加替沙星眼用凝胶剂的制备与质量控制

翟学娜，刘 青，王姿婧，房志仲

（1.天津市眼科医院药剂科，天津医科大学眼科临床学院药剂科，天津300020；2.天津医科大学药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室，天津300070）

加替沙星（gatifloxacin）是第四代氟喹诺酮类药物，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐青霉素肺炎链球菌显示了很强的抗菌效能，并对厌氧菌、支原体、衣原体、分枝杆菌均有一定的抗菌作用，所以受到国内外的广泛关注[1-2]。加替沙星在眼科领域的应用研究已取得广泛进展。0.3%加替沙星滴眼液继2004年3月获FDA批准后，又于同年7月在日本获准上市，商品名ZYMAR。ZYMAR是第一种进入市场，用于治疗眼部感染的第四代氟喹诺酮类药物，主要用于敏感菌株引起的细菌性结膜炎[3]。普通眼用药物在眼中滞留时间短，由于眼睑的眨动和泪液的分泌，只有1%～10%的药物可透过角膜[4]，生物利用度低。卡波姆制成的眼用凝胶剂可延长药物在角膜的滞留时间，从而增加药物吸收并延长作用时间。用卡波姆940制成的硝酸毛果芸香碱缓释滴眼剂，缩瞳持续时间较其它滴眼剂长2～3倍，且延长时间随卡波姆浓度的增加而增加，卡波姆974与眼的接触时间有浓度依赖性，浓度为2%的卡波姆凝胶与眼的接触时间约为2～2.5h，接触时间与凝胶弹性呈良好相关性[5]。为此，我们根据设计并制备了加替沙星眼用凝胶剂，按照《中国药典》二部（2010）版附录中关于滴眼剂的要求制定了质量标准[6]，为申报医院制剂提供实用依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器 高效液相色谱仪（美国 Spectraphysics）；输液泵SP8810；Spectra Focus紫外检测器；柱温箱（CBL Model 100）；Anastar色谱工作站；电子分析天平（BP211D，德国Sartorius）；超声波清洗器（7KQ-100B型，昆山市超声仪器有限公司）。渗透压测定仪（SMC30，天津医药仪器有限公司）；黏度计（NDS-8S型，上海天平仪器厂）；电动搅拌器（WH-S型，天津市威华仪器设备有限公司）；pH计（雷磁pHs-25型，上海精密科学仪器有限公司）。

1.1.2 试剂 加替沙星对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130518-200402，规格：供含量测定用）；盐酸加替沙星注射液（浙江弘盛药业有限公司，规格：0.2g/10mL，批号：090315）；卡波姆974P（路博润，批号：0100772788）；甲醇（色谱纯，天津市彪奇科技发展有限公司），其它试剂均为市售分析纯，重蒸水自制。

1.2 方法

1.2.1 加替沙星滴眼用凝胶剂的制备

1.2.1.1 处方：加替沙星3g（相当于注射剂15支）；卡波姆974P 5g；氯化钠8.5g；5%尼泊金乙酯醇溶液10mL；重蒸水加至1000mL。

1.2.1.2 制备：称取卡波姆974P粉末5.0g，加入盛有500mL重蒸水的烧杯中，使其充分溶胀（冰箱中冷藏过夜）后，取出，加热至室温，边加热边搅拌1h（200r/min）。将加替沙星注射液用少量重蒸水稀释，用少量重蒸水溶解氯化钠，加至卡波姆974P溶液中，快速搅拌中加入尼泊金乙酯醇溶液 (必要时加热)，混匀，以0.1mol/L的氢氧化钠溶液调pH至6.0～7.0，混匀，抽滤，经滤器加重蒸水至全量，分装，以100℃流通蒸汽灭菌30min，即得。

1.2.2 加替沙星滴眼用凝胶剂的含量测定[7-9]

1.2.2.1 色谱条件：色谱柱：TIANHE®C18柱（200× 4.6mm，5μm）；流动相：三乙胺磷酸溶液[三乙胺溶液(1→100)，用磷酸调节pH至4.5]-乙腈(87:13)；检测波长：325nm；柱温：40℃；流速：0.8mL/min；灵敏度：0.01AUFS；进样量：20μL。理论塔板数按加替沙星峰计算，不低于2500。

1.2.2.2 溶液的制备：（1）对照品溶液的制备：取加替沙星对照品约30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，即得0.3mg/mL对照品溶液，备用。（2）供试品溶液的制备：取加替沙星眼用凝胶剂1支，精密量取2.0mL，置10mL量瓶中，以流动相定容至10mL，即得供试品溶液。（3）阴性对照溶液的制备：按处方比例配成不含加替沙星的眼用凝胶剂阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。分别精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪中。

1.2.2.3 线性关系考察：分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，进样测定，记录色谱图。以加替沙星峰面积（Y）为纵坐标，溶液浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.2.4 精密度试验：按照“1.2.2.1项下”精密吸取同一供试品溶液重复进样6次，测定峰面积。

1.2.2.5 稳定性试验：精确称取样品，按供试品溶液制备方法操作，在“1.2.2.1项下”色谱条件下，分别在0、4、8、12和24h内注入高效液相色谱仪，测定峰面积。

1.2.2.6 重复性试验：分别量取供试品溶液6份，按“1.2.2.2（2）项下”操作，在“1.2.2.1项下”色谱条件下，各取20μL进样，测定峰面积。

1.2.2.7 加样回收率实验：精密量取供试品1mL，分别在供试品中精密加入相当于加替沙星含量的80%、100%和120%的加替沙星对照品溶液0.8、1.0、1.2mL各3份，用流动相稀释至刻度，作为加样回收率实验的供试品溶液。各取20μL进样，进样测定，记录色谱图，以外标法计算加替沙星的回收率。

1.2.2.8 样品测定：取本品3批，按供试品溶液的制备方法，按“1.2.2.1项下”色谱条件进样，分别测定加替沙星的含量。

1.2.2.9 加替沙星眼用凝胶剂质量检查：取各批次样品，按照《中国药典》（二部）2010年版滴眼剂附录项下[6]要求检查其外观性状、pH值、黏度和含量。

1.2.2.10 样品稳定性考察：取各批次样品，进行6个月的加速试验（温度40℃，相对湿度75%）和12个月的长期试验（温度25℃，相对湿度60%），记录其外观性状的变换，同时测定pH值、黏度和含量等评价指标。

2 结果

2.1 HPLC测定结果 由图1和图2可见，加替沙星的保留时间约为13min，理论塔板数按加替沙星峰计算为3845；加替沙星与相邻杂质峰的分离度为5.56。因此，在所制订的质量标准中要求理论塔板数按加替沙星峰计算应大于2500，加替沙星峰与相邻杂质峰的分离度大于2.0。图3空白对照溶液色谱图中与对照品相同保留时间处无干扰，除溶剂峰外，未见其他色谱峰，表明辅料不干扰样品测定。

2.2 线性关系考察 结果表明，加替沙星浓度在15～180μg/mL范围内线性关系良好。以加替沙星峰面积（Y）为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。得标准曲线方程：Y=16829536.9C+5703.2，r=0.99989。

2.3 精密度试验 加替沙星峰面积的RSD=0.21%。2.4稳定性试验 供试品溶液中加替沙星峰面积RSD=0.98%，供试品溶液在24h内稳定。

2.5 重复性试验 供试品中加替沙星含量RSD= 0.55%，本试验重复性较好。

图2 加替沙星眼用凝胶剂色谱图Fig 2 Chromatogram of gatifloxacin ophthalmic gel

图3 空白辅料的高效液相色谱图Fig 3Chromatograms of blank

2.6 加样回收率试验 结果见表1。

2.7 样品测定 取本品3批进行测定，加替沙星平均含量为99.78%，RSD=0.21%。

2.8 加替沙星眼用凝胶剂质量检查 取各批次样品，按照《中国药典》2010年版滴眼剂附录项下要求检查其外观性状、pH值、黏度和含量等，结果见表2。

表1 加样回收率试验结果Tab 1 Result of recovery test

表2 加替沙星眼用凝胶剂质量检查Tab 2 Quality control of gatifloxacin ophthalmic gel

2.9 样品稳定性考察 3个批次样品的外观性状、pH值、黏度和含量等均未发生明显变化，符合《中国药典》（二部）2010版滴眼剂项下要求，说明本试验制备的加替沙星眼用凝胶剂质量稳定。

3 讨论

3.1 眼用凝胶剂的特点 卡波姆形成的凝胶在pH 5～11范围内较稳定，当pH＜3或＞12时，黏度为1Pa·s，在pH 6～12时较黏稠，pH为8时黏度增到50Pa·s，因此控制pH值可调节制剂的稳定性和黏度[10]。周勤等[11]根据临床需要，研制了马来酸噻吗洛尔眼用凝胶剂，为增加其黏度、延长药物与眼局部接触时间，加入卡波姆，结果表明，1次/d给药治疗眼高压症的作用与马来酸噻吗洛尔滴眼液2次/d给药作用相同，无刺激性且稳定性好。罗云等[12]研制的依诺沙星眼用即用型凝胶，是以卡波姆为基质的低黏度凝胶，可像传统的滴眼液一样滴入眼内，分剂量准确，但较滴眼液的眼内滞留时间长，生物利用度高。许多眼用药物吸收差，主要由于眼泪使其消除加快，用卡波姆制得的眼用凝胶可延长药物在眼内的滞留时间，增加药物的吸收。宁德俄等[13]用卡波姆940研制了滞留型复方氧氟沙星滴眼液，不但可增稠和延长滞留，且与其它增稠滞留剂相比，卡波姆在高温灭菌过程中稳定，并可保持滴眼剂的黏度不变。汪荣军[14]以卡波姆940制备了左氧氟沙星眼用凝胶，延长了药物作用时间，刺激性小。

3.2 加替沙星眼内的生物学特性 加替沙星滴眼剂具有良好的眼内通透性，毛郴等[15]在兔静脉滴注加替沙星25mg/kg后，泪液、角膜、房水和虹膜睫状体Cmax分别为0.37μg/mL、0.17μg/g、1.56μg/mL和0.70μg/g，达到较高药物浓度。周远大等[16]给兔1次滴注0.3%加替沙星滴眼液50μL后，泪液浓度0.125h时为1115.75μg/mL，t1/2为0.35h；8h后仍达7.75μg/mL；房水、角膜和虹膜-睫状体的峰浓度（μg/mL或μg/g）分别为1.94、16.49和8.57，均显著高于眼感染菌的MIC90。

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