高效液相色谱法测定橘红痰咳液中柚皮苷的含量

李 慧

山东省淄博市妇幼保健院药剂科，山东 淄博 255000

橘红痰咳液为本院制剂，由化橘红、蜜炙百部、苦杏仁、茯苓、制半夏、五味子、甘草7味药物组成，具有理气祛痰、润肺止咳之功效，用于感冒、支气管炎、咽喉炎引起的痰多咳嗽、气喘等。其中化橘红为君药，柚皮苷为化橘红的主要有效成分之一，参照相关文献[1-6]，本文通过系统的方法学考察，建立了该制剂中柚皮苷的HPLC含量测定方法，并在此基础上测定了柚皮苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪，包括Lab Alliance型恒流泵、Waters966二极管阵列检测器[活德国际贸易（上海）有限公司]、Millen nium 32 色谱工作站，Phenomenex-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），BP211D 型分析天平 （德国赛多利斯），FOEA26810D 型纯水机（Millipore公司）。

1.2 试药

柚皮苷对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110722-200610），橘红痰咳液样品（自制，批号：100801、100802、100803），缺少化橘红的阴性对照样品（自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯 （国药集团化学试剂有限公司），其余试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamosil-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-醋酸-水（38.0∶0.5∶62.0）；检测波长：283 nm；柱温：40℃；流速：1.0 mL/min；理论塔板数按柚皮苷峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

取110℃减压干燥至恒重的柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含45 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取供试品1 mL，加甲醇稀释并定容至25 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性溶液的制备

按照供试品溶液的制备方法，取缺少化橘红的阴性对照样品，制备成阴性对照溶液。

2.5 干扰试验

按照“2.1”项下的色谱条件，吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有色谱峰出现，而阴性对照液无相应峰出现，表明阴性无干扰。见图1。

2.6 线性关系考察

分别吸取柚皮苷对照品溶液 （44.8 μg/mL）2、4、6、8、10、12、16、20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=12162X-27556，r=0.9999。 表明柚皮苷在89.6～896.0 μg范围内，峰面积值与进样量（μg）之间线性关系良好。

2.7 精密度试验

精密吸取柚皮苷对照品溶液 （44.8 μg/mL）10 μL，按“2.1”项下色谱条件，重复进样6次，测得柚皮苷峰面积积分值分别为 5400267、5413236、5440989、5455261、5454005、5411008，平均 5429128，RSD=0.44%（n=6），表明仪器的精密度良好。

图1 柚皮苷对照品、供试品阴性对照溶液、样品色谱图

2.8 稳定性试验

取同一供试液（批号：100801），分别于制备后 0、1、2、3、4、5、6 h进样，测得样品中柚皮苷峰面积值分别为4886932、4846555、4855303、4830029、4831674、4815527、4801096，平均4838159，RSD=0.58%，表明供试品溶液在制备后6 h内基本稳定。

2.9 重现性试验

对同一批样品 （批号：100801）分别制备6份供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定，计算含量分别为0.991、1.003、0.996、1.007、0.992、0.997 mg/mL， 平均 0.998 mg/mL，RSD=0.63%（n=6），表明方法的重现性良好。

2.10 加样回收率试验

取已知含量的样品6份 （柚皮苷含量0.998 mg/mL），分别精密加入柚皮苷对照品0.896 mg，按“2.3”项下供试品溶液制备方法操作，按公式计算回收率，回收率（%）=[测得量（mg）-制剂中含量（mg）]/加入对照品量（mg）×100%。 回收率试验结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.11 样品含量测定

取三批橘红痰咳液样品，按“2.3”项下供试品溶液制备方法操作，按“2.1”项下色谱条件，依法测定。样品含量测定结果见表2。

表2 橘红痰咳液中柚皮苷的含量测定结果（n=3）

3 讨论

化橘红是本制剂中的主要药材之一，柚皮苷是化橘红的主要活性成分，具有抗炎、镇痛、抗病毒、抗过敏、抑菌及抑制醛糖还原酶等药理作用[7-8]，为本制剂的主要有效成分之一，因此以柚皮苷含量作为制剂质量控制的指标是较为科学合理的。

本试验结果表明，高效液相色谱法测定橘红痰咳液中柚皮苷的含量，操作简便、准确，具有很好的重现性和稳定性，可用于该制剂的质量控制。

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