猪瘟的实验室诊断与防治

银梅,唐海蓉,宁红梅,陈桂香

（河南科技学院,河南新乡453003）

1 发病情况

新乡市某规模化猪场于2012年2月先有7头仔猪发病,该厂技术人员及时使用青霉素、地塞米松、氨基比林、维生素C等药物治疗,但是效果不明显.随后,立即采取隔离、消毒、更新饲料等措施.然而,几天后又发现育肥猪和母猪相继发病,2周内共有27头猪发病,其中15头死亡.根据发病的情况初步怀疑为猪瘟.

2 临床症状与病理变化特点

发病猪体温升高,达41～42℃；耳根、四肢和臀部皮肤发红；精神沉郁,食欲减退,渴欲增强；眼结膜发红,有的发绀；呼吸困难；眼角有脓性分泌物；有的猪腹泻,粪便腥臭,有的患病猪排便干硬；病猪站立不稳,行走共济失调,喜卧,濒死期呈游泳状,最终衰竭而死亡.

共剖检6头,其中2头为病情较严重的猪,4头为病死猪.剖检后发现病理变化比较相似：胸腔均有大量积液；全身淋巴结肿大,尤其是肠系膜淋巴结肿大非常明显,颜色呈红色,有的呈紫色,切面多汁,呈大理石样；肝脏肿大,颜色变浅；脾脏边缘梗死,呈紫黑色；肾脏表面有散在的数量不等的出血点；膀胱黏膜有少量出血点；喉头黏膜有少量的出血点；扁桃体点状出血；回肠和盲肠黏膜有不同程度的出血性卡他性炎症特点.

3 实验室诊断

3.1 涂片镜检

取病死猪心、脾、肾、淋巴结等组织涂片,染色,镜检.未观察到细菌.

3.2 细菌培养

将切取病死猪心、脾、肾、淋巴结等组织无菌操作接种在麦康凯、血液、琼脂、巧克力琼脂平板及肉汤培养基中,37℃培养24 h,观察细菌生长状况.经培养后,培养基上均无细菌生长.

3.3 ELISA方法诊断

用检测猪瘟抗原ELISA诊断试剂盒诊断.具体操作如下：从试剂盒取出一条（8个孔）用抗体包被的微量反应板,设1个阳性对照孔、1个阴性对照孔,相应位置做好标记.先在8个反应孔中都加入50 μL的检测抗体,然后在阴性对照孔中加50 μL阴性对照样品,在阳性对照孔中加50 μL阳性对照样品,在剩下的6个反应孔中分别加入50 μL被检血清样品,用振荡器振荡,将反应板中的溶液混匀.在37℃孵育2 h,用PBST洗涤5次.将反应板拍干；在各孔中加入辣根过氧化酶标记二抗50 μL,在37℃孵育20 min,洗涤5次,将反应板在吸水纸上拍干；在每个反应孔中加入TMB底物100 μL；在暗处室温下孵育10 min,同时观察颜色变化；最终在每个反应孔中加入终止液100 μL终止反应（加入的顺序同底物的加入顺序）；在酶标仪上测量样品与对照孔在450 nm波长的吸光值.

TMB底物加后,检测样品孔和阳性对照孔颜色均呈深蓝色,阴性对照孔颜色未发生变化.450 nm波长下,阳性对照孔OD值为2.23,阴性对照孔OD值为0.007,被检测6个样品OD值分别为2.08、1.98、2.78、2.54、2.12、1.87.

本检测试剂盒的判定结果标准为450 nm波长的OD值大于0.5为阳性,0.3～0.5为疑似,小于0.3为阴性.根据判定标准,确定被检测样品结果均为阳性,从而确诊为猪瘟.

4 防治

隔离病猪,全群彻底消毒,减少各种应激,加强营养.对全群无症状母猪50头份、育肥猪30头份、仔猪10头份猪瘟弱毒疫苗进行紧急免疫.对病猪,肌肉注射抗猪瘟血清、黄芪多糖注射液和氟苯尼考注射液,每日2次,连用7 d.发热明显的猪只肌肉注射柴胡注射液和氨基比林注射液,进行退热.经过治疗症状较轻病猪逐渐康复,但重症猪陆续死亡.对逐渐康复的病猪也用10头份猪瘟弱毒疫苗进行免疫.继续观察40 d未出现新病例,本次疫情得到控制.

5 讨论

目前,因为种猪带毒、疫苗质量、野毒在猪群中的循环传播、混合感染、抗生素的滥用等原因而出现猪体的免疫力下降,免疫失败,新生仔猪免疫耐受等原因导致猪群猪瘟的感染率和发病率仍然很高,严重影响着我国养猪业的健康发展.随着疫苗的广泛使用,猪瘟发病情况日趋复杂,出现了隐性感染猪瘟、温和型猪瘟、非典型猪瘟、母猪带毒综合征等感染的新形式[1],并且非典型猪瘟、温和型猪瘟和隐形感染猪瘟都缺乏典型的流行病学特点、特征性的临床症状和剖检病理变化,仅依临床检查很难诊断,必须结合实验室诊断方能确诊,极易错过最佳治疗时机[2].

ELISA（酶联免疫吸附试验）是基于抗原与抗体特异性反应原理的一种方法[3].该技术已经被普遍应用于动物重大传染病的诊断和流行病学调查.同时,ELISA试剂盒的出现使得该方法所用到的试剂的保存条件易满足,并且使得人工操作的程序得到优化,简单易行.ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点,这对于疫病病原的快速检测及疫病的预防、诊断以及治疗具有十分重要的意义[4].

猪瘟是一种发病率和死亡率都很高的后天免疫抑制性疾病,一旦发生容易继发感染,病情加重和复杂化.对重症猪瘟目前尚无较好的治疗和控制方法,应尽早淘汰,减少损失.

[1]王美君,侯艳红,倪娇,等.猪瘟免疫失败的原因及其防治对策[J].中国畜牧兽医,2011,38（2）：217-219.

[2]王三虎,赵坤,韩瑞.猪瘟的研究进展[J].河南科技学院学报：自然科学版,2008,36（2）：69-76.

[3]杨汉春.动物免疫学[M].北京：中国农业大学出版社,2012.

[4]张仁标.四种猪瘟ELISA试剂盒的比较分析[J].福建畜牧兽医,2011,33（5）：24-25.