维生素E对胃黏膜损伤模型小鼠的保护作用研究

王彩冰，晋 玲，黄俊杰，黄彦峰，黄永毅（右江民族医学院应用生理学研究室，广西百色 533000）

维生素E（VitaminE，VE）又称生育酚，是一种很强的脂溶性抗氧化剂，其可通过清除氧自由基、抑制脂质过氧化来保护细胞免受自由基诱导发生氧化损伤，维持细胞膜的正常结构[1]。近年来研究[2～4]发现，VE对心、肝、肾等器官都有保护作用，但对胃黏膜损伤是否具有保护作用尚未见有文献报道。本研究通过吲哚美辛诱发小鼠胃黏膜损伤模型，探讨VE对其胃黏膜损伤的保护作用，为VE的进一步开发利用提供实验资料。

1 仪器与材料

1.1 仪器

722型分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；Canon PowershotA2000 IS数码照相机（佳能（中国）有限公司）。

1.2 试药

VE注射液（上海第九制药厂，批号：20070801，规格：5 mg·mL－1）；吲哚美辛片（商品名：消炎痛，山西省大同云岗制药厂，批号：20070513，规格：每片25 mg）；西咪替丁注射液（山东东明制药厂，批号：20070402，规格：0.2 g·2 mL－1）；碳酸氢钠（批号：20070121，分析纯）、甲醛（批号：20070604）均购自成都市科龙化工试剂厂；超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒、丙二醛（MDA）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20080422、20080119）。

1.3 动物

昆明种小鼠，♀♂兼用，体重20～25 g，由右江民族医学院实验动物中心提供，动物生产合格证号：SCXK（桂）2007-0003。

2 方法

2.1 分组与给药

取小鼠随机分为正常对照组（生理盐水10 mL·kg－1）、模型组（生理盐水10 mL·kg－1）、西咪替丁（25 mg·kg－1）组和VE低、高剂量（25、50 mg·kg－1）组，每组10只，后3组为药物组，全部小鼠禁食24 h后，自由饮水至实验前2 h，灌胃给予相应药物。

2.2 建模

将吲哚美辛片溶于5%碳酸氢钠溶液中，用蒸馏水稀释成浓度2.5 mg·mL－1的混悬液。各组小鼠按“2.1”项下给药30 min后，除正常对照组再灌胃给予生理盐水10 mL·kg－1外，其余各组小鼠均灌胃给予吲哚美辛25 mg·kg－1[5]，建立胃黏膜损伤模型。

2.3 胃黏膜损伤程度检测

建模4 h后，采用颈椎脱臼法处死所有小鼠，剖腹，结扎贲门及幽门，取出胃，向胃腔注入4 g·L－1甲醛溶液2 mL并将胃浸泡于该甲醛溶液中10 min以固定。将胃沿大弯剪开，把胃黏膜洗净后展平于平板上，检测胃黏膜损伤程度并用照相机微距拍片。损伤程度用损伤指数即参照Kitagawa等[6]方法表示，按黏膜损伤的面积评分并计算损伤指数：≤1.0 mm2为1分，＞1.0 mm2且≤2.0 mm2为2分，依此类推；测量、评分、记录均由同一人进行。全胃评分的总和为该小鼠的胃黏膜损伤指数，并按下式计算除正常对照组外各组胃黏膜损伤抑制率。损伤抑制率＝（模型组损伤指数－各药物组损伤指数）/模型组损伤指数×100%。

2.4 血清中SOD活性、MDA含量检测

在各组小鼠处死前采用摘除眼球法取血，分离血清，用SOD检测试剂盒和MDA检测试剂盒检测各组小鼠血清中SOD活性和MDA含量，按说明书要求进行操作。

2.5 统计学处理

数据用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，两组间均数比较用t检验，统计结果以±s表示。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 小鼠胃黏膜损伤外观结果

正常对照组小鼠胃黏膜光滑，皱襞完整规律，附有较多的黏液，未见糜烂、溃疡、出血点。模型组小鼠胃黏膜光滑、皱襞范围减少，胃黏膜伴有糜烂、溃疡、出血等损伤，呈点状、条索状、片状或出血坏死斑，损伤部位多见于胃体和胃窦部。西咪替丁组和VE低剂量组小鼠胃黏膜糜烂、溃疡的程度比模型组明显降低，胃黏膜损伤表现以点状的糜烂为主，可见少许出血点。与西咪替丁组和VE低剂量组比较，VE高剂量组小鼠胃黏膜糜烂、溃疡的程度明显降低，胃黏膜损伤表现以点状的糜烂为主，未见出血现象。各组小鼠胃黏膜损伤外观图见图1。

图1 各组小鼠胃黏膜损伤外观图A.正常对照组；B.模型组；C.西咪替丁组；D.VE低剂量组；E.VE高剂量组Fig 1 Appearance of gastric mucosal injury of mice in each groupA.normal control group；B.model group；C.cimetidine group；D.VE low-dose group；E.VE high-dose group

3.2 小鼠胃黏膜损伤指数检测结果

与正常对照组比较，其余4组小鼠胃黏膜损伤指数均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，西咪替丁组和VE低、高剂量组小鼠胃黏膜损伤指数均明显降低（P＜0.01）；与西咪替丁组和VE低剂量组比较，VE高剂量组小鼠胃黏膜损伤指数明显降低（P＜0.01）。各组小鼠胃黏膜损伤指数比较见表1。

表1 各组小鼠胃黏膜损伤指数比较（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of gastric mucosal injury index of mice in each group（±s，n＝10）

表1 各组小鼠胃黏膜损伤指数比较（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of gastric mucosal injury index of mice in each group（±s，n＝10）

与正常对照组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.01；与西咪替丁组比较：ΔP＜0.01；与VE低剂量组比较：★P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01；vs.cimetidine group：ΔP＜0.01；vs.VE low-dose group：★P＜0.01

组别正常对照组模型组西咪替丁组VE低剂量组VE高剂量组损伤抑制率/%胃黏膜损伤指数0 70.10±9.08＊18.10±3.38＊#16.60±2.63＊#10.70±2.67＊#Δ★－0 74.18 76.32 84.74

3.3 小鼠血清中SOD活性、MDA含量检测结果

与正常对照组比较，模型组小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，西咪替丁组和VE低、高剂量组小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明显降低（P＜0.01）；与西咪替丁组比较，VE高剂量组小鼠血清中SOD活性明显降低（P＜0.01）。各组小鼠血清中SOD活性、MDA含量比较见表2。

表2 各组小鼠血清中SOD活性、MDA含量比较（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of SOD activity and MDA content in serum of mice in each group（±s，n＝10）

表2 各组小鼠血清中SOD活性、MDA含量比较（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of SOD activity and MDA content in serum of mice in each group（±s，n＝10）

与正常对照组比较：＊P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.01；与西咪替丁组比较：ΔP＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01；vs.cimetidine group：ΔP＜0.01

MDA含量/nmol·mL－1 3.25±0.38 3.95±0.47＊3.25±0.31#3.29±0.41#3.27±0.24#组别正常对照组模型组西咪替丁组VE低剂量组VE高剂量组SOD活性/nU·mL－1 223.74±28.44 295.64±31.26＊257.53±29.66＊#234.87±25.32#224.26±24.19#Δ

4 讨论

为了使胃黏膜损伤模型效果更明显，本实验的吲哚美辛用量为25 mg·kg－1，比人临床正常用量经换算后的值稍大（临床用量换算为20 mg·kg－1）；西咪替丁用量按临床正常用量换算；VE用量由于目前没有其使用在胃黏膜损伤时的明确用量，所以笔者选用其临床用量范围内的最高值为高剂量，中间值为低剂量[7]。

SOD是有氧代谢细胞生存所必需的一种酶，其能有效地清除代谢过程中产生的超氧阴离子自由基（O2－）。O2－是一种活泼的氧化剂，其能使细胞膜发生脂质过氧化反应生成脂质过氧化物（LPO），造成组织细胞损伤。在正常情况下，体内自由基生成与清除能力处于动态平衡状态，一旦自由基生成过多或清除能力下降，都会打破这一平衡，致使组织细胞损伤。一般在疾病急性期，SOD被紧急动员而活性往往高于正常水平。通过SOD活性的测定能反映氧自由基含量，LPO的中间代谢产物MDA含量的测定能反映脂质过氧化物浓度[8，9]。

本实验结果显示，模型组小鼠胃黏膜损伤指数和血清中SOD活性、MDA含量均明显高于正常对照组，表明吲哚美辛诱发胃黏膜损伤后，机体内氧自由基和LPO生成增多，而机体在急性胃黏膜损伤期紧急动员体内的SOD来清除氧自由基，这与邹雄[9]报道结果一致，但仍诱发了胃黏膜损伤，说明LPO生成过多，体内氧自由基生成大于清除能力，引起强烈的胃黏膜脂质过氧化反应，造成明显的胃黏膜损伤。这些都提示氧自由基参与了吲哚美辛诱发的胃黏膜损伤过程。此外，吲哚美辛还能通过抑制前列腺素合成酶使前列腺素生成减少，从而引起胃黏膜屏障低下，使胃黏膜易受损伤因子攻击，导致胃黏膜损伤[1，5]。

本实验结果显示，VE低、高剂量组小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明显低于模型组，而与正常对照组比较无显著性差异，说明VE参与抗氧化、清除氧自由基和抑制脂质过氧化过程，提高胃黏膜的抗氧化和防御保护功能，从而维持胃黏膜的稳定性，起到保护胃黏膜的作用。随着VE用量的增大，吲哚美辛诱发的胃黏膜损伤指数明显降低，提示VE预防吲哚美辛诱发胃黏膜损伤的保护作用可能存在一定量效正相关关系；但VE能否通过促进前列腺素合成参与对胃黏膜损伤保护，有待进一步研究。

本实验结果表明，西咪替丁抑制胃黏膜损伤可能与清除氧自由基相关。西咪替丁是临床上常用治疗消化道溃疡病的药物，其通过抑制胃泌素及胃蛋白酶等的分泌，从而减少胃酸生成，减轻氢离子逆向弥散及胃蛋白酶对胃黏膜的破坏[1]。本实验结果表明，VE低剂量（25 mg·kg－1）组对胃黏膜损伤的保护作用与西咪替丁（25 mg·kg－1）组比较无显著性差异，而VE高剂量（50 mg·kg－1）组对胃黏膜损伤的保护作用强于西咪替丁（25 mg·kg－1）组，从而为VE预防胃黏膜损伤的临床开发应用提供实验依据。

[1]杨宝峰，苏定冯，周 宏，等.药理学[M].第7版.北京：人民卫生出版社，2008：183、271、323.

[2]郭文萃，许立新，谢 伟.维生素E对大剂量维生素D3所致心肌损伤保护作用的实验性研究[J].内科急危重症杂志，2009，15（3）：146.

[3]徐 明，孙 申，张 洋.维生素C和维生素E单用及联用对慢性酒精性肝损伤模型大鼠的预防性保护作用[J].中国药房，2010，21（45）：4 240.

[4]毛晓明，王爱萍.维生素E对糖尿病患者肾脏的保护作用[J].中华内分泌代谢杂志，2000，16（5）：315.

[5]李国平，邓长生，杜意平，等.TNF-α参与消炎痛诱导大鼠胃粘膜损伤机制的探讨[J].中国病理生理杂志，1999，15（9）：814.

[6]Kitagawa H，Fujiwara M，Qsumi Y.Effects of water-immersion stress on gastric secretion and mucosal blood flow in rats[J].Gastroenterology，1979，77（2）：298.

[7]陈新谦，金有豫，汤 光.新编药物学[M].第16版.北京：人民卫生出版社，2007：193、462、691.

[8]顾凤英，季健平，童正本，等.非何杰金淋巴瘤患者红细胞超氧化物歧化酶、血清脂质过氧化物、维生素E的变化及其临床意义的探讨[J].肿瘤防治研究，1994，21（6）：346.

[9]邹 雄.自由基的实验室检查[J].山东医药，1994，34（2）：42.