“瘦肉精”快速检测方法筛选中应注意的几个问题

陈 玲 尹伶灵 彭媛芳 陆庆泉 魏秀丽 张呈军 关晓敏

（①山东省兽药质量检验所 济南 250022 ②青岛农业大学）

近年来随着“瘦肉精”事件的的频发，特别是2011年“3.15双汇瘦肉精”事件后，猪、牛、羊“瘦肉精”的检测成为了各地残留监控的重中之重。山东省作为畜牧养殖大省，为保证生猪、牛、羊及其产品的质量安全，投入大量资金多次进行瘦肉精专项整治工作。在专项整治工作中，为了保证检测的时效性，首先运用快速方法进行筛选，阳性样品送省级检测机构进行确证、定量。目前所使用的快速筛选方法主要是酶联免疫测定法（ELLSA法）和试纸卡法。笔者发现，由于不同的检测条件，不同的样品状态，以及不同生产厂家的试剂盒（试纸卡），对检测结果有着许多不确定的影响因素。笔者通过以往的检测工作，总结了“瘦肉精”快速筛选中应注意的几个问题，以便获得准确可靠的“瘦肉精”检测结果提供有益的参考。

1 正确的采集和处理尿样

样品的正确采集、保存和处理，可确保结果的准确性。为防止抽取的尿液或肌肉等组织样品变质，在取样后，样品应立即置于0～4℃条件下保存；如需较长时间存放，应在-18℃条件下保存。运输过程中，样品温度不得超过4℃，时间不超过24h。

2 酶联免疫试剂盒法（ELLSA法）

酶联免疫测定法是将抗原与抗体反应和酶化学反应结合到一起的测定技术，具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，所需仪器化程度低和样本前处理相对简单，适于大量样本筛查。

由于不同试剂盒生产厂家和不同批次间存在一定的差异，为保证检测结果的准确性，采用酶联免疫法时，各实验室应对所采购的试剂盒性能进行评价，筛选出适合本实验室使用的试剂盒。评价指标包括灵敏度、准确度、精密度、特异性、稳定性等方面。

检测时应注意以下几个方面：（1）样品在离心分离时，应注意离心的温度和转速，若达不到离心转数则相应增加离心时间，以达到上清无杂质的要求。（2）肌肉等组织样品前处理过程中，有两相以上分离时，应确保取目的相时不带入其它相。（3）每个酶标板在测定时均应做标准曲线，一个酶标板的标准曲线不能用于另外一个酶标板的测定；并且应做阴性、阳性对照；不能使用自来水、纯化水及蒸馏水作为阴、阳性对照。（4）酶联免疫测定加样时应避免加在孔壁上部，并注意不能溅出样品孔外，以防止样品间的交叉污染；每个样品加样后应更换吸头，加样速度要均一。（5）反应温度和时间应按规定的要求执行。试剂盒使用之前将所有试剂和需用板条回升至室温（20～25℃）并平衡30min以上；加入终止液后检测时间一般不超过5 min。因为酸终止后吸光度值会慢慢下降，应尽快比色测定。（6）酶联板的洗涤要彻底。洗涤的次数一般为3～4次，有时需洗5～6次。洗板所用水为去离子水，若没有制备去离子水的仪器，也可使用市售娃哈哈纯净水。（7）酶联免疫试剂盒为一次性检测用品，不能重复使用。（8）酶标仪在使用前应经过计量部门的检定，以保证检测结果的合法有效。

3 快速检测试纸卡法

“瘦肉精”快速检测试纸卡是单克隆抗体技术、免疫层析技术和金标显色技术的综合运用。对于基层工作着和养殖户来说，金标试纸卡具有使用简便、快速、易于实现现场检测的优势。检测时应注意以下问题：（1）必须使用阴性、阳性对照；不能使用自来水、纯化水及蒸馏水作为阴性对照。（2）尿液如是澄清的可以直接检测；如显浑浊，最好进行离心后取上清液进行检测，没有离心机的可适当静置一段时间（10～20min）后在进行检测。（3）尿液的滴加量应严格按照说明书的要求，使用配套的滴管进行滴加。（4）所有试纸卡启封后1h内使用。试纸卡在室温下一次性使用，避免阳光直射和电风扇直吹；试纸卡为一次性检测用品，不能重复使用。（5）由于尿样的差异，有的检测线红色可能偏淡或偏灰，此情况也应判定为阴性结果。（6）试纸卡的保存温度一般为4～30℃，保存期限为18～24个月，保存温度不当或时间过长，试纸卡都有可能失效。检测时温度在20±5℃时最佳，检测前应将试纸卡进行回温，如果在养殖场或屠宰场现场测定时环境温度过低，可在室内进行测定。

“瘦肉精”的快速检测方法仅限于大量样品的快速筛查和现场检测，不能作为行政处罚的依据，对其筛选出的阳性样品要使用仪器方法进行确证。目前本省的确证方法统一采用农业部1063号公告规定的《动物尿液中11种β-受体激动剂残留检测 液相色谱-串联质谱法》和农业部1025号公告规定的《猪尿中β-受体激动剂多残留检测—液相色谱-串联质谱法》检测。