沈素芳,汤赛冬,孙泉云
(1.上海市动物疫病预防控制中心,上海 201103;2.上海市闵行区动物疾病预防控制中心,上海 201109)
Kobu病毒(Kobu virus)属小核糖核酸病毒科成员,为无囊膜RNA病毒,病毒直径约30nm,基因组大小为8.2kb~8.3kb,包含编码一个聚合蛋白的大的开放阅读框(ORF)[1]。聚合蛋白由3个结构蛋白(VP0、VP3、VP1)和7个非结构蛋白(2A~2C、3A~3D)组成。现在已经证实Kobu病毒属至少分为3个种,即人Kobu病毒(也称Aichi病毒)、牛Kobu病毒和猪Kobu病毒。人Kobu病毒感染与人的急性胃肠炎具有相关性,1991年由日本Yamashita T等分离自腹泻病人的粪便样品[2],kobu这个词便来源于日语,意思是“球形”或“突起”;牛Kobu病毒已在牛和羊群中检测到,于2003年首先在健康牛群的血清和粪便样品中被证实[3];猪Kobu病毒由匈牙利和中国的学者率先报道[4-5],分离的病毒株分别被命名为S-1-HUN和swine/2007/CHN,这2个毒株也被认可为猪Kobu病毒的参考毒株。亚洲和欧洲的不少学者已经报道了猪Kobu病毒感染状况,表明在健康猪群和表现腹泻症状的猪群的粪便或血清样品中均检出较高的阳性率,可见其流行很广。虽然尚未弄清猪Kobu病毒感染的临床意义和流行病学特征,但值得关注和持续化监测。
现有的研究报道表明,猪Kobu病毒感染发生在欧洲、美洲和亚洲的部分国家,其中以亚洲国家的相关报道为最多。Reuter G等[6]于2007年2月从匈牙利某猪场健康猪群中采集60份粪便样品,经RT-PCR检测,检出Kobu病毒阳性39份,阳性率为65%。2008年11月Reuter G等[7]又从匈牙利同一猪场的健康猪群中分别采集60份粪便样品和60份血清样品,经RT-PCR检测,猪粪便样品中检出Kobu病毒阳性32份,阳性率为53.3%;猪血清样品中检出阳性16份,阳性率为26.6%。Barry A F等[8]经对巴西和荷兰Kobu毒株的基因测序和遗传关系分析,表明分离株未有明显的地缘差异。Park S J等[9]采用RT-PCR、克隆、基因测序和遗传关系分析等实验技术,并结合流行病学调查,表明猪Kobu病毒与猪腹泻病症存有关联,在韩国表现腹泻症状的猪群普遍存在Kobu病毒感染。同时,Kobu病毒可能在猪的胃肠炎致病作用中充当了一定的角色。An D J等[10]为调查猪Kobu病毒感染状况,采集了来自于韩国3个饲养管理水平较高且设施较为完善的猪场的119头份猪粪便样品,经RT-PCR技术,检出Kobu病毒阳性53份,阳性率为36.1%;检出A群轮状病毒阳性14份,阳性率为11.8%;而猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均为阴性。经核苷酸序列分析,表明韩国的Kobu病毒株分布于5个支系,但相互间同源性很高(99%~100%)。Wang G等[11]于2010年从位于上海市闵行区、青浦区和奉贤区的3个规模猪场采集了116头份猪粪便样品,经RT-PCR检测,共检出猪Kobu病毒阳性数45份,阳性率为38.8%,不同猪场间阳性率分别为46.7%、35.1%和32.4%,说明上海猪群中Kobu病毒感染率较高。经对其中27份Kobu病毒株的基因测序,表明上海分离株具有多源性。
经对猪Kobu病毒感染猪日龄的调查,表明幼龄猪较成年猪更易感。Khamrin P等[12]于2001年-2003年间从泰国6个猪场采集了98份7日龄~49日龄腹泻病猪的粪便样品,经RT-PCR检测,检出Kobu病毒阳性97份,阳性率达99%。经基因测序和比对,分离毒株与Kobu病毒参考毒株(S-1-HUN和swine/2007/CHN)高度同源,核苷酸序列同源性为91.5%~96.3%。Barry A F等[8]对巴西不同年龄段猪群(哺乳仔猪、保育猪和生产母猪)的115份粪便样品进行了Kobu病毒感染率调查,结果检出61份阳性,阳性率为53%;在荷兰18头保育猪粪便样品中检出3份阳性,阳性率为6.7%。同时,在巴西3d~180d的猪群中采集了30份血样,结果检出23份阳性,总阳性率达76.7%。Khamrin P等[13]于2009年采集了日本28个猪场的健康猪群的293头份粪便样品,经RT-PCR检测,检出133份Kobu病毒阳性,阳性率为45.4%,其中124份阳性样品集中于6月龄以下猪群,9份来自于6月龄以上猪群。随机选取52份Kobu病毒株进行了基因测序和遗传关系分析,经与参考毒株比对,51份Kobu毒株形成一个独立分支,与其他业已公布的Kobu毒株的核苷酸序列同源性较低,而与牛Kobu病毒的同源性则很高。试验结果表明,日本6月龄以下健康猪群普遍存在Kobu病毒感染。An D J等[10]发现,无论猪群临床上表现正常或表现腹泻,猪Kobu病毒感染在韩国具有普遍性,其中3周龄以下仔猪群感染率最高。
由于猪Kobu病毒是新发现病毒,相关的研究报道比较匮乏。虽然表明本病毒可能是猪腹泻致病因子之一,但在发生或没有腹泻病症的猪粪便或血清样品中均能检测到Kobu病毒阳性,说明猪Kobu病毒可能是条件性常在病毒,也可能参与了猪腹泻的共感染。因此,只有对其临床表现、致病机制、传播机制、免疫应答和基因遗传演化等方面的深入化研究,才能有助于对猪Kobu病毒的真正认识和有效防控。
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