针药并用对脾虚证大鼠血清甲状腺激素水平的影响

刘亚丽,杨丽娟,晋志高,王晓宁



针药并用对脾虚证大鼠血清甲状腺激素水平的影响

刘亚丽,杨丽娟,晋志高,王晓宁

(煤炭总医院,北京 100028)

观察脾虚证大鼠血清甲状腺激素水平的改变及针刺配合西洋参汤对其改变的影响。将40只wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、西洋参组、针药并用组,每组10只。模型组、西洋参组、针药并用组用偏食法建立脾虚证动物模型。造模成功后,模型组用生理盐水1 mL/100 g体重灌胃;西洋参组给予西洋参汤1 mL/100 g灌胃;针药并用组采用针刺双侧足三里、三阴交,并给予西洋参汤1 mL/100 g灌胃。以上治疗均为每日1次,治疗10 d。第11天处死4组动物,取样做测定血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)含量,并测量各组动物造模前后体重,胸腺、脾脏质量。模型组大鼠造模后体重、胸腺质量/体重、脾脏质量/体重比及血清T3、T4含量显著下降,与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05,＜0.01)。西洋参组与针药并用组大鼠胸腺质量/体重及T3、T4含量较模型组有显著提高(均＜0.01);针药并用组大鼠体重和脾脏质量/体重与模型组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05)。针药并用能改善脾虚证大鼠的脾虚症状,其作用机理与调节甲状腺激素水平有关。

针刺疗法;针药并用;西洋参;甲状腺激素;大鼠

现代研究发现,脾虚证见于临床诸多疾病,消化、内分泌、神经、免疫系统的疾病均可由脾虚引起[1]。脾虚证患者及动物模型中,有不同程度的神经内分泌和免疫学指标改变,机体免疫状态低下,提示脾虚证与神经内分泌免疫调节环路有一定联系[2]。本实验采用偏食法建造中医脾虚动物模型,通过观察各组动物血清甲状腺激素水平的变化,探讨针药并用对脾虚证大鼠神经内分泌免疫方面的影响,以期为脾虚证治疗提供新的实验依据,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

普通级2月龄wistar大鼠40只,由中国中医科学院医学动物中心提供,雌雄各半,体重为(200±20)g。动物室为开放式、标准实验室,温度、照明、噪声、换气均控制在规定范围内,普通饲料喂养,自由饮水。

1.2 主要试剂及仪器

西洋参购自北京同仁堂药店。取西洋参300 g,冷水浸泡1 h,在武火煎煮15 min后文火煮30 min,取出头煎液,再加冷水同上方法煎煮为2煎。取全部水煎液混匀过滤后,于60℃水浴浓缩至300 mL,为西洋参汤,生药含量为1 g/mL,置于冰箱内保存。血清三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)、促甲状腺素(TSH)放射免疫试剂盒均由北京科美东雅生物技术有限公司提供。SN-695B型智能放射免疫测量仪由上海原子核研究所日环仪器一厂生产。

1.3 造模方法

正常对照组10只动物生理盐水灌胃,每日1次,每次1 mL/100 g体重,共10 d,第11天处死动物。其余30只动物采用彭成等[3]方法造模,50%医用乙醇1 mL /100 g体重,山西白醋(pH=3)1 mL/100 g体重,诱发脾气虚大鼠模型。于实验第1天用50%白酒1 mL/100 g体重灌胃,第2天后每天用山西白醋1 mL/100 g体重灌胃,共10 d。第11天停止造模。

造模成功后将动物随机分为3组。模型组10只,改用生理盐水1 mL/100 g体重灌胃,每日1次,共10 d;针药并用组10只,针刺双侧足三里、三阴交,取穴参照《实验针灸学》,选用0.30 mm×40 mm毫针,针刺深度为0.2～0.3 cm,采用平补平泻法捻转行针1 min,留针20 min,再给予西洋参汤1 mL/100 g体重灌胃,每日1次,共10 d;西洋参组10只,给予西洋参汤1 mL/100 g体重灌胃,每日1次,共10 d。第11天处死3组动物,取样做各种检查。

1.4 观察指标及方法

各组动物于最后1次给药后16 h眼球取血,观察各组大鼠血清中T3、T4、rT3、TSH水平的变化。采用放射免疫分析法,严格按试剂盒说明书要求并由专人进行操作,所有样品一次完成实验。同时测量各组动物实验前后体重、胸腺和脾脏质量。

1.5 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件进行处理,数据以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较,采用检验,以＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 针药并用对实验性脾虚证大鼠体重及脏器指数的影响

由表1可见,实验前各组大鼠体重比较,差异均无统计学意义(＞0.05);模型组大鼠实验结束后体重减轻,与正常对照组比较,差异具有统计学意义(＜0.05)。经针刺和灌服西洋参后,西洋参组大鼠体重比模型组略有升高,但差异无统计学意义(＞0.05);针药并用组大鼠体重升高,与模型组和西洋参组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05)。

表1 各组动物实验前后体重比较 (±s,g)

注:与正常对照组比较1)＜0.05;与针药并用组比较2)＜0.05

由表2可见,模型组大鼠胸腺质量/体重、脾脏质量/体重与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05)。经针刺和灌服西洋参后,西洋参组和针药并用组胸腺质量/体重均升高,与模型组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05)。西洋参组、针药并用组及正常对照组3组间比较,差异均无统计学意义(＞0.05)。针药并用组大鼠脾脏质量/体重升高,与模型组和西洋参组比较,差异均具有统计学意义(＜0.05)。

表2 各组大鼠脏器质量/体重比较 (±s,mg/g)

注:与正常对照组比较1)＜0.05;与模型组比较2)＜0.05;与针药并用组比较3)＜0.05

2.2 针药并用对实验性脾虚证大鼠血清甲状腺激素水平的影响

由表3可见,模型组大鼠血清T3、T4含量较正常对照组显著降低(均＜0.01)。经针刺和灌服西洋参后,西洋参组和针药并用组血清T3、T4含量均比模型组提高(均＜0.01)。西洋参组、针药并用组及正常对照组3组间血清T3、T4含量比较,差异均无统计学意义(＞0.05)。

表3 各组动物血清甲状腺激素含量比较 (n=10)(±s)

注:与正常对照组比较1)＜0.01;与模型组比较2)＜0.01

3 讨论

本实验采用偏食法(先食酒后食醋)建立脾虚证动物模型。从食醋第3天起,动物逐渐出现脾虚证表现,如体重减轻、食量减少、消瘦、腹泻、体温下降、耐寒力差、拱背、不好动、毛发松散、脱肛、自由活动度减少等,按中医学进行辨证可以判定模型动物为脾虚证。经针刺和灌服西洋参后,西洋参组和针药并用组大鼠体重增加、食量增加、耐寒力改善、毛发正常、自由活动度增强,显示针刺和灌服西洋参可改善脾虚症状。

甲状腺是机体重要的内分泌腺体之一,它通过分泌甲状腺激素影响和调节机体细胞的生长、发育和能量代谢活动。T3、T4是甲状腺细胞分泌的一组维持机体代谢、促进生长发育和神经系统分化成熟的重要激素,也是反映甲状腺功能的重要指标。甲状腺与胃肠道在胚胎期都起源于原始前肠,在正常情况下,消化系统对甲状腺外周代谢起着重要作用;同时,甲状腺也能促进消化系统吸收功能,故甲状腺激素与消化系统功能的关系密切[4]。在病理状态时,脾虚患者吸收功能下降,糖摄入不足,5'-脱碘酶活性减低,结果T4向T3转化减少,同时T3吸收也减少,这可能是脾虚患者血清甲状腺激素水平下降的原因之一[5]。而胸腺和脾脏都是淋巴器官,与甲状腺关系密切,T3、T4是参与机体细胞的生长、发育和能量代谢的重要激素之一,T3、T4的持续降低会减少体内物质吸收,从而使得能量代谢降低,通过免疫-神经-内分泌之间复杂的相互作用,机体的免疫、代谢功能下降,进一步影响到胸腺、脾脏的物质吸收和代谢,最终使胸腺质量/体重、脾脏质量/体重降低。本研究中,脾虚模型组动物血清T3、T4含量均比正常对照组显著下降(均＜0.01),与陈芝喜等[6]报道的结果相符。

足三里穴属胃经,三阴交穴属脾经,脾胃互为表里,两穴配伍可以治疗许多消化系统疾病。针刺两穴可影响神经-内分泌-免疫系统,以提高机体免疫功能[7],但其治疗机制尚未系统阐明。西洋参味苦、性凉,入心、肺、肾经,功能滋阴降火、益气生津。中医学认为,肾为先天之本,对免疫系统发挥主导作用,能维持和调整免疫平衡及其稳定。现代药理研究表明,西洋参具有增强免疫、抗肿瘤、抗炎抗病毒、抗诱变作用[8]。

陈芝喜等[6]认为甲状腺激素可以与下丘脑-垂体-甲状腺-胸腺轴进而与整个环路发生联系,刺激细胞因子的分泌,以增强机体的免疫功能。本实验中脾虚模型组血清T3、T4水平下降明显,说明脾虚证动物有甲状腺代谢和功能失调,进一步降低整个机体的代谢和免疫功能。而西洋参组和针药并用组较模型组胸腺质量/体重、T3、T4均明显增加,说明针刺和灌服西洋参可以增强机体吸收能力,通过调节动物的免疫-内分泌系统,促进机体细胞的生长、发育和能量代谢,使T3、T4的吸收和转化增加,最终血清中T3、T4的含量升高明显。甲状腺激素与受体结合后,通过调节基因表达,合成蛋白质和酶产生生物效应。胸腺是机体的重要淋巴器官,其功能与免疫紧密相关,分泌胸腺激素及激素类物质,胸腺细胞存在甲状腺激素受体,与甲状腺激素结合后,促进胸腺因子的分泌,提高机体胸腺依赖性免疫功能[9]。针刺和灌服西洋参可以通过调节动物的丘脑-垂体-甲状腺-胸腺内分泌环,提高动物机体的代谢和免疫水平,使胸腺质量/体重增加。这些是中医学“脾主运化”理论在实验研究中的客观体现。

针药并用组试验后体重和脾脏质量/体重较模型组显著提高(＜0.05),而西洋参组试验后体重和脾脏质量/体重较模型组无统计学差异(＞0.05),可能与针刺和灌服西洋参的叠加作用有关。这需在以后的研究中进一步证实,也为以后其他相关实验提供有限参考。

综上所述,针药并用组和西洋参组的胸腺质量/体重及血清T3、T4水平与模型组比较均升高,同时针药并用组试验后体重和脾脏质量/体重较模型组显著提高,提示针刺足三里、三阴交穴结合西洋参汤和单独服用西洋参汤具有下丘脑-垂体-甲状腺轴多层次的调节作用,对脾虚证和脾虚证引起的代谢免疫低下,有显著的治疗作用,为脾虚证的研究提供了理论依据。

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[3］ 彭成,罗光宇.脾气虚脾不统血证候动物模型的研究思路[J].中医杂志,1996,(4):241-242.

[4] 罗振麟.消化道与内分泌腺[J].国外医学:消化道疾病分册,1985 (1-4):199.

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[6] 陈芝喜,刘小斌,周名璐,等.健脾补肾药对脾虚大鼠细胞因子水平的影响[J].放射免疫学杂志,2003,16(4):217-219.

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Effect of Combined Acupuncture and Medicine on Serum Thyroid Hormone in Rats with Spleen Deficiency Syndrome

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,100028,

To observe changes in serum thyroid hormone levels and the effect of acupuncture plus American ginseng decoction on the changes in rats with spleen deficiency syndrome.Forty Wister rats were randomly allocated to normal, model, American ginseng and combined acupuncture and medicine groups, 10 rats each. An animal model of spleen deficiency syndrome was made by dietary bias in the model, American ginseng and combined acupuncture and medicine groups. After successful model making, the model group received an oral gavage of normal saline 1 ml/100 g; the American ginseng group, an oral gavage of American ginseng decoction 1 ml/100 g; the combined acupuncture and medicine group, acupuncture at bilateral points Zusanli and Sanyinjiao plus an oral gavage of American ginseng decoction 1 ml/100 g. The above treatments were given once daily for 10 days. The four groups of rats were sacrificed at 11 days. Samples were taken for the measurement of serum triiodothyronine (T3), thyroxine (T4), reverse triiodothyronine (rT3) and thyroid stimulating hormone (TSH) contents. Body, spleen and thymus weights were also measured in every group of rats before after model making.Body weight, thymus weight/body weight and spleen weight/body weight, and serum T3and T4contents decreased markedly in the model group of rats after model making. There were statistically significant differences compared with the normal group (＜0.05,＜0.01). Thymus weight/body weight, and serum T3and T4contents increased significantly in the American ginseng and combined acupuncture and medicine groups of rats compared with the model group (all＜0.01). There were statistically significant differences in body weight and spleen weight/body weight between the combined acupuncture and medicine group and the model group (＜0.05).The combined use of acupuncture and medicine can relieve the symptoms of spleen deficiency in rats with spleen deficiency syndrome. The mechanism of its action is related to regulating thyroid hormone levels.

Acupuncture therapy; Combined use of acupuncture and medicine; American ginseng; Thyroid hormones; Rats

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2012.11.844

1005-0957(2012)11-0844-03

国家自然科学基金(30572416)

刘亚丽(1975 - ),女,主治医师

2012-03-03