冬虫夏草微粉胶囊的制备及其腺苷的体外溶出度的测定

严 冬 梁举春

（1.西藏自治区〈成都〉科技孵化园 四川 成都 610000；2.西藏天知生物科技开发有限公司 西藏 拉萨 850000）

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体.冬虫夏草具有补肾益肺，止血化痰的功效.临床用于肾虚精亏，阳痿遗精，腰膝酸痛，久咳虚喘，劳嗽咯血.在整个冬虫夏草贸易市场，以及人们对冬虫夏草的服用，仍以原生冬虫夏草为主，大多采用泡酒，煲汤或者直接服用.但这种服用方式，不能科学地有效吸收和利用，尤其在目前，1g冬虫夏草价值最贵可达800元以上.为最大化利用该传统名贵中药材，本文采用目前较先进的真空冷冻及超微粉碎技术制备冬虫夏草微粉胶囊，并以腺苷为指标，测定了冬虫夏草微粉胶囊的体外溶出度.

1 仪器设备与材料

实验所用仪器包括：ZRS-8G智能溶出试验仪 （天津大学仪器厂），HP1100高效液相色谱仪（安捷伦公司）；Mettler-AB204电子天平（上海精密科学仪器有限公司）.

实验所用设备包括：LGJ-1真空冷冻干燥机，SYFM-108超微粉碎机.

实验所用药材包括：腺苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110879-200202，供含量测定用），冬虫夏草微粉胶囊（0.3g/粒）(批号为：100101).所用药材经成都中医药大学中药鉴定教研室吴启南教授鉴定合格可用.

实验所用试剂包括：磷酸和甲醇为色谱纯、三蒸水（自制），其他试剂均为分析纯.

2 方法

2.1 冬虫夏草微粉胶囊的制备

冬虫夏草经拣洗后用真空冷冻干燥机进行干燥，再用超微粉碎进行粉碎，粉碎后的微粉过300目筛，装入胶囊，即得.

2.2 腺苷的体外溶出度测定

1）冬虫夏草微粉胶囊中的腺苷的含量测定

参照 《中国药典》2010年版一部冬虫夏草含量测定项下的方法[1]进行测定.

对照品溶液的制备：精密称取腺苷约1.4mg，置10mL量瓶中，用90%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取溶液1mL，置5mL量瓶中，加90%甲醇至刻度，摇匀，即得28μg/mL.

供试品溶液的制备：精密称定冬虫夏草微粉0.5g共3份，分别置具塞锥形瓶中，精密加入90%甲醇10mL，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用90%甲醇补足减失的重量，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得.

方法学试验结果表明，以腺苷为对照品进行线性关系考察，结果腺苷在0.112μg～0.392μg范围内线性良好，回归方程：y=0.019x-0.003,R2=0.9999.准确度试验结果表明，腺苷的加样回收率平均为104.01%，RSD为1.70%(n=9).取上述供试品液每隔1h测定，结果表明供试品液在8h内稳定.取供试品液平行测定6次，结果RSD为1.77%，重复性良好.

2）溶出度测定

色谱条件与系统适用性试验及对照品溶液的制备见冬虫夏草微粉胶囊中的腺苷的含量测定项下.

供试品溶液的制备：取冬虫夏草微粉胶囊，照溶出度测定法[2]（中国药典2010年版二部附录X C第二法 桨法），以450mL盐酸缓冲液为溶出介质，温度为37℃±0.5℃，转速为100r/min依法操作，于10min，20min，30min，40min，50min，60min，70min，80min 分 别 取 样 10mL，同时补充同体积溶出介质.样品液经微孔滤膜滤过，取续滤液，即得.

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μL与供试品溶液10～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得.

3 结果

冬虫夏草微粉胶囊溶出度测定结果见表1.

表1 冬虫夏草微粉胶囊溶出度（%）测定结果

根据表1制出冬虫夏草微粉胶囊溶出度曲线图，见图1，2.

图1 冬虫夏草微粉胶囊溶出度曲线

图2 冬虫夏草微粉胶囊平均溶出度曲线

由以上数据和曲线可知，冬虫夏草微粉胶囊在前10分钟，溶出非常少，到达20分钟时，大量溶出，溶出度高达97%，随着时间推移，药粉继续溶出，在40分钟的时候到达溶出最高点，且溶出度基本达到100%.

4 讨论

4.1 真空冷冻干燥，是通过将物料中的水分快速的降到-40℃并凝结成冰，再迅速升温，使冰升华，从而达到干燥的作用.物料通过真空冷冻干燥，能够确保物料的成分，含量不被破坏，能最大限度的保持物料的生物原样性.超微粉碎，通过520根各重1kg的不锈钢棒的高速振荡、摩擦将物料研磨成可以达300目的粉末.物料通过超微粉碎，其细胞破壁率达95%以上，最细粒度可达0.1μm，使物料的有效成分能被人体充分吸收，提高生物利用度，更好的发挥物料的功效.为最大化利用日益稀少的珍贵的冬虫夏草资源，我们采用了这两种先进技术制备冬虫夏草微粉胶囊.

4.2 据报道，冬虫夏草具有很强的免疫调节作用，以及抗肿瘤作用、调节内分泌作用、调节心血管系统、抗菌等功能，对中枢神经系统有镇静和抗惊厥作用，对肾脏也有调节作用，尚有促进造血、抗病毒和护肝等作用.野生冬虫夏草含粗蛋白29.1%～33%,粗脂肪8.62%,总糖13.94%～24.20%，粗纤维 18.5%,水分 10.8%,灰分 8.64%[3].冬虫夏草中还含有氨基酸、脂肪酸、核苷类物质、甾醇、甘露醇、多糖等，这些成分是冬虫夏草发挥生理活性或药效的主要物质基础，其中核苷类物质中的腺苷是冬虫夏草最重要的活性物质之一[5].故本文以腺苷为指标成分测定冬虫夏草微粉胶囊的体外溶出度.

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].2010.北京:化学工业出版社,2010:附录Ⅵ D.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S].2010.北京:化学工业出版社,2010:附录X C.

[3]王尊生,顾宇翔,周丽,等.冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体固体发酵粉化学成分的分析[J].天然产物研究与开发,2005,17(3):331-336.