液质联用法检测减肥类保健品中非法掺入的化学品

孙晓娟，董 宇，王晓黎

目前，中药制剂及保健品的需求逐年增加，但不法厂家为了牟取暴利，不惜在中药制剂及保健品中非法添加化学成分，欺骗、坑害消费者。不法厂家在降压类中药制剂中添加氢氯噻嗪等化学药物7-719RGANICS［1-2］，在抗风湿类药物中添加醋酸泼尼松、吲哚美辛等化学药物［3-4］，非法添加现象屡屡出现。在减肥类中药制剂及保健品的检测中，国家标准(编号2006004)仅对西布曲明、芬弗拉明、麻黄碱3个非法添加成分进行检测，并且采用了2个色谱系统，实验过程相对繁琐。本实验利用液质联用技术，采用一个色谱系统，可快速、准确地同时检测减肥类中药制剂中非法掺入的12种具有减肥功效的化学药物。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LCQ DECA XP MAX离子阱型液质联用仪，配有电喷雾离子化源(美国 Thermo公司)。

1.2 试药与试剂 盐酸麻黄碱、咖啡因、盐酸安非他酮、盐酸芬氟拉明、布美他尼、盐酸西布曲明、盐酸氟西汀、盐酸舍曲林对照品(中国药品生物制品检定所，批号:171242-200405、171215-200305、100671-200301、10073-0002、173-9301、100624-200401、100513-200401、100702-200401)、盐酸东布曲明、奥利司他(Sigma公司，批号:D0676、04139)、呋塞米(Dr.Ehrenstorfer GmbH，批号:00820)、酚 酞 (ACROSORGANICS，批 号:A0280446)。甲醇、冰醋酸为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂为分析纯。53批样品为省内监督抽样的减肥类保健食品:碧生源牌减肥茶，14批次;大印象牌减肥茶，8批次;贝兴牌左旋肉碱茶多酚胶囊，4批次;御生堂牌减肥茶，4批次;丹健减肥营养精，11批次;婷采牌减肥靓颜胶囊，2批次;绿之源瘦腩清脂素胶囊，1批次;清牌减肥晶，1批次;金领牌金领减肥冲剂，1批次;经典瘦身咖啡，1批次;人人瘦减肥茶，1批次;兴维牌清丽爽减肥茶茶剂，1批次;双礼牌清通舒软胶囊，1批次;康氏牌减肥茶(浓缩型)，1批次;梅山牌减肥神茶，1批次;时尚丽人堂清脂三天瘦，1批次。

2 方法与结果

2.1 色谱及质谱条件 色谱柱:迪马Diamonsil C18柱(150mm × 4.6mm，5μm);流动相:甲醇-20mmol/L醋酸铵(0.1%冰醋酸);梯度洗脱程序见表1;流速:0.5mL/min。

离子源:电喷雾离子化(ESI)源;检测方式:正负离子检测方式;离子源喷射电压:5.0 kV;毛细管温度:300℃;毛细管电压:15 V;鞘气流速:1.05 L/min;辅助气流速:0.15 L/min;扫描方式:一级全扫描方式，二级全扫描方式。

表1 梯度洗脱程序(%)

表2 化合物准分子离子及特征碎片离子

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取盐酸麻黄碱、咖啡因、盐酸东布曲明、盐酸安非他酮、呋塞米、盐酸芬氟拉明、布美他尼、酚酞、盐酸西布曲明、盐酸氟西汀、盐酸舍曲林、奥利司他对照品适量，以甲醇溶解并稀释制成每种化合物浓度均为10μg/mL的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 若供试品为片剂，取数片，研细;若供试品为胶囊剂，取数粒，倾取内容物，研细，称取1次口服剂量;若供试品为口服液，量取1次口服剂量，分别置100mL量瓶中，加甲醇适量，超声提取20min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。滤过(必要时进行适当的稀释)，作为供试品溶液。

2.2.3 空白溶液的制备 取不含12种目标化合物的中药制剂，按“2.2.2”项下操作，配制成空白溶液。

2.2.4 空白加样溶液的制备 取不含12种目标化合物的中药制剂，按常规口服剂量加入对照品，配制成模拟样品，按“2.2.2”项下操作，配制成空白加样溶液。

2.3 测定方法 分别吸取对照品溶液、供试品溶液、空白溶液、空白加样溶液各10μL，注入液质联用仪，记录色谱图和质谱图。

2.4 对照品溶液分析结果 采用上述色谱系统对对照品溶液进行LC-MS-MS分析，12种目标化合物的保留时间、准分子离子、特征碎片离子见表2，色谱图见图 1、图2。

图1 对照品溶液(正离子检测)选择离子监测色谱图

图2 对照品溶液(负离子检测)选择离子监测色谱图

2.5 检测限 以信噪比为3∶1时的对照品进样量作为检测限，各目标化合物的检测限见表3。

表3 目标化合物检测限

2.6 耐用性 考察不同牌号的色谱柱对12种目标化合物的分离效果，色谱柱分别为Kromasil C18柱(250mm ×4.6mm，5μm)和 Waters C18柱(150mm ×3.9mm，5μm)。结果表明，耐用性良好。

2.7 供试品溶液测定结果 对空白溶液、空白加样溶液及53批供试品溶液进行分析，结果表明，空白溶液中的中药成分不干扰测定(见图3)。空白加样溶液中检测到相应的目标化合物，质谱响应良好。53批供试品溶液中，有16批检测到保留时间与盐酸西布曲明对照品相同的化合物，样品质谱信息见图4;有3批检测到保留时间与酚酞对照品相同的化合物，样品质谱信息见图5。

图3 空白溶液色谱图

图4 供试品溶液中盐酸西布曲明质谱图

图5 供试品溶液中酚酞质谱图

3 讨论

由于在按药品标准进行的常规检验中无法检出添加的化学药物，所以，在中药制剂及保健品中擅自添加化学成分具有极大的隐蔽性和危害性。本方法可用于检测目前临床上最为常用的12种具有减肥作用的化合物，比文献［5-7］中检测的目标化合物更为全面。

通过采用甲醇、乙腈、氯仿等不同提取溶剂对模拟样品进行提取，最终确定采用甲醇超声提取法对片剂、胶囊剂及口服溶液进行预处理，制备方法简便，且提取液可直接用于液质联用仪分析。提取时间考察将阳性样品分别超声提取5、10、15、20、25min，结果表明，20min时已提取完全。

在对53批样品的检测中，笔者在11批样品(减肥茶)中检测含有咖啡因，但通过对样品工艺及处方的研究发现，茶类及含有茶多酚的样品均存在天然咖啡因成分，不存在非法添加现象，因此，此类样品可不检测咖啡因。

综上所述，本文所建立的方法操作简便、干扰少、灵敏度高，检测结果更准确。

［1］刘吉金，杨敏，李军，等.HPLC同时检测保健品及中成药中非法添加9种抗高血压化学药物的研究［J］.中国现代应用药学杂志，2008，25(8):717-719.

［2］吴嫣艳，曹玲，丁安伟.降压保健食品中非法添加氢氯噻嗪的检测［J］.南京中医药大学学报，2011，27(1):92-94.

［3］姜建国，张西如.液相色谱-质谱联用法检测非法制剂中的醋酸泼尼松［J］.中国药业，2008，17(21):28-29.

［4］刘福艳，谢元超，李毓秋，等.液相色谱-离子阱质谱联用法检测抗风湿类中药制剂中非法掺入的萘普生、吲哚美辛［J］.药物分析杂志，2008，28(8):1276-1279.

［5］曹玲，张妤琳，王宝珠.减肥保健食品中非法添加盐酸西布曲明的检测［J］.食品科学，2008，29(2):340-343.

［6］权伍英，栾燕，张欣.LC-MS/MS法检测保健食品中的盐酸芬氟拉明和盐酸西布曲明［J］.中国卫生检验杂志，2007，17(1):9-12.

［7］胡青，崔益泠，王柯.减肥类保健食品中非法添加酚酞定性定量检测方法的研究［J］.中国药学杂志，2007，42(8):624-625.