支气管哮喘患儿外周血MIF含量分析

张爱平 宋玉娥 宋冬梅

包头医学院第一附属医院儿科，内蒙古包头 014010

支气管哮喘患儿外周血MIF含量分析

张爱平 宋玉娥 宋冬梅

包头医学院第一附属医院儿科，内蒙古包头 014010

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）在支气管哮喘患儿外周血中的含量及其意义。方法 应用酶联免疫法测定支气管哮喘患儿急性发作期和缓解期以及健康对照组外周血MIF的含量，并对结果进行统计学分析。结果 外周血中MIF的含量：支气管哮喘患儿急性期组明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；支气管哮喘患儿缓解期组明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；支气管哮喘患儿急性期组明显高于缓解期组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论MIF参与了儿童支气管哮喘的发生、发展等病理生理过程，并与其分期相关。

儿童；支气管哮喘；巨噬细胞移动抑制因子；酶联免疫法

近年来相关研究表明支气管哮喘发病率呈逐年上升的趋势，它已经成为一个日趋严重且不可忽视的全球性卫生问题。目前全世界大约有3亿人患支气管哮喘，其中儿童患者就有1.5亿，占全球人口的5%。支气管哮喘作为儿科最常见疾病之一，严重地影响了儿童的生长发育和身心健康，一部分儿童哮喘还可迁延至成人哮喘，对患儿家庭和社会产生巨大的经济负担和精神压力。支气管哮喘为多种炎症细胞（特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞）参与、有多种炎症介质介导的、并与遗传和环境等多种因素相关的慢性气道炎症反应。其发病机制极为复杂，在哮喘复杂的细胞因子网络中，MIF（巨噬细胞移动抑制因子）起着关键作用，MIF是一种高度多变的蛋白质，它既是一种前炎症因子、神经内分泌激素和酶，同时还可以作为糖皮质激素生理活动的负反馈调节剂。本研究通过测定外周血MIF的含量，来探讨其在儿童支气管哮喘发病机制中的可能作用，并评价其反应儿童支气管哮喘气道炎症的严重性以及临床分期的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 病例组 选取100例2009年11月～2011年12月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院儿科门诊及病房治疗的支气管哮喘急性发作期患者作为急性期患者，其中，男56例，女44例，平均年龄（3.7±2.5）岁；选取50例缓解期患者，男 23例，女 27 例，平均年龄（4.27±3.20）岁。

入选标准：符合2008年中华医学会儿科学分会呼吸学组制定的哮喘诊断标准，年龄0～14岁，不伴其他感染性及免疫性疾病。且所有急性期患者近4个月内未使用过激素和免疫调节剂。

1.1.2 正常对照组 对照组30例患者，均为在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院儿科门诊健康体检的儿童。男15例，女15例，平均年龄（3.9±2.4）岁。 体格检查正常，无湿疹、过敏性鼻炎等免疫性疾病史及相关疾病家族史。近1个月无上呼吸道感染性疾病，与病例组间年龄、性别差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 实验方法

1.2.1 标本采集及保存 急性发作期患者、缓解期患者（指导其规律雾化吸入糖皮质激素40 d后）和对照组分别留取空腹静脉血2 mL，1 500 r/min离心10 min，分别提取上层血清，分装至200 μL EP管中，置于-70℃冰箱保存。

1.2.2 测定步骤MIF检测试剂盒购买于美国R&D System公司，采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked imunosorbent assay，ELISA）测定。（1）从冰箱内取出待测样品，平衡至室温。（2）取出试剂盒，室温放置30 min。（3）取出酶标板依次编号，并设空白孔和标准品孔。（4）加样：①空白孔不加样品，生物素标记的抗MIF抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；②标准品孔，加入标准品50 μL，链霉素-HRP 50 μL；③待测样品孔：加入样本 40 μL，然后加入抗-MIF 抗体 10 μL、链霉素-HRP 50 μL，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60 min。（5）配液：将30倍的浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。（6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s后弃去，如此重复5次，拍干。（7）显色：每孔加入显色剂A50 μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色 10 min。 （8）终止：每孔加入终止液 50 μL，终止反应（此时蓝色转为黄色）。 （9）测定：以空白孔调零，450 nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定在加终止液后10 min内进行。

1.3 统计学分析

2 结果

经统计学分析，支气管哮喘患儿急性期与对照组比较，MIF升高， 差异有统计学意义 （F=-1.171 22，P=0.000 8，P<0.05）；支气管哮喘患儿缓解期与对照组比较，MIF升高，差异有统计学意义（F=-0.623 40，P=0.000 2，P<0.05）；支气管哮喘患儿急性期与缓解期比较，MIF升高，差异有统计学意义（F=0.547 82，P=0.000 3，P<0.05），见表1，图 1。

表1 不同时期哮喘组与对照组患者外周血MIF的结果比较（±s，ng/mL）

表1 不同时期哮喘组与对照组患者外周血MIF的结果比较（±s，ng/mL）

组别 例数（n） MIF（OD值）哮喘急性期哮喘缓解期对照组100 50 30 1.753±0.511 1.205±0.630 0.582±0.508

3 讨论

支气管哮喘是一种以血清IgE增高、肺组织嗜酸性粒细胞侵润、黏液高分泌和气道高反应为显著特征的慢性气道变应性炎症性疾病。近年来，国内外研究表明，MIF可通过多种信号转导通路，参与支气管哮喘的发生、发展等病理生理过程。 它的促炎反应活性常和促进 TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IFN-c、黏附因子以及基质金属蛋白酶-2的表达联系在一起。目前大量文献资料证实MIF参与了过敏性气道炎症的病理生理过程。MIF在支气管哮喘中发挥作用的机制与嗜酸性粒细胞、气道上皮细胞、巨噬细胞、淋巴细胞以及IgE密切相关。早在1998年Rossi AG等[1]研究发现正常人外周血中嗜酸性粒细胞中含有MIF前体。随后Yamaguchi E[2]、Magalhates ES等[3]分别从临床和动物水平证实了MIF与支气管哮喘明显相关，且与嗜酸性粒细胞有密切的正相关关系。Kobayash IM等[4]对哮喘大鼠的肺泡灌洗液进行细胞学检查，发现灌洗液中细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞明显高于对照组，并且应用MIF抗体治疗后上述细胞明显下降。还有一部分国外学者研究MIF与IgE的关系，Mizue Y等[5-8]在基因水平对哮喘模型鼠研究发现，MIF与IgE有一定的联系，但也有相反的结果。Magalhaes ES等[3]同样对哮喘模型鼠研究发现，MIF与IgE无明显差别。故对MIF与IgE的关系现在尚无定论。近年来国内学者李延红等[7-8]研究发现哮喘患者血MIF浓度及PBMC中MIFmRNA表达量均明显高于对照组。但关于支气管哮喘患者外周血MIF含量与支气管哮喘病情严重程度的关系，目前国内外尚无研究。

以上研究结果都是以成人哮喘和动物为研究对象，本实验针对0.6～13岁支气管哮喘儿童，测定其外周血中MIF含量，分析正常对照组和支气管哮喘组MIF含量之间的差异，结果显示：支气管哮喘患儿急性期与对照组比较，MIF升高，差异有统计学意义（P﹤0.05）；支气管哮喘患儿缓解期与对照组比较，MIF升高，差异有统计学意义（P﹤0.05）。与李延红等人的研究结果一致。提示MIF在儿童支气管哮喘中也起了重要作用，参与了儿童支气管哮喘的发生、发展等病理生理过程。另外本实验中支气管哮喘患儿急性期与缓解期比较，MIF升高，差异有统计学意义（P﹤0.05）。进而笔者推测外周血中MIF含量与儿童支气管哮喘的分期相关，提示MIF可作为儿童支气管哮喘的辅助诊断以及临床分期的指标之一。但MIF含量与儿童支气管哮喘病情严重程度的关系，有待于进一步扩大样本含量并进一步细化分级研究。

[1]Rossi AG，Haslett C，Hirani N，et al．Human circulating eosinophils secrete maerophage migration inhibitory factor （MIF）．Potential role in asthma[J]．J Clin Invest，1998，101（12）：2869-2874．

[2]Yamaguchi E，Nishihira J，Shimizu T，el al．Macrophage miation inhibitory fnetor（MIF）in bronchial asthma[J]．Clin Exp Allergy，2000，30（9）：1244-1249．

[3]Magalhaes ES，Mourao-sa DS，Vieira-de-Abreu A，et al．Macrophage migration inhibitory factor is essential for allergic asthma but not for Th2 differentiation[J]．Eur JImmunol，2007，37（4）：1097-1106．

[4] Kobayassh IM，Nasuhaya Y，Kamachi A，et al.Role of macrophage migration inhibitory factor in ovalbumin-induced air way inflammation in rats[J].EurRespir J， 2006， 27（4）：726-734.

[5]Mizue Y，Glumi s，Leng L，et al．Role for maerophage migration inhibitory factor in asthma[J]．Proe Nail Aead Sci USA，2005，102（40）：14410-14415．

[6]陈培芬，罗雅玲，赖文岩，等.慢性哮喘小鼠肺组织巨噬细胞移动抑制因子的表达及地塞米松对其的调节[J].广东医学，2009，30（3）：338-341.

[7]李延红，宋卫东，徐平，等.支气管哮喘患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义[J].中华哮喘杂志，2009，3（3）：194-196.

[8]原树云.哮喘患儿血清IL-10、IL-4与IgE水平的检测及意义[J].河南医学研究，2009，18（1）：16-18.

Analysis of serum MIF content levels in children with asthma

ZHANG AipingSONG Yu'eSONG Dongmei
First Affiliated Hospital of Baotou Medical College in Nei Monggol Autonomous Region,Baotou 014010,China

ObjectiveTo investigate the serum levels of MIF in children with asthma and its significance.MethodsMIF expression in peripheral blood of 100 cases of children with asthma(asthma group)and 30 healthy controls(control group)were determined by ELISA.And the result was analyzed statistically.ResultsContent of MIF in the peripheral blood in asthma group was significantly higher than that in control group (P﹤0.05),and MIF of catabatic period was also higher than that of control group，MIF in acute period was significantly higher than catabatic period (P﹤0.05).ConclusionMIF may involve the pathological physiology process of occurrence,development of bronchial asthma,and relates with its stage.

Child;Bronchial asthma;MIF;Enzyme linked immunosorbent assays

R562.2+5

B

1674-4721（2012）07（b）-0112-02

2012-04-18 本文编辑：魏玉坡）