正交试验优选芩莲口服液中黄芩苷的提取工艺

唐 亮，宿 威，刘皈阳，马建丽，周 亮

芩莲口服液主要由黄芩、穿心莲等12味中药组成，具有清热解毒、散结利咽的作用，主要用于治疗急慢性咽炎，作为协定处方在医院使用多年，疗效确切。为了便于临床应用，确保临床治疗效果，笔者综合考虑其有效成分的性质，以处方中君药黄芩的有效成分—黄芩苷作为评价指标，应用正交试验优选出合理的提取工艺。

1 仪器与试药

1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司); AE200型电子天平(瑞士Mettler公司);药材(购于北京市鹤延龄中药饮片有限公司，经鉴定符合药典规定);黄芩苷标准品(中国药品生物制品检定所，批号:715-200111);乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 芩莲口服液提取工艺

2.1.1 正交设计表 根据预试验，选择影响提取的主要因素:加水量、浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数作为考察对象，选用 L9(34)正交表进行设计［1-2］。并以黄芩苷含量为评价指标，优选最佳提取工艺。结果见表1。

表1 因素水平表

2.1.2 样品提取方法 按处方量称取药材，分别加入不同体积的纯净水，在98℃下提取不同的时间和次数后，过滤，将滤液减压浓缩至一定体积，放置过夜、抽滤即得。

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse XDBC18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(45∶55);流速:1.0 mL/min;检测波长:277 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL。在此条件下，黄芩苷与样品中其他色谱峰分离良好，保留时间约为7 min，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于4 000。

2.2.2 对照品溶液的配制 精密称取在60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品10.64 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度。

2.2.3 供试品溶液的制备 取处方量药材，按传统工艺(水煮2次，分别为60 min、40 min)制成口服液。精密量取本品1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.4 标准曲线的绘制 分别精密吸取黄芩苷对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录黄芩苷峰面积。以黄芩苷浓度(X)为横坐标，对应的峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程:Y =33.06 X-0.782 0，相关系数r=0.999 9。结果表明，在1.064～53.20 μg/mL范围内，黄芩苷含量与峰面积呈良好线性关系。

2.2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，于室温下放置，在不同时间段(0、2、4、8、16、24 h)按上述色谱条件进样测定。结果RSD为1.78%，表明供试品溶液在24 h稳定性良好。

2.2.6 精密度试验 精密吸取供试品溶液，按上述色谱测定条件，重复进样5次，记录峰面积，其相对标准偏差RSD为0.32%，结果表明，仪器精密度良好。

2.2.7 重复性试验 取同一供试品溶液，按照“2.2.2”项下方法提取6份供试品溶液，测定并计算。结果RSD为1.96%，表明方法重现性良好。2.2.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的同一供试品溶液共6份，加入适量黄芩苷标准品溶液，按“2.1.2”项下方法提取供试品溶液，平均回收率为98.12%，RSD为2.35%(n=6)，表明方法的回收率良好。

2.2.9 样品含量测定 按“2.1.2”项下方法提取，精密量取各种提取工艺的芩莲口服液，测定其黄芩苷含量，结果见表2。同时进行方差分析，结果见表3。

表2 正交试验设计与结果

表3 黄芩苷含量方差分析结果

由表3可知，影响水提效果的主要因素是煎煮时间，其次是煎煮次数和浸泡时间，加水量影响最小，因此，将其作为误差估计，用以检验其他因素作用的显著性。芩莲口服液的水提工艺条件以A2B3C3D2为佳，即料液比为1∶8，浸泡2 h，煎煮2次，每次煎煮2 h。

2.3 优选工艺的验证试验 按优选的工艺进行验证试验，测得黄芩苷的含量分别为 67.15、66.28、67.93 μg/mL，测得值与正交表中的试验结果较为一致，认为验证结果较为满意，表明该工艺稳定可行。因此，确认芩莲口服液的最佳工艺条件:料液比为1∶8，浸泡2 h，煎煮2次，每次2 h。

3 讨论

从方差分析的F值大小，可以看出影响黄芩苷含量的因素从主到次的排序为提取时间(C)、提取次数(D)、浸泡时间(B)、加水量(A)。同时，通过比较极差的大小，可以确定最佳工艺条件是A2B3C3D2。本方法试验结果可为制定芩莲口服液提取工艺提供可靠依据。

芩莲口服液原浸泡1 h，密闭煎煮30 min，过滤、分装、即得。笔者利用正交设计对原有工艺进行优选，确定了最佳工艺，即以水为溶媒进行煎煮，加8倍药材量的水，浸泡时间2 h，煎煮2次，每次2 h，最佳工艺在验证试验中得到较好的验证，优选了工艺，提高了制剂质量，达到预期目的。

［1］ 杨芳，刘高峰，甄立棉.正交实验法优选乌梅透骨口服液提取工艺［J］.医药导报，2010，29(4):508-510.

［2］ 侯林中，张熙洁，王玉，等.正交试验优选宽心口服液醇沉工艺［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(2):32-34.