薰衣草离体培养技术研究

摘要：以薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）带芽茎段或顶芽为外植体，探讨不同激素种类与水平等对其愈伤诱导、不定芽增殖与不定根形成的影响，并筛选了薰衣草试管苗过渡移栽的适宜基质。结果表明薰衣草离体培养适宜的培养基分别为，不定芽启动培养基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ；继代增殖培养基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ；生根培养基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ。以等体积的泥炭与珍珠岩混合后作为基质驯苗，幼苗成活率可达９６．９％。

关键词：薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）；离体培养；培养基

中图分类号：Ｓ５７３＋．９；Ｑ９４５．５１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）03－0623-03

Ｓｔｕｄy ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ

ＳＵ Ｃｈｅｎ

（Ｘｉａｎｇｆａｎ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｘｉａｎｇｙａｎｇ ４４１０２１，Ｈｕｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｓｔｅｍ ｏｒ ｔｉｐ ｂｕｄ ｏｆ Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｈｏｒｍｏｎｅ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ｏｎ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ， ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ， ａｎｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｗere ｓｔｕｄｉｅｄ； Aｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｇｒｏｕｎｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌ． ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ ｓｅｅｄｌｉｎｇ was screened out． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅｔｔｅｒ ｂｅ ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ． ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｇｏｏｄ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ． Ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｏｒ Ｗｈｉｔｅ＋ ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ ｇ／Ｌ＋ ａｇａｒ ６．５ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｒｏｏｔｓ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ． Ｕｓｉｎｇ ｍｉｘｅｄ ｐｅａｔ ａｎｄ ｖｅｒｍｉｃｕｌｉｔｅ ｗｉｔｈ ｅｑｕａｌ ｖｏｌｕｍｅ ａｓ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｇｒｏｕｎｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｗａｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ａｓ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ９６．９％

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ； ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｔｉｖａｔｉｏｎ； ｍｅｄｉｕｍ

薰衣草（Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ）为唇形科薰衣草属多年生植物，用途广泛，其干燥花在医药上可作为镇静、驱风、利尿、兴奋、强壮药，提取的精油可作为高级香水、香皂、洗涤用品的香料，近年来作为园林观赏植物受到广泛关注，极具开发利用前景［１－３］。但我国栽培薰衣草品种主要依靠从国外引种，且种子萌芽率低，给薰衣草生产快速发展带来困难。目前薰衣草离体培养与植株再生技术的研究已有少量报道［４－８］，本试验以法国选育的薰衣草品种为材料，在已有的薰衣草离体培养技术的基础上，进一步探讨建立薰衣草植株再生体系进行无性快繁的技术，为实现薰衣草优良品种种苗规模化育苗奠定技术基础。

１材料与方法

１．１材料

薰衣草种子为法国进口，种植于襄樊职业技术学院试验基地，于２００９年４月从薰衣草母株上采取生长健壮的带芽茎段作为外植体。

１．２方法

１．２．１外植体表面灭菌将采取的带芽茎段带回实验室，去叶并剪切成３～４ ｃｍ长的茎段，用饱和洗涤液浸泡５～１０ ｍｉｎ，流水冲洗２０～３０ ｍｉｎ，在超净工作台上用７５％的乙醇浸泡３０ ｓ，再用０．１％的ＨｇＣｌ２浸泡６～７ ｍｉｎ，最后用无菌水冲洗３～４次，每次１～２ ｍｉｎ，用无菌纸吸干水分，以备接种。

１．２．２启动培养取已表面灭菌的材料，切割成１～２ ｃｍ长的带１芽茎段，接种于启动培养基上，以获得无菌材料，３５ ｄ后统计萌芽率。启动培养基以ＭＳ为基本培养基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０ ｍｇ／Ｌ）。

１．２．３继代增殖培养启动培养中获得的无菌材料切成长约２ ｃｍ的带１芽茎段，接种于增殖培养基中，增殖培养基以ＭＳ为基本培养基，添加不同水平的ＢＡ（０．１、０．５、１．０、２．０、３．０ ｍｇ／Ｌ）和不同水平的ＩＢＡ（０．１０、０．２５、０．５０ ｍｇ／Ｌ）组合，共１５个处理。３０ ｄ后统计增殖率，以筛选适宜的增殖培养基。

１．２．４生根培养将丛芽分割成２～３ ｃｍ高带３～４叶的单芽，接种于诱导生根培养基中，生根培养基以Ｗｈｉｔｅ为基本培养基，添加不同水平的ＩＢＡ（０．１、０．４、０．８ ｍｇ／Ｌ）或不同的水平ＮＡＡ（０．１、０．４、０．８ ｍｇ／Ｌ），并以Ｗｈｉｔｅ为对照，共７个处理。２５ ｄ后统计生根率，以筛选适宜的生根培养基。

以上启动培养基、增殖培养基中添加蔗糖３０ ｇ／Ｌ，生根培养基中添加蔗糖２０ ｇ／Ｌ，3种培养基均添加琼脂６．５ ｇ／Ｌ、ｐＨ为５．８～６．２；高温高压湿热灭菌２０ ｍｉｎ。培养条件均为：光照强度１ ５００～２ ０００ ｌｘ，温度（２３±１）℃，光照时间１３ ｈ／ｄ。

１．２．５试管苗过渡移栽当试管苗不定根长０．８～１．０ ｃｍ，苗高３～４ ｃｍ时，从培养瓶中取出，洗净基部培养基，用６００～８００倍多菌灵稀释液浸泡基部２～３ ｍｉｎ（药浴）后，种植于不同基质中进行过渡移栽，同时采取适度降温、遮光、增湿等技术措施，以提高试管苗过渡移栽成活率。过渡移栽基质设泥炭、泥炭与珍珠岩等体积混合、蛭石、珍珠岩等４个处理，２５ ｄ后统计成活率。

２结果与分析

２．１培养基中ＢＡ浓度对薰衣草愈伤与腋芽萌动的影响

带芽茎段接种于启动培养基上，５～７ ｄ时腋芽始萌发，３０～３５ ｄ时部分形成丛生芽。试验结果（表１）表明，腋芽萌发率有随启动培养基中ＢＡ浓度的提高而升高的趋势。在ＢＡ浓度为２．０ ｍｇ／Ｌ时，腋芽萌发率最高，不定芽数量多；在ＢＡ浓度较低时，不定芽数量少，但芽健壮、长势旺，综合两方面因素，薰衣草启动培养以ＭＳ培养基添加ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ的效果最好。

２．２激素种类与水平对薰衣草不定芽增殖的影响

带芽茎段接种于继代增殖培养基上，３～５ ｄ后芽陆续萌发，２５～３５ ｄ时再次形成不定芽丛。试验结果（表２）表明，继代增殖培养基中添加的ＢＡ与ＩＢＡ水平不同，芽的增殖率与长势存在显著差异。增殖率与ＢＡ浓度密切相关，在试验浓度范围内，增殖率先随ＢＡ浓度的升高呈升高趋势，但ＢＡ浓度过高时，增殖率有所下降，且芽的长势减弱。后续试验也表明，ＢＡ浓度为３．０ ｍｇ／Ｌ时，随继代次数增加，不定芽出现玻璃化现象，不利于后期成苗。增殖率与ＩＢＡ浓度亦表现出一定的相关性，在试验浓度范围内，ＩＢＡ浓度为０．２５ ｍｇ／Ｌ时增殖率最高。因此，薰衣草不定芽增殖培养中，ＭＳ培养基添加ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ和ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ增殖效果好，丛芽壮。

２．３激素种类与水平对薰衣草不定根形成的影响

单芽接种于生根培养基上，７～１０ ｄ时切口处出现白色根状突起，试验结果（表３）表明，Ｗｈｉｔｅ添加ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ或ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ时生根率较高，但添加ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ时根稍壮。

２．４不同基质对薰衣草试管苗过渡移栽成活率的影响

用等体积的泥炭与珍珠岩混合后做基质，试管苗生长快，过渡移栽成活率可达９６．９％，苗质优良；而以蛭石做基质，试管苗生长缓慢，且过渡移栽成活率最低，为８２．０％（表４）。此外，移栽试验表明，薰衣草试管苗苗龄２０～２５ ｄ，根长０．８～１．０ ｃｍ时，试管苗生理活性旺，根吸收能力强，且此时期移栽不易伤根，成活率高。

３结论

本试验结果表明，薰衣草离体培养适宜的培养基分别为：不定芽启动培养基ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ；继代增殖培养基，ＭＳ＋ＢＡ １．０～２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．２５ ｍｇ／Ｌ ＋蔗糖３０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ；不定根分化培养基，Ｗｈｉｔｅ＋ＩＢＡ ０．４ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ或Ｗｈｉｔｅ＋ＮＡＡ ０．８ ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ ｇ／Ｌ＋琼脂６．５ ｇ／Ｌ；以等体积的泥炭与珍珠岩混合后作为基质驯苗，幼苗成活率可达９６．９％。

参考文献：

［１］ 陈和平，周贺新，贺瑞振，等． 薰衣草的研究进展［J］． 农垦医学，2005，27（2）：142-145.．

［２］ 刘忠军，刘虹，热西达，等． 薰衣草的引种栽培及应用研究［Ｊ］． 新疆农业科技，２００５（２）：４４－４５．

［３］ 韩继龙． 薰衣草栽培技术［Ｊ］． 现代园艺， ２０１０（６）：３８－３９．

［４］ 王远会，项华，何叶，等． 薰衣草栽培管理技术［Ｊ］． 南方农业（园林花卉版），２００９（５）：２４－２５．

［５］ 廖苏梅，周巍，徐程． 薰衣草的组织培养［Ｊ］． 植物生理学通讯，２００４，４０（３）：３３６－３３６．

［６］ 许耀祖，王晓军，赵民安，等． 薰衣草高频植株再生系统的建立［Ｊ］． 西南农业大学学报（自然科学版），２００５，２７（３）：３４４－３４９．

［７］ 许耀祖，王晓军，赵民安，等． 几种生物学因子对薰衣草胚性愈伤组织悬浮培养生长的影响［Ｊ］． 生物技术通讯，２００５，１６（１）：３４－３６．

［８］ 周辉明，陈燕，罗庆国． 薰衣草的组织培养和快速繁殖［Ｊ］． 三明农业科技，２００６（３）：１２．

（责任编辑向闱）

收稿日期：２０１１－０８－１６

基金项目：湖北省襄阳市科技攻关项目

作者简介：苏琛（１９６８－），女，河北高碑店人，实验师，主要从事园艺与生物技术实践教学、研究与推广工作，（电话）１３４８７１３１９１６（电子信箱）

ｄａｊｉｅ１９６８＠１２６．ｃｏｍ。