BRCA-1和TopoII在乳腺癌中的表达及临床病理关系分析

彭 芳,张功亮,王 建,郭广秀,黄金长,肖军兰,钟 斌

(1、赣州市人民医院病理科，江西 赣州 341000;2、赣南医学院第一附属医院药剂科，江西 赣州 341000)

乳腺癌成为危害女性健康的主要恶性肿瘤之一,最近几年有年轻化趋势,其发病率在逐步上升[1、2]。乳腺癌的发生是一个复杂的多步骤、有多种生物学指标参与的过程。BRCA-1 基因为人类乳腺癌易感基因，BRCA-1 基因编码的蛋白在细胞周期调控、DNA 损伤修复、基因的转录调节、细胞凋亡和泛素化等方面起着重要的生物学功能，是重要的肿瘤抑制基因[3，4]。TopoII 基因是一个与恶性肿瘤预后有密切关系的基因，其在多种肿瘤中均有改变[5，6]。TopoII 编码的蛋白是控制DNA的拓扑状态的一类酶蛋白，存在于细胞核内，其作用的机制为催化DNA 链的断裂和结合，它是一些化疗药物的特定靶点，这些药物结合TopoII-DNA的复合物，抑制了DNA的重新连接，导致断裂的双链DNA的无法重新连接，从而诱导癌细胞的凋亡[5,6]。

本实验采用免疫组化法检测BRCA-1和TopoII 在乳腺癌和乳腺正常组织中的表达，并对其与乳腺癌临床病理指标之间的关系进行分析，来评估BRCA-1和TopoII 在乳腺癌发生、发展过程中所起的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取我院2010年1月至2012年6月行手术切除的经病理确诊的未做过任何治疗的乳腺癌标本共92例，组织学类型为浸润性导管癌。患者均为女性，年龄32～71岁，中位年龄46岁。所有标本经4%中性甲醛固定，石蜡包埋，常规制备3μm 厚切片。

1.2 实验方法 BRCA-1和TopoII 抗体购自福建迈新公司，采用免疫组织化学Envision 法，常规脱蜡，水化，柠檬酸高温抗原修复，3%H2O2溶液孵育，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素复染细胞核，脱水，透明，封片观察结果。

1.3 结果判断标准 BRCA-1 阳性表达于细胞核或细胞浆，TopoII 阳性表达于细胞核。两者判定标准均为：肿瘤细胞核阳性细胞数的比例<10%为阴性，阳性细胞数10%～25%为(+)，～75%为(++)，>75%为(+++)，结果判定采用显微镜下双盲对照法观察。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0 统计软件进行χ2检验和Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BRCA-1 在乳腺癌中的表达 BRCA-1 在92例乳腺癌患者组织中阳性表达21例，阳性表达率为23%(其中9%表达“+++”，9%表达“++”，5%表达“+”)，癌旁正常乳腺组织阳性表达率为65.1%。癌组织中BRCA-1表达较癌旁正常乳腺组织明显降低(P＜0.05)(见图1、2和表1)。

2.2 TopoII 在乳腺癌中的表达 TopoII 在92例乳腺癌组织中阳性表达80例，阳性表达率为87%(其中36%表达“+++”，41%表达“++”，10%表达“+”)，癌旁正常乳腺组织表达阳性率为8.1%。癌组织中TopoII表达率较癌旁正常乳腺组织明显升高(P＜0.05)(见图1、3和表1)。

2.3 乳腺癌组织BRCA-1和TopoII的阳性表达相关性 癌组织中BRCA-1和TopoII表达无明显相关升高(P＞0.05)。

2.4 乳腺癌组织BRCA-1和TopoII的表达与临床病理特征的关系 BRCA-1和TopoII 在乳腺癌中的表达与临床病理参数的关系见表l。乳腺癌中BRCA-1的阳性表达与肿瘤的大小、组织学分级和淋巴结转移率呈负相关。TopoII 阳性表达率与肿瘤的大小、组织学分级和淋巴结转移率呈正相关。

3 讨论

表1 乳腺癌组织与正常乳腺组织中BRCA-1和TopoII表达与临床特征关系

图1 乳腺浸润性导管癌(HE 染色×400)

图2 BRCA-1 阳性表达于细胞核或细胞浆(免疫组织化学Envision 法×200)

图3 TopoII 阳性表达于细胞核(免疫组织化学Envision 法×400)

大部分乳腺癌呈散发性，约5%～10%的乳腺癌具有遗传易感性，表现为家族聚集性[1]。有研究表明[3、4]30%～40%的家族性乳腺癌是BRCA-1 基因突变引起，BRCA-1 基因定位于人17q21,编码1863个氨基酸的蛋白质。BRCA-1 在调节细胞周期进程、DNA 损伤修复、细胞生长与凋亡及转录活化与抑制等多种生物学途径都起重要作用。DNA 损伤后，首先由DNA 损伤传感器进行探测并发出损伤信号。此后在BRCA-1的招募下，多个修复蛋白形成复合体，共同定位到损伤部位并进行修复[3，4]。BRCA-1 基因突变或BRCA-1表达降低均可能导致细胞功能失控和恶性进展[3，4]。本研究结果显示,BRCA-1 在乳腺癌组织中阳性表达率为23%比癌旁正常乳腺组织中阳性率65.1%明显降低,这与其它研究者的研究结果[1，4]相符，推测可能是组织中BRCA-1 基因表达降低抑制组织中受损基因的修复而导致其癌变，提示BRCA-1 基因表达降低可能与乳腺癌的发生有关系。并且本研究结果提示乳腺癌中BRCA-1的阳性表达与肿瘤的大小、组织学分级和淋巴结转移率呈负相关。提示BRCA-1 蛋白表达的降低与乳腺癌的浸润性生物学行为，如肿瘤大小、分级和淋巴结转移等不良预后有关。推测随着进一步研究的深入,BRCA-1 蛋白的检测将有可能作为评估乳腺癌生物学行为和预后的新因素。

TopoII 又称促旋酶，TopoII 是一种能催化DNA双链拓扑异构体相互变换的基本核酶,有两种同工酶TopoIIα和TopoIIβ，在DNA 复制、转录和染色体分离中起重要作用，是肿瘤化疗的重要靶酶。细胞内TopoII 水平直接影响TopoII 抑制剂的抗肿瘤活性，它的表达下调会降低化疗药物的敏感性[6、7]。TopoII 在细胞增殖期表达增高，其表现呈周期性变化。有研究证实，细胞S期、G2期TopoII表达明显升高，有丝分裂后期(G1、G0期)降低[7]。由于肿瘤细胞增殖活跃，故可推测TopoII与肿瘤的发生有关。研究中还发现，TopoII的表达越高，肿瘤的恶性生物学行为越明显，患者的预后越差[6]。本研究结果显示，TopoII 在乳腺癌组织中的表达阳性表达率为87%高于正常组织8.1%，而且随着细胞核异形性的明显增加，其染色程度越强烈，说明TopoII的表达与恶性进展和增殖活性的病理分级一致。因此，TopoII 能够较为客观地反映乳腺癌的增殖活性，可作为对病理学分级补充的较客观的指标相符。

临床上在乳腺癌诊断中应用的免疫标志很多，乳腺癌组织中检测BRCA-1和TopoII 有望作为评估乳腺癌生物学行为和预后的新因素。

[1]Cree IA,Kurbacher CM,Lamont A,et al.A prospective randomized controlled trial of tumour chemosensitivity assay directed chemotherapy versus physician's choice in patients with recurrent platinum-resistant ovarian cancer [J].Anticancer Drugs,2007,18(9):1093-1101.

[2]Harris LN,Broadwater G,Abu-Khalaf M,et al.Topoisomerase II amplification does not predict benefit from dose -intense cyclophosphamide,doxorubicin,and fluorouracil therapy in HER2-amplified early breast cancer:results of CALGB 8541/150013[J].J Clin Oncol,2009,27(21):3430-3436.

[3]胡 震，沈镇宙.邵志敏.BRCA-1和BRCA-2 基因突变相关性乳腺癌的普查和预防[J].实用临床医药杂志，2003，7(2)：121.

[4]李 辉.BRCA-1、BRCA2 突变与乳腺癌关系[J].中外健康文摘,2008,5(6)：28-29.

[5]Orlando L,Del Curto B,Gandini S,et al.Topoisomerase IIalpha gene status and prediction of pathological complete remission after anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy in endocrine nonresponsive Her2/neu-positive breast cancer [J].Breast,2008,17(5):506-511.

[6]李占文,杨华锋,胡云锵,等.P-gp、GST-π、TopoⅡ在乳腺癌中的表达及其意义[J].浙江医学,2007,29(9):919-921.

[7]张 静,宁殿宾,赵玉哲,等.乳腺癌原发灶及淋巴结转移灶中Pgp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义[J].肿瘤防治研究,2008,35(3):181-183.