胆结石患者外周血T淋巴细胞的变化及意义

李 平，叶 军，张立新，丁小平，陈静波，栾正云

(泰州市人民医院普外科，江苏 泰州 225300)

胆结石是一种常见病，可发生于胆囊、肝内胆管或胆总管。其发病因素与种族、遗传、地理、饮食等因素而不同[1-3]。细胞免疫功能在人体抗感染及内环境自身稳定中具有极其重要的作用。胆结石患者细胞免疫功能有显著性变化，其局部病理改变与外周血T细胞的变化有明显关系，我们对90例胆结石患者外周血T淋巴细胞亚群进行分析，以了解胆结石患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 非结石性胆囊炎23例、胆结石急性发作49例均来源于我院2011年6～12月门诊及住院患者。其中胆囊炎组男14例，女9例，平均(37.8±19.3)岁；胆结石急性组男28例，女21例，平均(32.5±11.7)岁。正常对照组31例、胆结石未发作41例均来源于我院体检中心。其中正常对照组男22例，女9例，平均(35.6±13.6)岁；胆结石未发作组男26例，女15例，平均(34.3±14.1)岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器 FACSCalibur流式细胞仪 美国BD公司产品，用CELLQuest软件(BD公司)获取和分析实验数据。鞘液用Systmex公司的Cellpack血细胞稀释液。

1.2.2试剂 CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC(Cat No：340499t)由BD公司提供。

1.2.3 流式细胞仪标本处理 所有受试者均于当天抽取外周静脉血2 ml，EDTA-K2抗凝，标本在6 h之内测定。将试管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD-APC 20 µl，将标本充分混匀，加50 µl标本，震荡器上充分混匀，避光放置15 min；加入溶血素2 ml，充分震荡，避光放置10 min。1 500 r/min离心5 min弃上清，加入生理盐水2 ml震荡，1 500 r/min离心5 min弃上清，加入生理盐水100µl，充分震荡混匀，待测。

1.2.4 流式细胞仪器设置及数据分析 用FACSComp调整仪器FSC、SSC、FL1、FL2、FL3、FL4的电压及补偿。用CELLQuest软件获取20 000个淋巴细胞，分析CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞占淋巴细胞的百分比。

1.3 统计学处理 采用SigmaPlot12.0软件进行统计分析，两组样本间采用t检验，三组样本间比较采用One Way ANOVA Rank Sum Test分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

正常对照组、胆囊炎组、胆结石急性组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+T细胞比较差异均无统计学意义(P=0.597，P=0.542，P=0.705)；与正常对照组比较，急性组、未发作组CD3+T细胞差异均有统计学意义(t=4.611，P<0.01；t=7.022，P<0.01)；胆结石急性组、胆结石未发作组CD3+CD8+T细胞差异亦有统计学意义(t=3.823，P<0.01；t=2.700，P=0.008)；胆结石急性组、胆结石未发作组CD4/CD8细胞差异均无统计学意义(t=1.611，P=0.110；t=2.207，P=0.058)；胆结石急性组和胆结石未发作组比较CD3+、CD3+CD8+T差异有统计学意义(t=12.896，P<0.01；t=7.181，P<0.01)，CD4/CD8比较差异亦有统计学意义(t=4.229，P<0.01)，见表1。

表1 正常对照组、胆囊炎组、胆结石组T淋巴细胞亚群的比较（±s）

表1 正常对照组、胆囊炎组、胆结石组T淋巴细胞亚群的比较（±s）

注：与正常对照组比较，#P<0.01；与正常对照组比较，*P<0.01；与急性组比较，△P<0.01。

项目 例数CD3+T细胞CD3+CD4+T细胞CD3+CD8+T细胞正常对照胆囊炎组胆结石组胆结石急性组胆结石未发作组31 23 90 49 41 70.71±5.75 71.61±9.69 69.70±9.08 76.44±5.11#61.66±5.51#△37.23±5.73 37.73±9.37 36.18±6.38 37.05±6.86 35.13±5.65 28.40±4.15 30.44±13.21 29.72±9.52 34.64±9.17#23.83±5.95*△

3 讨论

白细胞是人体的免疫细胞，其通过不同方式、不同机制消灭病原体，消除过敏原和产生免疫反应、产生抗体。白细胞根据细胞的形态特征可分为粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，它不仅具有识别抗原和排除抗原能力，而且对免疫应答起重要调节作用。其主要包括T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞和自然杀伤细胞。T淋巴细胞中包括诱导性/辅助性T细胞(CD3+CD4+)和抑制性/细胞毒性T细胞(CD3+CD8+)。CD3+CD4+T细胞为免疫应答中的主要反应细胞，CD3+CD8+T细胞可对靶细胞产生细胞介导的细胞毒作用，同时对CD3+CD4+T细胞具有调节性抑制作用。CD3+CD4+T细胞与CD3+CD8+T细胞的作用相互平衡，导致正常免疫应答。CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞的失平衡导致免疫病理的发生。

胆结石的病因迄今尚未完全明了，一般认为该病是多种因素综合作用的结果[4-5]。周玉宝等[6]报道在正常胆囊组织中未见免疫复合物(IC)，在非结石性慢性胆囊炎中有l例有IC沉积，而83%的胆囊结石患者可见胆囊膜基底部有IC沉积。IC在损伤基底膜处的沉积以及胆囊结石组的黏膜损伤更为严重，提示胆石病(尤其胆囊结石)发生在胆囊的病理改变不同于普通的慢性炎症，可能有体液免疫应答的参与[7-8]。肝胆管结石时，肝汇管区的T细胞明显高于正常，并大量围绕在小胆管、动脉、静脉周围，提示细胞免疫反应介入了该病的病理过程。

结石的产生会出现长期的炎症刺激，胆道引流不畅及细菌毒素的作用，使胆道上皮细胞的抗原组分暴露，加之变性的胶原组织作用，使T淋巴细胞参与炎症免疫应答。这些T淋巴细胞一部分在炎症局部参与炎症反应，另一部分参与全身血流循环。由于参加淋巴细胞再循环的细胞大多为T淋巴细胞，因此血中以T淋巴细胞为主活化的淋巴细胞以及记忆细胞顺淋巴再循环再次进入肝组织局部，再次增殖、分化变为效应细胞，加重局部炎症反应。不断的炎症刺激，使外周血中活化的并具增殖能力的T淋巴细胞持续增高，形成恶性循环导致胆结石患者组织局部的病变不断加重。我们对23例非结石性胆囊炎、90例胆结石患者外周血T淋巴细胞亚群分析显示，胆囊炎和胆结石患者外周血中T淋巴细胞各种亚群组份与正常对照组比较差异均无统计学意义，但胆结石未发作组CD3+、CD3+CD8+T细胞均显著低于正常对照组，而急性组CD3+、CD3+CD8+T细胞均显著高于正常对照组及慢性组。可能是结石未发作组，长期的慢性炎症状态，使T细胞和CD3+CD8+T细胞长期募集到炎症部位，使机体循环的CD3+CD8+T细胞减少。而在结石急性期，机体应激性的使CD3+CD8+T细胞升高，免疫应答增强，从而加重炎症的状态。提示外周血中CD3+CD8+T细胞对胆结石患者炎症状态起重要作用，可能直接影响患者的临床表现，通过测定胆结石患者外周血循环可了解病变局部的免疫反应和病理改变的趋势。

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