RP-H PLC测定注射用盐酸万古霉素的含量

庄权权

（福建省泉州市第一医院药剂科，福建 泉州 362000）

RP-H PLC测定注射用盐酸万古霉素的含量

庄权权

（福建省泉州市第一医院药剂科，福建 泉州 362000）

目的：用反向高效液相色谱法测定注射用盐酸万古霉素的含量。方法：色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm)，以0.025 mol/L磷酸二氢钾缓冲液-甲醇（80∶20）为流动相，检测波长为230 nm，流速0.7 mL/min，柱温40℃。结果：在5～80 mg/L范围内，万古霉素浓度与峰面积的线性关系良好（r=0.999 9），高、中、低3种浓度的加样回收率为98.65%～101.7%，相对标准差为0.10%～0.98%。结论：该方法准确、简便，适用于注射用盐酸万古霉素的质量控制。

反向高效液相色谱法；注射用盐酸万古霉素；含量测定

万古霉素是一种糖肽类抗生素，对各种革兰阳性菌（包括球菌与杆菌)均具有强大抗菌作用，特别是用于治疗耐药葡萄球菌敏感性强，效果显著，经济、安全[1]。其作用机制是以高亲和力结合到敏感细菌细胞壁细胞前体肽聚末端的丙氨酸，阻断构成细菌细胞壁的高分子肽聚糖合成，导致细胞壁缺损而杀灭细菌。此外，也可能是通过改变细菌细胞膜渗透性，并选择性地抑制其RNA的合成[2]。万古霉素抗菌谱窄，抗菌活性强，疗效确凿，属杀菌剂。口服不易吸收，主要分布于血浆，可透入各体腔和胎儿体内，但不易进入房水，很少在体内代谢，主要通过肾脏排泄，血液透析和腹膜透析不能清除此类药物。万古霉素对革兰阳性球菌（肠球菌除外），敏感的阳性杆菌及厌氧阳性球菌和阳性杆菌均呈杀菌作用。万古霉素对肠球菌呈抑菌作用，对肠球菌需在氨基糖苷类抗生素协同作用下才呈杀菌作用[3]。

近年来万古霉素不良反应屡有报道,如休克、过敏样症状、急性肾衰、粒细胞减少等[4-7]。对重症病人、长期使用本药的患者、低出生体重儿、新生儿和幼儿与可引起肾、听力损害的药物（氨基糖苷类抗生素等）联合用药的患者应控制其血药浓度[8]。本研究建立了反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定注射用盐酸万古霉素含量的方法。该法简便、准确，适用于注射用盐酸万古霉素的质量控制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

LC-20A液相色谱仪 （日本岛津公司）；LC-solution色谱工作站 （日本岛津公司）；SPD-10AVP紫外检测器 （日本岛津公司）；CP225D型电子天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）；KO-100DB超声波清洗机 (昆山市超声仪器有限公司)；Simplicity超纯水系统（美国Millipore公司）。

1.2 试药

万古霉素对照品（原中国药品生物制品检定所，规格：100 mg，批号：0360-200301）；注射用盐酸万古霉素 （Eli Lilly Japan K.K，规格：0.5 g，批号：MW19231）；甲醇为色谱醇；水为重蒸馏水；磷酸二氢钾等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验[9]

色谱柱为Shim-pack VP-ODS C18（250 mm× 4.6 mm）；流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钾缓冲液 -甲醇（80∶20），检测波长为 230 nm，流速0.7 mL/min，柱温40℃，进样量：20 μL。在此色谱条件下，对照品和样品中万古霉素与其相邻色谱峰的分离度均 ＞1.5，理论半数（n）按万古霉素峰计算不低于2 000。供试品、对照品及空白辅料色谱图分别见图1～3。

图1 万古霉素对照品、供试品及空白辅料RP-HPLCA万古霉素对照品；B万古霉素供试品；C空白辅料

2.2 对照品溶液的制备

精密称取万古霉素对照品约10 mg，置25 mL量瓶中，加10 mL双蒸水溶解后，再加磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取0.5 g注射用盐酸万古霉素，精密称定，置25 mL量瓶中，加 10 mL双蒸水溶解后，再加磷酸二氢钾缓冲液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

取万古霉素对照品适量，精密称定，用磷酸二氢钾缓冲液溶解制备成 5、10、20、40、80 mg/L系列浓度溶液，按上述色谱条件，进行含量测定。以峰面积(Y)对溶液浓度（X）进行线性回归，得回归方程

Y=（1.955 96 e－0.05）X＋（－10.141 8）r=0.999 9；结果表明：在5～80 mg/L范围内，万古霉素浓度与峰面积的线性关系良好。

2.5 精密度试验

取万古霉素对照品适量，精密称定，用流动相制成含万古霉素5、20、80 mg/L的溶液，分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪，重复进样5次。精密度试验RSD=0.53%。

2.6 稳定性试验

按1.4项方法制备样品溶液，分别于0、0.5、1、2、4 h取样，精密量取20 μL注入液相色谱仪测定。稳定性试验RSD=1.10%，说明万古霉素在4 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

按1.5项方法平行制备6份同一样品溶液测定含量。重复性试验RSD=0.97%，说明本法重复性良好。

2.8 回收率试验

于空白辅料中，按处方量加入万古霉素对照品适量，用流动相制成低、中、高3种浓度万古霉素溶液（分别为5、20、80 mg/L），按外标法分别测定并计算回收率及RSD。结果万古霉素回收率均在95.0%～105.0%之间，RSD=0.99%表明本方法的回收率良好。结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=5）

3 讨论

3.1 对于波长的选择，中国药典采用 280 nm检测。本研究取万古霉素对照品适量，加流动相溶解后，进行紫外扫描（200～400 nm），发现万古霉素在230和280 nm处检测出色谱峰基本一致，但是空白对照试验表明，溶剂在230 nm波长处有极弱吸收，且保留时间短，不干扰主要成分和有关物质的检查，故选择230 nm为检测波长。

3.2 在实验过程中，选择1.0 mL/min流速时，液相色谱仪器柱压达4 MPa，影响色谱柱使用寿命，低流速又影响出峰时间，经过实验比较，确定流速为0.7 mL/min。

3.3 柱温高低影响万古霉素的出峰时间。柱温升高，出峰时间加快；同时柱温过高又影响柱子使用寿命。通过实验，确定柱温为40℃，此条件不影响万古霉素分离度。

3.4 实验表明，pH值及盐浓度对万古霉素的峰位及柱效有一定的影响，但对杂质检出及改善峰对称性影响不大。同时由于高浓度的盐对柱效损耗较大，经过多次摸索和比较，发现以0.025 mol/L磷酸二氢钾溶液∶甲醇（80∶20）为流动相峰型好，柱效高，各峰之间分离较好，故选此作为流动相。

3.5 万古霉素注射液在4 h之内稳定性良好，建议医护人员现配现用，以避免其降解，影响用药安全。

本研究结果表明反相高效液相色谱法准确、简便，适用于注射用盐酸万古霉素的质量控制。

[1] 汪波，蒋红，李秀清，等.去甲万古霉素治疗耐甲氧西林葡萄球菌属感染的临床及细菌学评价[J].中国抗生素杂志，2001，26（3）：187.

[2] 陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学[M].16版.北京：人民卫生出版社，2007：1.

[3] 张象麟.药物临床信息参考2007[M].成都：四川科学技术出版社，2007：5.

[4] 闫正华，董亚琳，董海燕，等.警惕万古霉素不良反应[J].中国医院药学杂志，2001，21（9）：553.

[5] 诸林俏，黄晨，周璇，等.万古霉素致急性肾衰1例[J].医药导报，2010，29（3）：305.

[6] 王渊，韩冬.盐酸万古霉素致过敏反应1例分析[J].首都医药，2010，17（12）：67.

[7] 杨沐，任伟.万古霉素静脉滴注致中性粒细胞减少[J].药物不良反应，2009，11（2）：121.

[8] 李昕，李焕德.万古霉素给药方案的研究进展[J].中国药学杂志，2010，45（8）：561-566.

[9] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版 （二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录28-29.

Content Determination of Vancomycin Hydrochloride for Injection by RP-HPLC

Zhuang Quanquan（Pharmacy Department of the First Hospital of Quanzhou City of Fujian Province,Fujian Quanzhou362000，China）

Objective:To determine the content of vancomycin hydrochloride for injection by RP-HPLC.Methods:Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm)was used,the mobile phase consisted of 0.025mol/L KaH2PO4-methanol(80∶20)，the detection wavelength was at 230 nm,the flow rate was 0.7 mL/min and the column temperature was at 40℃.Results:There was a good linear relationship(r=0.999 9) within the range of 5～80 mg/L for vancomycin,the average recovery was from 98.65%to 101.7%for three different concentrations of vancomycin,and the relative standard deviation was from 0.10%to 0.98%. Conclusion:This method is simple,accurate and can be used for the content determination and the quality control of vancomycin hydrochloride for injection.

RP-HPLC；Vancomycin Hydrochloride for Injection；Content Determination

10.3969/j.issn.1672-5433.2012.03.004

2011-06-14）

庄权权，男，硕士，药师。研究方向：临床药学。E-mail：ansen09@hotmail.com