紫外分光光度法测定澳泰乐颗粒中总黄酮的含量

许文学 邢学锋*

（1南方医科大学中医药学院；2南方医科大学附属中西医结合医院，广州510515）

紫外分光光度法测定澳泰乐颗粒中总黄酮的含量

许文学1,2邢学锋1*

（1南方医科大学中医药学院；2南方医科大学附属中西医结合医院，广州510515）

目的 建立紫外法测定澳泰乐颗粒中总黄酮的含量测定方法。方法 采用紫外分光光度计，检测波长510nm，以芦丁为标准品测定本品总黄酮含量。结果 测得线性回归方程为Y=2.1196X+0.0017，R2= 0.99969（n=5），平均回收率为98.75%，RSD为2.08%（n =9）。结论 本方法简便，准确、重复性好。

澳泰乐颗粒；总黄酮；紫外分光光度法

澳泰乐颗粒由中药返魂草、郁金、黄精等五味组成，为临床上较为常用的中药。国家卫生部药典委员会部颁中药成方制剂第十八册中收载的澳泰乐颗粒[1]质量标准（WS3-B-3520-98）未对含量进行有关规定.本研究采用紫外分光光度法对澳泰乐颗粒中所含的总黄酮含量进行测定，从而使该品种的质量控制达到一个更为完善的水平。

1 仪器与材料

1.1 仪器 美国惠普UV-8453型可见紫外分光光度计；DK-S26型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）赛多利斯CP3245型万分之一天平；KQ-500DE型医用数控超声仪（昆山超声仪器有限公司）。

1.2 材料与试剂 芦丁对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇均为市售分析纯。

2 总黄酮含量测定方法研究

2.1 对照品溶液的配制 称取减压干燥至恒重的芦丁约20mg，精密称定为19.2mg，置100ml棕色容量瓶中，加70%乙醇适量，微热使溶解，冷却至室温后以70%乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.192mg/ml的芦丁对照品溶液，冷藏备用。

2.2 供试品溶液的配制 取澳泰乐颗粒适量，精密称重后，溶解于少量蒸馏水中，采用湿法上样加于已处理好的聚酰胺柱（30～60目，1g，内径约9mm），用蒸馏水洗至水无色后，以70%乙醇洗脱，直至颜色很淡时停止洗脱，收集洗脱液并挥干溶剂，得总黄酮部位。少量70%乙醇溶解后定容于25ml容量瓶中备用，即得供试品溶液。

2.3 最大吸收波长的选择 精密移取对照品溶液和供试品溶液各5.0ml置25ml量瓶管，加5% NaNO2溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加入10% Al（NO3）溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10.0ml，加70%乙醇至刻度，混匀，放置15min，照紫外分光光度法[2-4]，在400～700nm波长范围内进行扫描，对照品与供试品溶液显色后吸收曲线相似度高，在510nm处均有最大吸收，见图1，故选择510nm作为测定波长。

2.4 标准曲线绘制 精密移取上述芦丁对照溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，置25ml容量瓶中，各加蒸馏水5.0ml，加5% NaNO2溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加入10%Al（NO3）溶液1.0ml，摇匀，放置6min，加10%NaOH溶液10.0ml，然后以70%乙醇定容至刻度，混匀，放置15min，以1号容量瓶溶液为空白，于510nm处测定吸光度值，以总黄酮量（C，mg）为纵坐标，以吸光度值（Abs）为横坐标，绘制标准曲线，见图2。回归方程如下式：Y= 2.1196X+0.0017，R2= 0.9996。数据表明芦丁在0.192～0.960mg范围内具有良好线形关系。

图1 可见－紫外吸收曲线

图2 芦丁标准曲线

2.5 精密度试验 取供试品显色溶液重复测定510nm处吸光度值5次，吸光度平均值0.7043，RSD=0.49%，方法精密度良好。

2.6 重现性试验 称取澳泰乐颗粒约3g 5份，精密称定，依法处理、测定507nm处吸光度值。以相应试剂为空白，按对照品的回归方程计算供试品中总黄酮含量，平均含量为10.55%，RSD=0.47%，方法重现性良好。

2.7 稳定性试验 取供试品溶液，自首次测定后10min、30min、60min、90min、120min测定吸光度值，RSD= 1.26%，样品显色后2h 内稳定性良好，测定结果可信。2.8 加样回收率试验 称取已知含量的澳泰乐颗粒5份，精密称定后，精密移入“2.1”项下新鲜配制的芦丁对照品溶液5.0ml（含芦丁0.960mg），依法处理、测定510nm处吸光度值。以相应试剂为空白，按对照品的回归方程计算供试品中总黄酮含量。平均加样回收率为98.75%，RSD=2.08%。

3 样品总黄酮含量的测定

按供试品制备方法制备5批样品，同法测定。精密移取供试品溶液1ml，依法处理、测定507nm处吸光度值。以相应试剂为空白，按对照品的回归方程计算供试品中总黄酮含量，其总黄酮平均含量为10.54%。

4 讨论

最大吸收波长的选择：精密移取对照品溶液依法照紫外分光光度法（中国药典2010年版附录），在400～700nm波长范围内进行扫描，对照品溶液显色后吸收曲线在510nm处有最大吸收，故选择510nm作为测定波长。

反应时间分别选择10、15、20、30min，测定含量后发现15min后反应已基本完全，吸光度未见明显增加，故选择15min为最佳反应时间。

部颁中药成方制剂第十八册中收载的澳泰乐颗粒质量标准（WS3-B-3520-98）未对其中含量进行有关规定。澳泰乐颗粒所含的总黄酮在起所有成分中占有较大比例，且为有效成分，因此，本研究将总黄酮作为澳泰乐颗粒质量控制的指标是可行的，这为控制该药品质量和保障人民用药安全提供了保障，为全面控制药品质量提供了方法参考。

[1] 中华人民共和国药典委员会.澳泰乐颗粒质量标准(WS3-B-3520-98)[S].中药成方制剂第十八册.

[2] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

[3] 吕鹏,贾秀梅,张振凌.怀山药及非药用部位总黄酮含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(2):65-68.

[4] 杜芳艳,付凯卿.花生蔓不同部位黄酮含量的研究[J].食品科学,2008, 29(1):137-140.

许昌每个科室都有新闻宣传信息员

[本刊讯] 许昌市疾病预防控制中心自7月1日起将新闻宣传和信息工作量化，并纳入年度目标考评范围。各业务科室指定一名新闻宣传信息员，负责本科室疾病预防控制信息的报送和新闻宣传稿件的撰写工作。

许昌市疾病预防控制中心高度重视新闻宣传和信息工作，将该项工作与精神文明建设、创先争优等活动有机结合。该中心实行新闻宣传和信息工作责任制，完善了新闻宣传和信息稿件审核制度、月报制度和考核奖惩制度。

（李杨 杨建宇）

Determination of Total Flavone in Aotaile Granules by UV

Xu Wenxue1，2 Xing Xuefeng1■,(1 College of Traditional Chinese Medicine,Southern Medical University, Guangzhou 510515; 2 Integrative Medicine Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515)

Objective To establish a method for determination of total flavone in Aotaile granules by ultraviolet spectrophotometric method. Methods The content of total flavone was determined at 510 nm by ultraviolet spectrophotometric method with rutin as standard. Results The regression equation is Y= 2.11960X+0.0017, R2= 0.99969(n=5), the average recovery rate and RSD were 99.67% and 0.58%, respectively. Conclusion The method is simple, accurate and reproducible.

Aotaile granules; Total flavone; Ultraviolet spectrophotometric method

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.15.107

1672-2779（2012）-15-0163-02

韩世辉

2012-06-29）

*通讯作者