B细胞激活因子与过敏性紫癜相关性研究①

侯佳宜 (山西省中医院检验科，太原030012)

B细胞激活因子与过敏性紫癜相关性研究①

侯佳宜 (山西省中医院检验科，太原030012)

目的:通过分析B细胞激活因子(BAFF)与患者免疫球蛋白在不同类型过敏性紫癜(HSP)中的表达，初步探讨BAFF在过敏性紫癜免疫发病机制中的作用。方法:收集HSP活动期患者，包括皮肤型30例、关节型30例、腹型32例、肾型31例、混合型41例，将健康人40例作为对照组。速率散射比浊法测定免疫球蛋白水平;ELISA方法检测BAFF蛋白含量。结果:IgA仅在混合型HSP中增高，IgG和IgM在各组中并无增高;不同类型HSP活动期患者血清中BAFF表达水平均明显高于对照组;混合型HSP患者血清中BAFF表达水平与同型患者IgA表达水平呈中等程度的相关性。结论:BAFF与HSP发病时的体液免疫增强有关。

过敏性紫癜;B细胞激活因子;免疫球蛋白

过敏性紫癜(Henoch-schonlein purpura，HSP)是一种以侵犯毛细血管为主要病变的变态反应性疾病[1]。发病机制至今仍不明确，近年研究认为免疫机制紊乱是HSP发生和发展的关键，是导致患者系统性血管炎病理改变的始发因素。TNF家族的B细胞激活因子(B cell-activating factor belong to the TNF family，BAFF)是1999年发现的肿瘤坏死因子(TNF)超家族新成员，又称为B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator，Blys)，在体内 BAFF 有膜结合型和可溶性两种活性形式。可溶性的BAFF大量存在于外周血及淋巴组织细胞的培养上清中，主要由嗜中性粒细胞和巨噬细胞分泌。BAFF是B淋巴细胞生长、发育和分化中重要的免疫调控因子，主要通过诱导B细胞增殖、分化和分泌免疫球蛋白，增强体液免疫应答[2]。目前研究表明，BAFF过度表达刺激B淋巴细胞产生大量抗体是自身免疫性疾病的主要发病机制[3]，但关于BAFF在HSP发病机制中的意义报道甚少。为了研究BAFF在HSP患者体液免疫功能紊乱的关系，本实验采用速率散射比浊法与酶联免疫吸附试验(ELISA)测定过敏性紫癜患者外周血清中免疫球蛋白和BAFF的表达水平，初步探究HSP的免疫学发病机制。

1 材料与方法

1.1 研究对象 根据美国风湿协会的诊断分类标准，收集我院2010年4月至2010年12月住院或门诊HSP患者，包括皮肤型30例、关节型30例、腹型32例、肾型31例、混合型41例，均为初诊活动期，并将正常健康人40例作为对照组。

1.2 主要试剂与仪器 人B淋巴细胞刺激因子ELISA检测试剂盒(武汉博士德公司)、免疫球蛋白IgG、IgA、IgM 检测试剂盒(美国 Beckman公司)、

M

ultiskanⅢ自动酶标检测仪(Labsystems公司)、Well wash MK2自动洗板机(Labsystems公司)、全自动特定蛋白仪(美国Beckman公司)。

1.3 速率散射比浊法测定HSP免疫球蛋白 将标本3 000 r/min离心10分钟，分离血清。免疫球蛋白IgG、IgA、IgM检测试剂盒内含有稀释液、缓冲液、抗血清等，按说明书配制，根据全自动特定蛋白仪程序要求进行样品测定。

1.4 ELISA方法检测 BAFF蛋白含量 将标本3 000 r/min离心10分钟，分离血清。酶标孔加样品和标准品100 μl，37℃温育90分钟，不洗;加生物素标记的 BAFF抗体 100 μl，37℃温育 60分钟，0.01 mol/L TBS洗涤3次;加亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)100 μl 37℃ 温育 30 分钟，0.01 mol/L TBS洗涤5次;每孔加入TMB显色液90 μl，37℃避光反应20分钟，加终止液，在450 nm波长处测定各孔的OD值;在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样品浓度值。

1.5 统计学处理 数据采用SPSS11.0统计软件进行统计分析。用±s表示结果，两组间比较以t检验进行分析，相关分析采用Spearman直线回归分析法，求相关系数(r)，并作显著性检验。

2 结果

2.1 HSP患者血清中免疫球蛋白表达水平 不同类型HSP活动期患者血清中免疫球蛋白的比较见表1。IgA仅在混合型HSP中增高，与对照组相比较，有统计学意义(P＜0.05);而IgG和IgM在各组中与对照组相比较无统计学意义。

2.2 HSP患者血清中BAFF表达水平以及与免疫球蛋白表达水平相关性分析 不同类型HSP活动期患者血清中BAFF表达水平均明显高于对照组(374.65 ±16.23)pg/ml，且各型之间未见显著性差异(图1)。混合型HSP患者血清中BAFF表达水平(8 130±574.99)pg/ml与同型患者IgA表达水平呈中等程度的相关性(r=0.681，P ＜0.05，图2)。

表1 不同类型HSP活动期患者免疫球蛋白的比较(x ± s，g/L)Tab.1 The level of immunoglobulin in the different subtypes of HSP and control(±s，g/L)

表1 不同类型HSP活动期患者免疫球蛋白的比较(x ± s，g/L)Tab.1 The level of immunoglobulin in the different subtypes of HSP and control(±s，g/L)

Note:Compared with control group，1)P ＜0.05.

Groups n IgA IgG IgM Skin group 30 1.53 ±0.34 10.42 ±1.66 1.68 ±0.43 Joint group 30 2.13 ±0.43 11.79 ±2.41 1.38 ±0.62 Abdomen group 32 2.28 ±0.48 12.47 ±3.39 1.65 ±0.84 Kidney group 31 1.88 ±0.54 12.19 ±3.45 1.69 ±0.68 Mixed group 41 3.71 ±0.881) 11.51 ±4.33 1.67 ±0.65 Control group 40 1.45 ±0.61 12.90 ±1.71 1.43 ±0.32

3 讨论

HSP的发病机制至今仍不明确，涉及体液免疫和细胞免疫功能的紊乱，同时有凝血机制的参与，遗传因素的作用也日渐引起人们的重视[4，5]。国内外学者发现，HSP患儿体内有大量的IgA免疫复合物，沉积于全身组织、器官的小血管壁，通过激活补体和激发炎症细胞活性导致相应组织、器官的炎性损伤[6]。本研究结果表明，混合型HSP中IgA增高，与国外研究结果一致。其他类型IgA不增高的现象，推测是因为大量的IgA形成免疫复合物沉积于血管壁，而导致外周循环中的IgA不见增高。此外，对HSP病人血清中IgG、IgM的研究并无一致结论，有人认为HSP发病时IgG水平升高，与肾脏系膜细胞抗原结合会导致紫癜性肾炎的病理性改变[7]，然而本研究并未发现各组HSP患者IgG和IgM水平的增高。

图1 不同类型HSP活动期患者血清BAFF的比较Fig.1 The level of serum BAFF in the different subtypes of HSP and control

图2 混合型HSP患者血清中BAFF与同型免疫球蛋白表达水平相关性分析Fig.2 The correlation between serum BAFF and IgA in mixed group

BAFF信号的正常表达与体液免疫应答的平衡密切相关。BAFF具有明显的B细胞趋向性，通过与后者的特异性结合，不仅调节B细胞的数量，而且在其分化、发育及存活方面发挥重要的调控作用[8]。对于休眠 B细胞，BAFF通过诱导 NF-κB 的活性，促使其分化，进而上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，延长B细胞的寿命[9]。而有报道证实，BAFF与其相应受体BCMA结合后，活化长寿命浆细胞并增加免疫球蛋白的分泌[10]。BAFF诱发疾病的原因可能是BAFF含量高低影响到B细胞的存活信号以及产生自身抗体的B细胞选择性凋亡。国内外学者已经证实，BAFF在体内的病理性表达与多种自身免疫性疾病有关，自身免疫性疾病的特征是B细胞耐受丧失，体内产生大量针对自身组织成分的抗体。如SLE患者血清BAFF水平较正常人明显升高，高浓度的BAFF诱导抗DNA抗体高表达，并能促进抗双链DNA的B细胞成熟[11-13]。研究也发现RA患者血清中BAFF表达量增加，并且病情严重的RA患者，滑液中检测到高浓度BAFF及其受体BAFFR[14]。

BAFF已经成为自身免疫性疾病发病和治疗的关键因素之一，但关于BAFF在HSP发病机制中的意义报道甚少。本研究结果发现，混合型HSP中IgA增高，因此，我们推测产生免疫球蛋白的B细胞功能异常在其发病机制中起着重要的作用。而是何种原因引起了B细胞异常生成免疫球蛋白IgA，我们进一步检测了所有患者及对照组中BAFF的表达，发现不同类型HSP活动期患者血清中BAFF表达水平均明显高于对照组，且混合型HSP患者血清中BAFF表达水平与同型患者IgA表达水平呈中等程度的相关，这些结果均进一步提示，B细胞是BAFF重要的作用靶细胞，HSP发病时，BAFF与其受体相互作用可导致体液免疫功能上调，B细胞异常活化，产生多种自身抗体、多克隆的免疫球蛋白，以IgA尤其是IgA1亚类为主，从而形成大量的IgA免疫复合物，导致了HSP的病理性改变。

综上所述，HSP的免疫发病机制十分复杂，本研究发现混合型HSP患者的IgA分泌异常仅是体液免疫功能的部分表现，而BAFF的水平升高与IgA变化相关，提示在HSP这种免疫球蛋白表达异常增加的疾病中，BAFF至少部分参与了HSP的发病，很可能是体液免疫应答亢进的触发因素。而BAFF通过何种途径调节体液免疫以及BAFF在HSP发病时对细胞免疫是否有影响，有待进一步的研究。

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[收稿2012-02-14 修回2012-05-28]
(编辑 张晓舟)

Study on association of BAFF and Henoch-schonlein purpura

HOU Jia-Yi.Clinical Laboratory，Hospital of Traditional Chinese Medicine of Shanxi Province，Taiyuan 030012，China

Objective:To observe the level of BAFF and immunoglobulin in different subtypes of Henoch-schonlein purpura (HSP)，and to explore the role of BAFF in the pathogenesis of HSP.MethodsActive HSP patients were collected，including skin group(n=30)，joint group(n=30)，abdominal group(n=32)，kidney group(n=31)，mixed group(n=41)，40 healthy people were chose as control group.The level of immunoglobulin was examined with Rate Nephelometry and ELISA method was used to detect BAFF.ResultsThe level of IgA was higher in mixed group than in control group，IgG and IgM did not increase in HSP;different subtypes of HSP patients expressed significantly higher level of BAFF in serum than the control group;the expression of serum BAFF moderately associated with the level of IgA in mixed group.ConclusionBAFF was related to enhancement of humoral immunity when HSP was in onset.

Henoch-schonlein purpura;BAFF;Immunoglobulin

R392.8

A

1000-484X(2012)08-0752-03

10.3969/j.issn.1000-484X.2012.08.018

①本文为山西省中医药研究院院级课题基金项目(No.201105)

侯佳宜(1983年-)，女，免疫学硕士，检验技师，主要从事自身免疫疾病发病机制方面的研究，E-mail:youhoujiayi0103@126.com。

·分子与细胞免疫学·