抗解脲胶囊对解脲支原体感染大鼠血清IL-8表达水平的影响

许庆瑞 吴秉纯 王伟明

（黑龙江省中医研究院·哈尔滨 150036）

解脲支原体 (Ureaplasma urealyticum，Uu) 是引起非淋菌性尿道炎 (宫颈炎) (NGU) 最常见的病原体，本病主要通过性行为传染，侵犯泌尿生殖器官，临床有非典型性，顽固复发性和迁延不愈等特点。抗生素对其病原体有一定的杀灭及抑制作用，但近年来由于解脲支原体的耐药不断增加，耐药率逐年上升，抗生素的疗效显著下降。抗解脲胶囊是用于治疗解脲支原体(Uu)感染的非淋菌性尿道炎(NGU)的纯中药制剂，本文旨在探讨其在治疗解脲支原体(Uu)感染的非淋菌性尿道炎(NGU)的作用机理。

1 实验材料

1.1 支原体标准菌株

Uu 标准菌株：血清4 型，由北京首都儿科研究所惠赠。

1.2 受试药物

抗解脲胶囊 由黑龙江省中医研究院中药所制剂室提供。批号：20050212。规格：0.3g/粒（每粒相当于原药材5g 生药）。用法用量：口服，一次4 粒，一日3 次。

琥乙红霉素 哈药集团制药总厂制剂厂生产，国药准字H23020648。批号：20050501 。

1.3 主要试剂

Uu 培养基（其液体培养基主要成分为牛脑心浸液基础培养基、无菌胎牛血清、新鲜酵母浸液、尿素、青霉素和酚红等）。

[16] 徐惠喜：《吹响亚太自贸区建设的号角》，《经济日报》2014年4月25日，http://paper.ce.cn/jjrb/html/2014-04/25/content_277847.htm。

白细胞介素-8（IL-8）放免试剂盒 由北京福瑞生物工程公司生产。

1.4 受试动物

Wistar 大白鼠，体重200±20g，雌雄各半，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供（合格证号为：黑动字第P00102005）。

1.5 器 材

纯水仪：Millipore Milli-QII；PCR 反应仪：GeneAmp PE2400；pH 计：METER

1.6 药液的配制

抗解脲胶囊：实验时将一定量抗解脲胶囊的提取物放入乳钵中，加蒸馏水混匀，配制成以水为溶剂浓度分别为7.2%（0.36g 生药/ml）、14.4%（0.72g生药/ml）、28.8%（1.44g 生药/ml）的混悬液，备用。琥乙红霉素：配制成以水为溶剂浓度为1.44%的混悬液，备用。

2 实验方法

在SPF 实验室经一周常规饲养观察后，取体重为200±20g 的健康Wistar 大鼠70 只，雌雄各半，用2%戊巴比妥钠按2ml/kg 剂量腹腔注射麻醉动物，脱毛、消毒后，在无菌条件下打开腹腔，充分暴露膀胱，先用注射器抽尽膀胱内尿液，然后再向膀胱内注射0.5ml 解脲支原体悬液（106ccu/ml），将膀胱放回原位，缝合腹腔。上述操作均在无菌条件下严格操作。14d 后，取5 只造模大鼠通过尿道组织HE 染色、PCR 检测解脲支原体MB 抗原来确定造模状况。

2.2 动物分组及给药

造模成功后，将解脲支原体感染的模型大鼠50 只，随机分成5 组，每组10 只，即模型对照组、抗解脲胶囊高、中、低剂量组、琥乙红霉素西药对照组；另取10 只健康大鼠作为空白对照组。抗解脲胶囊高、中、低剂量组剂量分别为21.6g 生药/kg、10.8g 生药/kg 和5.4g 生药/kg；同法给予琥乙红霉素西药对照组剂量0.216g/kg（相当于临床用量）。以上给药组通过口服给药，每日一次，给药容积1.5ml/100g，空白对照组和模型组给予同体积生理盐水，给药时间均连续两周，每日观察其活动、进食等情况；末次给药后1h，各组大鼠摘眼球取血，处死动物，进行相关指标的检测。

2.3 检测指标

2.3.1 一般情况的检查 每日观察大鼠活动、饮水、进食，尿液颜色及尿道分泌物等情况。

2.3.2 尿道组织的病理学检查 将大鼠处死后，取尿道组织，用10%福尔马林固定，常规脱水，浸蜡，切片，HE 染色，光镜下进行病理组织学检查。

2.3.3 免疫功能测定 血清中IL-8 测定 采用放射免疫的方法，用DFM-96 型多管放射免疫计数器（合肥众成机电技术公司生产）检测，由黑龙江省医院放射免疫中心完成，具体方法参见试剂盒使用说明书。

3 结 果

3.1 解脲支原体感染动物模型的建立与确证

大鼠在感染解脲支原体后多数动物精神抑郁，活动减少，被毛粗糙，部分大鼠尿道可见分泌物。病理学结果发现，尿道组织上皮细胞有脱落，增生明显，大量炎症细胞浸润，有分叶核。感染后第14d 进行尿道组织PCR 检测，结果表明，感染14d 时尿道组织PCR 检测均为阳性，扩增出一条约429bp 的清晰片段，证实本次试验所建立的解脲支原体感染动物模型可靠。

3.2 一般情况观察

感染解脲支原体后，多数大鼠精神抑郁，活动减少，被毛粗糙，部分大鼠尿道可见少量淡黄色分泌物。经4～7 天后各给药组症状有所减轻，9～12 天有些大鼠症状基本消失。

3.3 尿道组织病理变化

空白组，基本无病理变化；模型组，主要表现在炎细胞浸润，有局灶性增生，管腔变薄，上皮细胞有脱落；各给药组炎细胞浸润减少。中药阳性组，少数尿道上皮有局灶性增生，有一例上皮细胞有脱落；西药阳性组，有少数尿道上皮细胞变薄、增生；抗解脲胶囊各剂量组尿道上皮细胞炎性浸润、增生的程度随剂量的增加逐步减轻。

3.4 IL-8 细胞因子水平的测定

与正常对照组比较，模型组、泌淋清组大鼠血清中IL-8 极显著升高（P＜0.01），抗解脲胶囊低剂量组显著升高（P＜0.05），抗解脲胶囊高剂量组、琥乙红霉素对照组、抗解脲胶囊中剂量组升高，但差异不显著；与模型组比较，给药各剂量组都极显著降低（P＜0.01）。实验结果见表1。

表1 抗支胶囊对解脲支原体感染大鼠血清IL-8 的影响（ -±S n=10）

表1 抗支胶囊对解脲支原体感染大鼠血清IL-8 的影响（ -±S n=10）

注：与正常对照组比较，*P＜0.05， **P＜0.01；与模型组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。

组 别 剂量（g/kg） IL-8（ng/ml）正常对照组 等容积 0.602±0.177模型对照组 等容积 1.601±0.435**琥乙阳性组 0.216 0.818±0.281ΔΔ抗解脲高剂量组 21.6 0.693±0.204ΔΔ抗解脲中剂量组 10.8 0.744±0.196ΔΔ抗解脲低剂量组 5.4 0.896±0.227ΔΔ*

4 讨 论

IL-8 是一种多功能因子,其生物学功能无种属特异性。早期发现中性粒细胞是其作用的靶细胞,其特异性趋化中性粒细胞进入炎性组织,促使其脱颗粒、产生超氧阴离子、引起呼吸暴发等,在炎性反应中起重要作用[2]。它能促进炎性反应进程、刺激血管的形成、促有丝分裂、调节宿主免疫功能等,与多种炎性反应性疾病、肿瘤、免疫性疾病的发生和发展密切相关。

感染或炎性反应性疾病能导致一系列细胞因子的激活,促炎因子和抗炎因子均有不同程度的升高。IL-8 是炎性介质网络中的关键成分,其强有力的促炎作用在炎性反应中必不可少,但当IL-8 过度分泌或对粒细胞的不适当激活也能导致正常组织、细胞的损害,甚至导致多器官衰竭[3]。

本次试验结果显示，Uu 感染的模型组大鼠IL-8水平明显升高，与空白对照组比较，有极显著差异(P＜0.01)。提示IL-8 水平的升高和Uu 感染有关。与模型组比较，抗解脲胶囊组血IL-8 显著性降低，治疗后下降至接近正常水平。提示抗解脲胶囊在一定程度上，具有抑制Uu 感染尿道粘膜组织后机体过度释放IL-8 的作用，调节机体细胞免疫功能，减少的炎症反应，降低其对机体的伤害。

[1] 杨建宏,张俊威,吴秉纯.解脲栓对解脲支原体感染大鼠免疫功能影响的研究[J].中药药理与临床，2008；24(1)：57-59

[2] 张艳芳,杨廷桐.白细胞介素-1,8,10 与心肌缺血-再灌注损伤[J].新乡医学院学报,2006,23(2)：210-212

[3] 姚瑶,王琳琳.白细胞介素-8 研究进展[J].实用儿科临床杂志，2009,24(10)：789-792