RP-HPLC法测定痹痛宁胶囊中士的宁和马钱子碱的含量

王蕾

江苏省盐城市药品检验所，盐城 224002

痹痛宁胶囊由马钱子粉、全蝎、僵蚕（麸炒）、麻黄、苍术（麸炒）、乳香（制）、没药（制）、川牛膝、刺五加浸膏、甘草、续断等药材组成,具有袪风除湿、消肿定痛之功效。适用于寒湿阴络所致的痹病，症见：筋骨关节疼痛、肿胀、麻木、屈伸不利、遇寒加重者，风湿、类风湿性关节炎、骨质增生、颈椎病、肩周炎、腰椎间盘突出、坐骨神经痛、股骨头坏死、骨质增生等及上述症状引起的关节酸沉、疼痛、肿大、变形、麻木等。痹痛宁胶囊原标准[1]采用薄层扫描法测定士的宁的含量。原方法操作麻烦，笔者参考有关文献[2]建立了反相高效液相色谱法测定痹痛宁胶囊中士的宁和马钱子碱的含量，经方法学考察，表明方法可行。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪（Agilent科技有限公司）；BP211D电子天平（德国赛多利斯公司）。

马钱子碱对照品（110706-200404）、士的宁对照品（110705-200306）为中国药品生物制品检定所提供；痹痛宁胶囊 （规格：0.2 g/粒，批号：110106、110123、110301，贵州恒霸药业有限责任公司）；甲醇、乙腈为色谱纯；其余为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品混合溶液 精密称取士的宁对照品20.97 mg、马钱子碱对照品9.52 mg，置100 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀释制成浓度分别为0.2097和0.0952 mg·mL-1的混合溶液。

2.1.2 供试品溶液 取痹痛宁10粒，精密称定，混匀，称取0.5 g，加浓氨水1 mL湿润，加氯仿30 mL，摇匀，静置24 h，超声处理30 min提取，过滤，滤渣用氯仿5 mL×3洗涤，合并滤液和洗液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即为供试品溶液。

2.1.3 阴性对照溶液 按照痹痛宁胶囊的制备工艺制备不含马钱子粉的样品，并按“2.1.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.2 色谱条件

色谱柱：CAPCELL C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：水-乙腈（80∶20）（含三乙胺0.01 mol· L-1，用磷酸调pH至2.6±0.1）；检测波长为260 nm；柱温为25℃；进样量为20 μL。

2.3 系统适用性与专属性试验

在上述色谱条件下，分别取对照品混合溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按士的宁峰计算，不低于2000，而辅料无干扰。见图1。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品混合溶液1、2、4、8、10、15 μL注入液相色谱仪。以浓度（μg）为横坐标，峰面积（X）为纵坐标，绘制标准曲线，得士的宁和马钱子碱的回归方程，分别为 Y=3.765×104X+9.198×103，r= 0.9996和Y=4.289×104X+1.062×104，r=0.9994。结果表明，士的宁和马钱子碱浓度分别在0.2097～3.1455 μg·mL-1和0.0952～1.4280 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

图1 对照品（A)、样品（B)、阴性对照（C)色谱图

精密吸取“2.1.1”项下的对照品混合溶液20μL，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积，峰面积的RSD分别为士的宁0.8%、马钱子碱1.0%。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、1、2、4、8、12 h，在上述色谱条件下进行分析，士的宁和马钱子碱色谱峰面积的RSD（n=6）分别为1.3%和1.0%。结果表明士的宁和马钱子碱供试液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验

精密称取同一批号的痹痛宁胶囊粉末6份各0.5 g，按“2.1.2”项下方法操作，在上述色谱条件下进行测定，结果士的宁和马钱子碱的含量平均值（n=6）分别为0.81 mg/粒和0.40 mg/粒，RSD分别为1.1%、1.0%。

2.8 加样回收率试验

精密称取己知含量的痹痛宁胶囊3份,每份0.25g，分别加入按“2.1.1”项下方法制备的对照品混合溶液1.0、5.0、10.0 mL，再按上述方法提取，制备供试品溶液，每个浓度测定3份，计算平均回收率。结果样品中士的宁和马钱子碱的平均回收率分别为99.2%、99.3%；RSD分别为0.6%、0.9%。

2.9 样品含量测定

取3批样品，按“2.1.2”项下方法操作，制备供试品溶液各3份，按上述色谱条件测定，外标法计算士的宁和马钱子碱的含量。结果见表1。

表1 含量测定结果（n=3）

3 讨 论

3.1 马钱子以粉末入药，故将样品用氨水湿润后，用氯仿静置过夜，再进行超声处理，将所含生物碱提取出来，再用硫酸溶液使其以盐的形式溶于水中，除去大量脂溶性的杂质，将酸性液碱化后，用氯仿提取，所得供试品色谱图中所含杂质较少。

3.2 测定波长的选择

对士的宁、马钱子碱以流动相制备的对照品溶液在λ200～300 nm范围内做紫外扫描，士的宁和马钱子碱的最大吸收分别为λ254 nm和λ265 nm，故选择λ260 nm为合适的检测波长。

[1] 国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].YBZ11142005.

[2] 张凌云.RP-HPLC法测定伸筋丹胶囊中士的宁和马钱子碱的含量[J].江苏药学与临床研究，2004，12（3）：32.