桔梗五倍子提取液的体外杀精研究

吕雪梅 邱 毅 王苏梅 刘锦云 董云玲 魏 斌

山东省计划生育科学技术研究所·山东省优生技术重点实验室，山东济南 250002

生殖健康是目前比较热门的话题，有效的避孕是生殖健康中的重要一部分。避孕方法分为男用避孕措施和女用避孕措施，男用的避孕措施中采用比较多的只有避孕套工具避孕和输精管结扎，目前采用比较多的是女用避孕措施约占了85%左右。这些方法虽然在控制人口增长方面起到一定的积极作用，但都存在不同程度的不良反应。尤其是不可逆的绝育手术约占目前现有避孕方法中的50%以上，由于存在一定的不良反应和并发症，远远不能满足人们逐渐增长的生殖健康需要，人们越来越期待一种新型的避孕节育方法。所以研究一种既有杀精避孕作用又具有抗性传播疾病病原体的阴道制剂是十分必要的。课题组于2011年5月—2012年2月根据中医药的组方理论，研究桔梗与五倍子组方后体外的杀精作用效力，以期研究一种阴道杀精剂避孕，使之具有使用简便、安全、有效，同时具有抗微生物及某些性传播疾病的作用。

1 资料与方法

1.1 药材制备

中草药桔梗、五倍子粉碎。分别称取上述两种粉碎干药材各1 000 mg，分别加入0.9%生理盐水10 mL置于Thermo Cell恒温金属浴中（100℃）40～60 min，过滤，制成提取液，并按桔梗：五倍子2∶1的比例混合为实验药液，并测定其pH值。

1.2 实验仪器

Thermo Cell恒温金属浴，带恒温装置的倒置显微镜，恒温水浴箱，pH计，血细胞计数板，微量加样枪，取精杯（COOK）。

1.3 精液标本

课题组于2011年5月—2012年2月选择16例年龄23～39岁健康男性志愿者，签署知情同意书，明确告知注意事项，使之禁欲3～7 d，采用手淫法取精液。精液入选标准：精液量2～5 mL，液化时间 30 min，pH 值 7.2～7.6，精子计数≥60×106/mL，精子活动率>70%，其中a+b级>50%，精子畸形率<25%。其中有6例志愿者精液未达到入选标准，将之排除。

1.4 实验方法

实验方法按照世界卫生组织(WHO)推荐的Sander-Cramer方法和标准[1]。将精液0.5 mL分别加入到0.5 mL桔梗五倍子提取液中，立即混匀。使用微量加样枪迅速移取约10微升混合液于载玻片上，立刻置于倒置显微镜，于37℃恒温下观察精子的制动情况，连续观察10个高倍视野，以精子全部失去活动能力为观察终点。时间的记录标准：记录从精子接触药物时起至全部失活的时间为杀精子时间。每个标本，每次实验反复进行2次。体外杀精子效果分级标准:瞬间杀精子效力为从精子接触药物起至30 s内全部失活，较强的杀精子效力为 0.5～3 min，微弱的杀精子效力为3～5 min，＞5 min为无杀精效力。同时与NS阴性对照和NP-9阳性对照组(浓度约为0.75 mg/mL，与临床中使用体内浓度大致相当)进行比较。

1.5 统计方法

采用SSPS 13.0统计软件分析数据，组间比较采用t检验。

2 结果

2.1 桔梗五倍子药液的pH值

桔梗五倍子药液的pH值为6.2，为实验药液1，与精液1:1混合后的pH值为6.9，调整桔梗五倍子药液的pH值至7.4为实验药液2，重复进行杀精实验。

2.2 桔梗五倍子药液对精子的体外杀灭效力结果

桔梗五倍子药液杀精时间与NP-9杀精时间比较，差异无统计学意义（P>0.05），并且桔梗五倍子药液杀精时间＜30 s，说明桔梗五倍子药液具有瞬间杀精效果。调整pH值前后桔梗五倍子药液杀精效果比较，差异无统计学意义（P>0.05），调整pH值后桔梗五倍子药液杀精时间也＜30 s，说明调整PH值前后桔梗五倍子药液杀精效果无显著差异。调整pH值后桔梗五倍子药液杀精时间与NP-9比较，差异有统计学意义（P<0.05），但实验数据表明杀精时间亦＜30 s，说明调整pH值后桔梗五倍子药液仍具有杀精效果，生理盐水组无杀精作用。见表1。

3 讨论

桔梗五倍子提取液对人精有体外杀精的作用，虽然调整pH值后桔梗五倍子药液杀精时间与NP-9比较，差异有统计学意义，但实验数据表明杀精时间亦＜30 s，表明调整pH值后桔梗五倍子药液仍具有瞬间杀精效果，这可能与实验标本偏少有一定的关系，在以后的研究中应加大标本量，做进一步研究。阴道杀精子剂避孕具有广泛的发展和使用前景，由于其使用简便、安全、有效，同时也具有抗微生物及某些性传播疾病的作用，其市场潜力也期待被开发。世界卫生组织和联合国艾滋病规划署等国际组织已将由妇女主动使用的杀微生物避孕制剂作为全球优先发展项目。20世纪90年代国内开始了早期的体外杀精的使用和相关研究，早期主要是使用进口药，如壬苯醇醚（NP-9）、孟苯醇醚、辛苯醇醚、十二醇单月桂酸酯等，后来国内又有较多品种上市，由于药物的主要成分是西药，在临床使用中发现，这些药物往往会对阴道粘膜具有刺激性，并经过人体吸收后，容易对肝脏产生一定的损害。所以长期以来，这些体外杀精子药物均未成为避孕的首选措施。由于其使用的不良反应和并发症，使得这些体外杀精药物在临床上也未能广泛的应用。加之目前性传播疾病发病率不断上升，有关性传播疾病发病率预防措施的研究越来越引起各国学者的关注[2]。但是，近年来对壬苯醇醚的对照研究已经表明，此药不仅不能预防主要性传染疾病和艾滋病毒感染，且长期使用反而还会提高经由性交所致传染疾病的风险[3-4]，所以临床需要一种既能体外杀精又能有抗微生物及某些性传播疾病的作用的阴道制剂。

该研究采用传统的中药桔梗和五倍子。桔梗味苦、辛，性微温，入肺经，功效祛痰止咳，有宣肺排脓功效。其嫩茎叶和根均可供食用。盛产于中国东北部地区，是朝鲜族的特色菜。五倍子味酸、涩，性寒，归肺、大肠、肾经，功效敛肺止汗、涩肠固精、解毒止血。同时体外试验也表明：五倍子煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、炭疽杆菌、大肠杆菌、白喉杆菌、伤寒和副伤寒杆菌等均有明显的抑菌和杀菌作用。经用乙醚提出其鞣酸后的五倍子液仍有抑菌作用无明显的毒副作用。目前桔梗和五倍子的体外杀精效果都有相关的报道[5-6]，但桔梗无明显的抑菌和杀菌作用，五倍子具有一定的杀精及抑菌作用，单独作为体外杀精制剂存在一定的不足。桔梗五倍子组方后未见相关研究。该研究发现组方后，杀精效果明显，抑菌作用有待进一步研究，在以后的研究中会进一步探索。纯中药制剂可以尽可能的减少体外杀精对女性身体健康的影响，从中医药角度入手开发或改良的体外避孕杀菌剂，有可能是达到此目的的一个途径和方法，可能会具有较大的市场前景。总之，桔梗五倍子具有体外杀精避孕作用且毒性轻微，可作为中药体外杀精子剂进一步开发应用，以期为避孕节育提供新的药具。

表1 实验药液杀精时间及pH值

[1]WHO.人类精液及精子-宫颈黏液相互作用实验室检验手册[M].4版,北京:人民卫生出版社,2001:51.

[2]伏晓敏,励千里,金爱华.氯已定醋酸盐的体外杀精效果及抑菌作用的研究[J].中国现代应用药学杂志,2003,20(2):97.

[3]刘宏本.具有杀精子作用的杀微生物药物研究进展[J].上海医药,2003,24(2):79.

[4]RoddyRE,ZekengL,RyanKA,et al.Effectof nonoxynol-9Gelon urogentialgonorrheaand chlamydial infection:Arandomized controltrial[J].JAMA,2002,287(9):1117.

[5]邱毅,王磊光,宋新强.中草药桔梗提取液体外杀精子实验研究[J].中国计划生育学杂志,2008,17(4):222-224.

[6]彭建平,张杰,罗鹏程.五倍子鞣酸的体外杀精和抑菌作用研究[J].中国药房,2007,18(30):2337-2339.