德宏州人乳头瘤病毒感染与TCT检测相关性分析

杨艳秋，段 丽

（大理学院德宏教学医院，云南芒市 678400）

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一。据世界卫生组织（WHO）报道，全世界每年约有50万新发子宫颈癌病例，约有23万妇女死于宫颈癌，中国宫颈癌的新发病例和死亡人数约占世界的三分之一。人乳头瘤病毒感染是宫颈癌的主要病因〔1〕。人乳头瘤病毒是一种小的双链DNA病毒，可特异性地感染人皮肤黏膜的鳞状上皮细胞，引起多种良性、恶性病变〔2〕。由于宫颈癌存在较长的可逆转的癌前病变期，早期发现、及时治疗，宫颈癌患者五年治愈率可达90%〔3〕。所以宫颈癌的筛查和预防是非常有意义的。液基薄层细胞学（TCT）技术和人乳头瘤病毒（HPV）检测是目前宫颈病变筛查中常用的两种方法，现将两种方法的相关性进行分析。

1 资料与方法

1.1临床资料2010年9月至2011年12月到云南省德宏州医疗集团人民医院就诊的门诊、住院病人及芒市保健院送检标本，共1 608例，其中年龄最大者72岁，最小者17岁，平均年龄38.7岁〔1〕。

1.2标本采集方法先用无菌棉签拭净宫颈表面分泌物，再用亚能公司生产的宫颈专用采集器严格按要求采集宫颈脱落细胞送检验科做HPV分型检测，用云南驰恒科技有限公司提供的宫颈薄层液基细胞配套采集器采集样本放入细胞保存液内送病理科做TCT检测。

1.3仪器与试剂

1.3.1 检测仪器 ABI7500荧光定量PCR检测仪，韩国Combi分子杂交仪，CytoPrep-1制片机，OLympusBx41显微镜。

1.3.2 试剂来源 HPV基因分型检测试剂由亚能生物技术（深圳）有限公司提供，可同时做18种高危型及5种低危型，其分别为高危型16、18、52、31、58、68、33、45、51、56、35、39、53、66、59、73、83、MM4；低危型6、11、42、43、44。

1.3.3 细胞学诊断 按2004年国际癌症协会TBS分级系统进行分级报告。

1.3.4 操作方法 HPV基因分型检测按试剂盒说明书进行HPV－DNA提取、扩增、杂交、洗膜、显色、读取结果；TCT诊断按TCT要求采集的标本经振荡离心处理，并分离沉淀的黏液、血液和炎细胞，余下的细胞经Cyto Prep-1制片机制片，将细胞均匀地制成直经13 mm超薄层细胞于载玻片上，用苏木素－伊红染色制片镜检，The Bethesda System（TBS）分级系统进行分析。

2 结果

2.1 HPV感染率1 608例宫颈可疑标本经HPV基因分型检测共检出645例阳性，阳性率为40.11%，高危型522例，高危率为32.46%，低危型73例，低危率为4.54%，混合型50例，混合率3.11%，18型高危型只有MM4未检出，5种低危型中44型未检出。

2.2 TCT检测人乳头瘤病毒阳性中有483例同时做了病理TCT检测，ASCUS者118例，高度病变36例，低度病变24例，炎症154例，正常125例，其它病变26例。

2.3 HPV各亚型在TCT异常病变中的分布在483例HPV阳性标本中，HPV各亚型分别为16型及16型合并其它亚型者147例，TCT异常55例，异常率30.56%；58型及合并其它亚型者80例，异常34例，异常率18.89%，52型及合并其它亚型者52例，异常18例，异常率10%；33型及合并其它亚型者38例，异常17例，异常率9.44%；18型及合并其它亚型者37例，异常14例，异常率7.78%，43型及合并其它亚型者33例，异常8例，异常率4.44%；31型及合并其它亚型者13例，异常6例，异常率3.33%，低危11型13例，异常3例，异常率1.67%，其它亚型70例，异常25例，异常率13.89%，因在HPV检测中不仅是单独感染，还有双重、三重，最多四重感染。见表1-2。

表1 483例HPV阳性与178例TCT异常病变中HPV亚型分布情况

表2 178例TCT异常病变者与年龄的分布情况

3 讨论

上述资料显示云南省德宏州1 608份宫颈脱落细胞HPV检测中阳性645例，阳性率为40.11%，与国内苏光〔4〕等报告的37.23%较一致，而与国外Munoz〔5〕等报导的57.4%有一定差距，可能与筛查对象和我州特殊的地理环境有关；其高危型522例，高危率为32.46%，低危型73例，低危率为4.54%，混合型50例，混合率3.11%；我州是一个地处西南边陲，与缅甸相毗邻的少数民族地区，经济和文化知识都比较落后，对自身保健意识不是很高，目前国家对这方面的投入较少，病人只能自费检查，所以临床症状较轻的及农村病人不愿做TCT检测，在645例HPV阳性病患中只有483例同时做了病理TCT检测，其中ASCUS者118例，高度病变36例，低度病变24例，将高度病变、低度病变及ASCUS视为TCT异常者共178例，炎症154例，正常125例，其它病变26例，本次实验还显示178例不正常TCT结果中HPV亚型分布较高的依次为16型，共检出147例，TCT异常55例，异常率30.89%是所有亚型中检出率及病变率都较高的一型，与相关报道一致；其次是58型80例，TCT异常34例，异常率19.10%，52型52例，异常18例，异常率10.11%；33型38例，TCT异常17例，异常率9.55%；18型37例，TCT异常14例，异常率7.86%，43型33例，TCT异常8例，异常率4.49%；31型13例，TCT异常6例，异常率3.37%，低危11型13例，TCT异常3例，异常率1.69%，其它亚型70例，TCT异常25例，异常率14.04%，与国外报到的HPV16和HPV18是宫颈癌中最常见型别，其次是HPV58、HPV52、HPV56亚型〔6〕不完全一致；HPV各亚型在各民种族及民族中的差异可能与每个地区的种族和民族的遗传特点有关〔7〕。此次178例TCT异常病变患者中30岁以下及50岁以上因就诊患者相对较少，HPV检出率及组织学病变率也较低，30～50岁龄段HPV检出率及TCT异常病变率都是最高的，但在ASCUS患者中年龄最小者仅17岁，是16型感染所致，说明HPV感染和宫颈组织学病变都存在年轻化趋势。虽然低危型主要只引起外生殖器尖锐湿疣和宫颈良性病变，在本次研究中低危型以11型检出率相对较高，检出13例，在13例阳性患者中有3例发生了TCT结果异常，所以低危型感染者临床不能轻视。

宫颈癌的发生、发展是一个由量变到质变、渐变到突变的过程，此过程需要多年，这是早期发现宫颈癌及癌前病变的绝好时机〔8〕。如能定期进行妇科检查，及时发现和治疗宫颈癌前病变，落实防治措施，宫颈癌的治愈率很高〔9〕。

目前，对HPV感染进行分型分布的研究在宫颈癌筛查及癌前病变病情随访监测中有着重要的意义〔10〕，使流行病学的研究更深入化，在筛查、防治过程中发挥着重要作用，定期、及时的进行HPV基因分型诊断及监测是预防宫颈癌的有效途经〔2〕。HPV基因分型检测较TCT更敏感，检出率更高，但操作复杂，费用高，临床可结合使用。

〔1〕吴有利，陆学东，刘键，等，膜杂交多重检测技术在HPV基因分型中的应用〔J〕.中华微生物学和免疫学杂志，2005，25（12）：1048.

〔2〕吴意，吴正林，周晓梅，等.HPV基因分型与宫颈组织病变的相关性〔J〕.中国妇幼保键，2009，24（26）：3724-3726.

〔3〕段丽，杨继华，赵中晟，等，2280例宫颈TCT防癌普查结果分析〔J〕.大理学院学报，2007，6（S1）：147-148.

〔4〕苏光，钱莉芸，刘阳，等，多重人乳头瘤病毒感染检测在宫颈病变诊断中的价值〔J〕.中国实用妇科与产科杂志，2007，23（9）：706.

〔5〕Munoz N，Bosch FX，Castellsague X，et al.Againstwhich human papillomavirus types shall we vaccineate and screen?The internationall perspective〔J〕.Cancer，2004，111（2）：278-285.

〔6〕An HJ，Cho NH，Lee SY，et al.Correlation of cervical carcinoma and precancerous lesions with human papillomavirus（HPV）genotypes detected with the HPV DNA chip microbaray meehod〔J〕.Cancer，2003，97（7）：1672-1680.

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〔8〕Denny L，Kuhn L，Pollack A，et al.Evaluation of alternative methods of cervical cancer screening for resource-poor settings〔J〕.Cancer,2000,89（4）：826-833.

〔9〕邹倩，濮德敏，周利千.液基超薄细胞技术及TBS系统检2635例宫颈涂片的临床分析〔J〕.中国实用妇科与产科杂志，2008，22（4）：268-270.

〔10〕Guyot A，Karim S，Kyi MS，et al.Evaluation of adjunction HPV testing by hybrid captuerll in woman with minor cytological abnormalities for CIN2/3 and cost comparison with colposcopy〔J〕.BMC Infect Dis，2003（3）：23.