HBV感染者血清GP73的检测及临床意义

周尧东 高国生 翁彭剑 徐炜峰

GP73是Kladney等［1］在研究成人巨细胞性肝炎病原学时首次被发现的一种相对分子质量为73kDa的跨膜糖蛋白，又称为Ⅱ型高尔基体膜蛋白(Golgi phosphoprotein 2，Golph2)和高尔基体膜蛋白Ⅰ(Golgimembrane proteinⅠ，GolmⅠ)。近年来国内外均有文献报道GP73很可能成为诊断肝癌的重要标志物，但GP73在以乙型肝炎为基础的HCC患者中的表达研究少有报道［2～4］。本研究通过检测血清GP73在不同类型HBV感染者中的表达情况，试图探明血清GP73在乙型肝炎病毒感染者中的临床意义。现将结果报道如下。

对象与方法

1.对象:所有病例均为笔者医院2010年1～10月的住院患者。男性92例，女性20例，患者年龄50.48±13.78岁。其中慢性乙型肝炎患者29例，男性24例，女性5例，患者年龄37.17±12.68岁;乙肝肝硬化患者28例，男性19例，女性9例，患者年龄56.46±11.14岁;HCC患者55例，男性49例，女性6例，患者年龄54.45±10.73岁。所有患者HBSAg均为阳性，诊断标准依据中华医学会制定的《慢性乙型肝炎防治指南》及第4届全国肝癌学术大会讨论通过的原发性肝癌诊断标准，且半年内未使用免疫调节剂和抗病毒治疗［5，6］。另选择健康献血员22名作为正常对照组，男性14例，女性8例，年龄46.59±15.61岁。

2.标本采集:受检者均采集清晨空腹静脉血3ml，分离后的血清于－20℃冰箱保存待测，所有标本无溶血现象。

3.检测方法:GP73测定采用酶联免疫吸附试验(定量)检测，试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供;AFP检测采用美国雅培AXSYM免疫化学发光仪;肝功能、血常规、凝血酶原时间指标均采用标准方法检测。透明质酸、层黏蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原采用上海海军医学研究所放射免疫分析试剂盒检测。

4.统计学方法:采用SPSS 16.0软件。计量资料如为正态性分布采用均数±标准差±s)表示，否则采用中位数(四分位数)表示。正态分布且方差齐的多组均数比较采用方差分析和LSD－t检验;非正态分布的数据进行转换(取平方根)后行方差分析和LSD－t检验。两组均数间比较如为正态性分布采用t检验，否则将数据进行转换(取平方根)后行t检验。ROC曲线分析参照文献［7］。双变量间相关性采用Spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1.不同病情患者血清GP73检测结果比较:疾病组(包括慢乙肝、肝硬化、HCC)血清GP73含量均显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P均 ＜0.05);慢乙肝组和肝硬化组之间血清GP73含量差异不大(P＞0.05)。HCC组血清GP73含量均显著高于其他组，差异有统计学意义(P均＜O.05)。按照正常人对照组单侧95%(x±1.645s)制定参考范围，超出该范围为阳性，统计各组 GP73阳性率。GP73在HCC时阳性率最高，其次是肝硬化、慢乙肝。各疾病组总体阳性率差异有统计学意义(χ2=68.57，P＜0.01)，但通过多个样本率比较的χ2分割法计算，疾病组阳性率均显著高于正常对照组，但HCC、LC、慢乙肝组之间阳性率差异无统计学意义。采用ROC曲线进一步分析GP73对HCC的诊断价值，其ROC曲线下面积AUC达到0.865，95%置信区间为0.801～0.929，其检测HCC的最佳cut－off值为145ng/ ml，此时敏感性和特异性分别为70.91%和92.41% (表1、图1)。

表1 各组血清GP73检测结果比较

图1 GP73鉴别诊断HCC的ROC曲线分析

2.HBV感染者血清GP73与其他血清检测指标的相关性分析:对HBV感染者血清GP73及其他血清检测指标进行Spearman秩相关分析，结果表明血清GP73与ALP、GGT、CHE、AFP、LAP、AFU、ADA、RBC、HGB均有一定的相关性(P均＜0.05)，特别是与ALP、AFP、LAP的相关性较高(r均＞0.300，P均＜0.01)(表2)。

3.HCC患者临床及病理因素与血清GP73浓度的关系:对55例HCC患者血清GP73浓度，按HBV－DNA载量(＜1000与≥1000copy/ml)、肿瘤直径大小(＜5cm与≥5cm)、占位结节数(1个与2个及以上)等情况进行比较。结果显示虽然血清GP73浓度在病毒载量高组、肝癌直径大组及占位结节数多组均高于对应组，但差异没有统计学意义(P均＞0.05) (表3)。

表2 HBV感染者血清GP73与其他血清检测指标的相关性分析

表3 HCC患者临床及病理因素与血清GP73浓度的关系

讨论

2002年，Kladney等应用Western blotting技术发现肝炎、肝硬化患者肝组织中GP73表达高于正常肝脏70倍以上;同时发现用HBV转染的HepG2细胞形成的HepG2.2.15强烈表达GP73蛋白，提示HBV感染与GP73蛋白表达之间存在某种关联。至2005年，Schwegler等应用糖蛋白组学手段发现了GP73与原发性肝癌之间的密切相关性，原发性肝癌患者血清中GP73蛋白表达显著增强。

本研究结果表明，疾病组(包括慢乙肝、肝硬化、HCC)血清GP73含量均显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P均＜0.05);HCC组血清GP73含量均显著高于其他组，差异有统计学意义(P均 ＜0.05)。这提示感染HBV的患者血清GP73表达水平普遍上调，发展为HCC后血清GP73水平显著升高，这与Kladney和Block的观点较为一致。而且血清GP73阳性率有随疾病进展而逐渐升高的趋势(HCC阳性率＞肝硬化阳性率＞慢乙肝阳性率)，虽然差异没有统计学意义(P均＞0.05)，但这可能与样本量较小有关，血清GP73是否与HBV感染者疾病进展密切相关有待进一步验证。通过ROC曲线分析GP73对HCC的诊断价值，其ROC曲线下面积AUC达到0.865，这说明血清GP73蛋白对HCC的诊断价值较高。

为揭示GP73含量的升高与其他肝功能指标的关系，我们对血清GP73与其他血清检测指标进行了Spearman秩相关分析，结果发现血清GP73与多项指标相关，特别是与ALP、AFP、LAP的相关性较高(r均＞0.300，P均＜0.01)。ALP、AFP、LAP与HCC的相关性已早有共识，这从侧面进一步证明了GP73对HCC诊断的重要性。

为此，我们进一步分析了55例HCC患者临床及病理因素与血清GP73浓度的关系，研究结果表明GP73浓度不受HBV－DNA载量、HCC的病理因素(大小、结节数)、介入治疗(1周内)的影响，这与梁冠林等［8］观点并不完全一致。但值得注意的是，血清GP73浓度在病毒载量高组、肝癌直径大组及占位结节数多组均高于对应组，其差异虽未表现出统计学意义(0.05＜P＜0.20)，但这可能是样本量不够大引起的，更确切的结论需要大样本量、多中心的研究来证实。

总之，HBV感染者血清GP73普遍升高，特别是HCC时升高显著，可作为一项较好的诊断HCC的血清标志物，但在临床中的实际应用还需要大宗的实验数据对其进行支持。

1 Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi－localized protein upregulated by viral infection［J］.Gene，2000，249(1－2):53－65

2 Marrem JA，Romano PR，Nikoheva O，et al.GP73，a resident Golgi glycoprotein，is a novel serum marker for hepatocellular carcinoma［J］.JHepatol.2005，43(6):1007－1012

3 Giannelli G，Antonaci S.New frontiers in biomarkers for hepatocellular carcinoma［J］.Dig Liver Dis，2006，38(11):854－859

4 毛一雷，杨华瑜，徐海峰，等.新的肝癌血清标记物GP73在肝癌诊断中的初步研究［J］.中华医学杂志，2008，88(14):948－951

5 中华医学会肝病学分会、感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南［J］.中华肝脏病杂志，2005，13(12):881－891

6 中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌诊断标准［J］.中华肝脏病杂志，2000，8(3):135

7 赵发林，候艳，李康.临床试验评价的ROC分析方法［J］.中国卫生统计，2007，24(4):349－351

8 梁冠林，廖志学，冉顺，等.血清GP73在肝脏肿瘤中的表达及意义［J］.中华普通外科杂志，2010，25(4):339－340