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加入甲醇使溶解至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取上液3mL置100容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(即每1ml中含栀子苷30μg)。

2.3 供试品溶液的制备:取额日敦-7汤约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20分钟后放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密称定续滤液作为供试品溶液。

另取缺栀子阴性对照品约0.5g，精密称定，照上述方法操作，即得缺栀子阴性对照品溶液。

2.4 干扰试验:精密吸取对照品溶液、供试品溶液、缺栀子阴性对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，按选定色谱条件，记录各色谱图。供试品溶液色谱图中与对照品相应的位置上，呈现栀子苷吸收峰，而缺栀子阴性对照品溶液色谱图中无干扰色谱峰。

2.5 线性关系及其工作范围的考察:精密吸取对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0，17.5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面值(A)。并以栀子苷峰面值(Y)对其相应的的进样量(X)进行线性回归，得回归方程为:y=17508x-728，r=0.9995。结果表明，栀子苷对照品进样量在0.075～0.525μg范围内，与峰面积具有良好的线性关系。

2.6 精密度试验:精密吸取供试品溶液各10μl，在上述色谱条件下，分别重复进样6次，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果栀子苷的RSD值为1.76%。结果表明，精密度良好。

2.7 稳定性试验:精密吸取同一份供试品溶液10μl，分别于 0、2、4、6、8、10、12 小时注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值。结果栀子苷的RSD值为1.64%。表明供试品溶液在12小时内测定稳定性良好。

表1 回收率试验结果

表2 样品含量测定结果

2.8 重复性试验:称取样品约0.6g，共3份，精密称定，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液6份，按含量测定方法，分别精密吸取10.0μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积。结果栀子苷的RSD分值为0.99%。表明该含量测定方法具有良好的重复性。

2.9 回收率试验:取已知含量的样品约0.3055g，计6份，精密称定，分别加入一定量的栀子苷对照品贮备液，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液后进样测定峰面积，并计算回收率。结果栀子苷的平均回收率为98.54%，RSD为1.77%(见表2)。

2.10 样品测定:取样品约 0.6g，(n=6)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20ml甲醇，称定重量，超声20分钟后放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密称定续滤液作为供试品溶液。

3 讨论

本试验用甲醇提取蒙药额日敦－7汤，能使样品中的栀子苷得到良好的分离。本测定方法简单、结果准确可靠、重复性好，可用于本品中栀子苷的含量测定，能够有效的控制药品质量。

［1］内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准［S］.内蒙古科技技术出版社，1984，101.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京:人民卫生出版社，2010，231.