乙型肝炎患者外周血T细胞亚群的分析及意义

李秀梅，梁树人，李顺天，李 萍，戴晨阳，徐 健，苏 瑞，刘 莉

(天津市传染病医院，天津300192)

乙型肝炎(乙肝)是一种免疫相关疾病，机体感染乙肝病毒(HBV)后并不直接对肝细胞造成损伤，而是通过诱发机体的免疫反应间接损伤肝细胞。其中细胞免疫在肝细胞损害的发生中起主导作用，中心环节是通过T细胞对抗原的识别和激活，其中比较重要的T细胞亚群有CD3(总T细胞)，CD4(辅助/诱导T细胞)，CD8(抑制/细胞毒T细胞)。同时，机体产生的免疫反应又发挥着清除病毒的作用。机体感染HBV后外周血各淋巴细胞亚群间的平衡被打破，主要表现为T细胞亚群绝对细胞数和功能的改变，这种变化可反映机体的细胞免疫状态。由于乙肝的免疫机制复杂，因此对各型乙肝患者外周血T细胞亚群的绝对细胞数进行观察，以深入了解各型乙肝患者T细胞亚群的特点，进而探讨其与e抗原、病毒载量、乙肝病毒YMDD变异的关系，为乙肝患者的临床诊断提供一定的实验依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 228例不同乙肝患者均来自天津传染病医院2008年4月～2009年12月住院患者，其中包括:急性乙型肝炎(AHB)患者42例，男32例、女10例，年龄(32.45±11.38)岁;慢性乙型肝炎(CHB)患者88例，男62例、女26例，年龄(38.17 ±13.15)岁;乙肝肝硬化(LC)患者63例，男50例、女13例，年龄(40.64±12.80)岁;原发性肝癌(PHC)患者35例，男28例、女7例，年龄(43.69± 13.45)岁。临床诊断标准参照2005年全国病毒性肝炎会议修订的《慢性乙型肝炎防治指南》［1］。正常对照组35例，男22例、女13例，年龄(37.58± 14.41)岁，均为门诊健康体检者。

1.2 方法

1.2.2 标本处理 入院第2周清晨采患者空腹静脉血3 mL，乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝。在样品测定管(Trucount管)中首先加入50 μL抗凝全血，然后加入20 μL TritestCD4-FIYC/CD8-PE/CD3-PerCP抗体，振荡混匀，室温避光放置20 min。取出后再加入450 μL溶血素(1X)，振荡混匀，室温避光放置15 min，准备上流式细胞仪进行T细胞亚群绝对细胞数及比值的检测。剩余血离心后取出血浆置于－20℃冰箱保存，用于HBeAg、HBV-DNA含量、YMDD变异的检测。

1.2.4 统计学方法 采用SPSS11.5软件包进行统计学处理，计量资料以s表示，多组资料比较采用单因素方差分析，各组间比较采用SNK-q检验。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 各组乙肝患者外周血T细胞亚群绝对细胞数的比较 见表1。

2.2 HBeAg(+)/(－)患者T细胞亚群绝对细胞数比较 见表2。

2.3 HBV-DNA(+)/(－)患者T细胞亚群绝对细胞数比较 见表3。

2.4 YMDD变异组与野生组T细胞亚群绝对细胞数比较 见表4。

表1 不同乙肝患者T细胞亚群绝对细胞数与正常对照组的比较(s)

表1 不同乙肝患者T细胞亚群绝对细胞数与正常对照组的比较(s)

注:与对照组比较，*P＜0.01

组别 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 AHB组 42 2 094.19±414.35* 1 084.67±353.49* 953.10±283.87*1.34±0.63 CHB组 88 1 124.58±332.47 625.89±225.51 453.16±177.64 1.55±0.76 LC组 63 564.80±146.14* 334.69±127.92* 194.20±69.56* 2.01±0.92* PHC组 35 454.48±150.50* 275.34±97.37* 156.86±79.04* 2.02±0.68*对照组 35 1208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

表2 HBeAg(+)/(－)患者T细胞亚群绝对细胞数比较(s)

表2 HBeAg(+)/(－)患者T细胞亚群绝对细胞数比较(s)

注:与对照组比较，*P＜0.05，△P＜0.01;与HBeAg(－)组比较，#P＜0.05，▲P＜0.01

组别 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 HBeAg(+)组 139 882.27±235.86△▲ 548.23±175.18*# 325.49±109.14△▲ 1.99±0.78△# HBeAg(－)组 89 1 043.21±340.57△ 609.19±203.09 423.69±149.32△ 1.64±0.71*对照组 35 1 208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

表3 HBV-DNA(+)/(－)患者T细胞亚群绝对细胞数比较(s)

表3 HBV-DNA(+)/(－)患者T细胞亚群绝对细胞数比较(s)

注:与对照组比较，*P＜0.05，△P＜0.01;与HBV-DNA(－)组比较，▲P＜0.01

组别 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 HBV-DNA(+)组 156 930.03±253.41△▲ 545.41±117.71* 390.54±147.23△▲ 1.88±0.81△HBV-DNA(－)组 72 1 089.37±301.59 589.23±201.19 461.87±198.89 1.74±0.59△对照组 35 1 208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

表4 YMDD变异组与野生组T细胞亚群绝对细胞数与正常对照组的比较(s)

表4 YMDD变异组与野生组T细胞亚群绝对细胞数与正常对照组的比较(s)

注:与对照组比较，*P＜0.05，△P＜0.01;与YMDD野生组比较，▲P＜0.01

组别 n CD+3(cells/μL) CD+4(cells/μL) CD+8(cells/μL) CD+4/CD+8 YMDD野生组 108 1 071.88±313.13*605.31±187.79 452.27±184.41 1.54±0.71 YVDD变异组 15 746.83±204.41△▲ 401.24±145.59△▲ 285.17±93.21△▲ 1.79±0.85＊▲YIDD变异组 33 703.28±201.19△▲ 427.34±163.39△▲ 261.65±101.37△▲ 1.85±0.93＊▲对照组 35 1 208.52±199.97 645.40±132.64 514.96±111.22 1.30±0.34

3 讨论

乙肝的发病机制十分复杂，目前认为宿主免疫系统功能紊乱是其病理损伤的主要机制或主要原因。其中大量证据表明，在HBV的清除和发病机制中，细胞免疫起着重要作用，细胞免疫机制是乙肝感染的发病机制之一［2］，而T淋巴细胞是人体主要的免疫细胞，是免疫系统发挥功能的重要组成部分。因此保证T淋巴细胞的正常免疫生理功能及各亚群间的数、质相对稳定是非常重要的。

本研究结果还表明HBeAg(+)感染组和HBVDNA(+)复制组T细胞亚群数量显著下降，说明体内病毒水平越高，T细胞数量越低。原因可能是由于HBeAg(+)感染者和HBV-DNA(+)复制者体内病毒复制活跃，破坏了外周血单个核细胞，其中对T细胞破坏较多，引起细胞免疫功能降低，不能清除病毒，使病毒在慢性肝炎患者体内持续存在［6］。另外由于近年来抗HBV药物的应用，许多患者出现了耐药性，最为常见的即发生YMDD变异。本研究显示发生YMDD变异的乙肝患者的T细胞亚群数明显低于未发生变异的患者。在机体的免疫应答中，T细胞对多肽的识别主要集中在一个残基，它是T细胞反应的关键，仅仅单个氨基酸的改变，便可以影响抗原与HLA-I类分子的结合力，或改变T细胞受体(TCR)的识别效率。变异的HBV可能通过各种途径改变机体的免疫应答，引起HBV的持续感染或肝细胞损伤，甚至肝衰竭［7］。因此同时监测HBV变异情况及机体免疫状况，有助于了解二者之间的关系。比值是反映机体细胞免疫状态的重要指标，它可以一定程度反映机体细胞免疫调节功能，比值失衡可以导致细胞免疫系统紊乱及一系列免疫病理改变［8］。本研究结果显示各组比值都高于正常对照组，说明患者体内出现了不同程度的细胞免疫功能紊乱。

总之，T细胞亚群数量的改变可大致反应出肝病患者的免疫状态，AHB、CHB、LC及PHC发病机制各不相同，但或多或少存在着一定的内在联系。通过测定T细胞亚群数量，一方面我们可以了解到患者机体的细胞免疫状态，以便于实施有效的治疗;另一方面还可以监测肝炎患者是否有发生肝硬变甚至癌变的趋势。因此在乙肝患者中通过应用适当方法提高机体细胞免疫功能和应答，重建有效的T细胞免疫，有可能阻止或延缓乙肝的慢性化及病情的进展，为进一步探讨HBV感染者细胞免疫状态与免疫损伤之间的确切关系提供一定的实验依据。

［1］中华医学会肝病学分会、感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南［J］.中华肝脏病杂志，2005，13(12):881-891.

［2］Zhang SJ，Chen ZX，Lao SX，et al.Effect of Hejie decoction on T cell immune state of chronic hepatitis B patients［J］.World J Gastroenterol，2004，10(10):1436-1439.

［3］翁彭剑，应豪，洪玲珍，等.慢性乙型肝炎患者淋巴细胞及其表型与病情的关［J］.中华肝脏病杂志，2008，16(9): 654-656.

［4］范振平，张玲霞，杨斌，等.乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的特点和意义［J］.世界华人消化杂志，2005，13(2):194-197.

［5］You J，Sriplung H，Geater A，et al.Hepatitis B virus DNA is more powerful than HBeAg in predicting peripheral T-lymphocyte subpopulations in chronic HBV-infected individuals with normal liver function tests［J］.World J Gastroenterol，2008，14(23):3710-3718.

［6］You J，Sriplung H，Geater A，et al.Effect of viral load on T-lymphocyte failure in patients with chronic hepatitis B［J］.World J Gastroenterol，2008，14(7):1112-1119.

［7］You J，Zhuang L，Zhang YF，et al.Peripheral T-lymphocyte subpopulations in different clinical stages of chronic HBV infection correlate with HBV load［J］.World J Gastroenterol，2009，15(27): 3382-3393.

［8］Miyaaki H，Zhou H，Ichikawa T，et al.Study of liver-targeted regulatory T cells in hepatitis B and C virus in chronically infected patients［J］.Liver Int，2009，29(5):702-707.