甲型H1N1流感疫苗血清抗体消长研究＊

郑奎城，沈晓娜，杨式芹，周朝晖，谢剑锋，陈 炜，翁育伟，严延生

甲型H1N1流感为新发呼吸道传染病，传染性强，人群普遍易感。接种甲型H1N1流感疫苗是控制其流行的经济、科学的有效方法之一［1］。WHO建议在人群中大规模开展疫苗接种，以形成免疫屏障，降低其大流行的可能性［2］。2009年10月我国在世界上率先成功研制甲型H1N1流感疫苗，并在全国范围进行大规模人群接种。事实证明，国产甲型H1N1流感疫苗具有较高的安全性和较好的免疫原性，适合在健康人群中普遍接种［3－5］。然而，对于人体在接种甲型H1N1流感疫苗后产生的抗体的持久性、消长规律尚无充分的实验证据。为此，本研究对接种甲型H1N1流感疫苗的对象在接种后1年内不同时间段的血清抗体进行测定，以探索其变化规律，为制定甲型H1N1流感免疫策略提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 研究对象 调查对象为来自福建省九个设区市，均未罹患甲型H1N1流感，但在2009年11月之后首次接受甲型H1N1流感疫苗接种的自然人群，共128名，其中男性85名，女性43名。对象年龄按≤17岁、18～55岁、≥56岁分组，分别有49名、40名和39名。

1．2 血清采集及抗体检测方法 分别于接种甲型H1N1流感疫苗后的第3个月、第6个月、第9个月、第12个月采集各调查对象的静脉血，血清分离后置－80℃保存，由福建省疾病预防控制中心采用血凝抑制试验方法 （HI）检测血清甲型H1N1流感HI抗体。以霍乱菌液和鸡血球分别去除血清中非特异抑制素和非特异凝集素，采用微量半加敏红细胞凝集抑制试验进行血清抗体测定，以能完全抑制鸡血球凝集的血清最高稀释度倍数的倒数为HI效价。结果判定以HI滴度≥1∶10为起点，以HI滴度≥1∶40为阳性抗体水平。若HI＜1∶10，则计算为1∶5。HI滴度的最高检测上限为1∶5 120。

1．3 试剂 甲型H1N1流感病毒抗原源自其代表株 A／California／07／2009（H1N1）。病毒抗原及霍乱菌液均由中国疾病预防控制中心国家流感中心提供。

1．4 数据分析 用Microsoft Excel建立数据库，以SPSS 11．5分析软件进行数据统计分析。

2 结 果

2．1 接种疫苗后血清HI抗体水平变化 如表1所示，128名调查对象在接种疫苗后的第3个月HI抗体阳性率为61．7%，抗体几何平均滴度（GMT）为40；在第6个月则分别为47．7%和28．4；在第9个月为40．9% 和24．5，在第12个月为35．43% 和23．6，在不同时间段，HI抗体阳性率和GMT的差异均有显著统计学意义（P＜0．01）。进一步以性别分层分析发现，无论男性或女性，在第3、6、9和12个月，抗体阳性率和GMT的差异均有统计学意义（P＜0．05）。对男女性进行比较发现，在第3个月，女性的抗体阳性率和GMT均高于男性（P＜0．05），而在其余时间段与男性相当。

按≤17岁、18～55岁、≥56岁分组分析发现，各个年龄组的血清抗体阳性率在不同的时间段之间差异均无统计学意义，而抗体GMT的差异则有显著统计学意义（P＜0．01）。在同一时间段，不同年龄组的抗体阳性率和GMT差异均无统计学意义（表2）。

表1 调查对象在接种疫苗后各时间段的血清HI抗体水平Tab．1 Levels of serum HI antibody in recipients at different time after vaccination

表2 各年龄组在接种疫苗后各时间段的血清HI抗体水平Tab．2 Levels of serum HI antibody in different age groups and different time after vaccination

2．2 血清HI抗体阳性者在不同时间段抗体水平变化 如表3所示，全体128名对象在接种疫苗后的第3个月，血清HI抗体呈阳性的有79名，其GMT为104．09。这79名抗体阳性者在第6、9和12个月，抗体阳性率和GMT则分别降低为75．95%和 58．33；64．56% 和 45．23；54．43% 和41．82，差异均有显著统计学意义（P＜0．01）。以性别分层分析显示，无论男女性，在不同时间段，抗体阳性率和GMT均有显著差异（P＜0．01），而在同一时间段，男女性之间的差异则无统计学意义。

79名抗体阳性者若按≤17岁、18～55岁、≥56岁分组，在接种疫苗的第3个月，各年龄组的抗体GMT分别为149．62、92．43、73．36，差异有统计学意义（P＜0．05），但在第6、9和12个月，抗体阳性率和GMT则无显著差异。各个年龄组的血清抗体阳性率、GMT在第6、9和12个月均显著降低，差异均有统计学意义（P＜0．01）（表4）。

表3 HI抗体阳性者在接种疫苗后不同时间段抗体水平Tab．3 Levels of serum HI antibody in the subjects with positive antibody at different time after vaccination

3 讨 论

其他研究者已证明，国产甲型H1N1流感疫苗接种后免疫学保护效果良好，抗体阳性保护率及阳转率均达到欧盟药品评价局（EMEA）和美国FDA的标准［6－7］。本研究结果显示，在接种甲型 H1N1流感疫苗后的第3个月血清HI抗体阳性率为61．7%，GMT为40。而据陈恩富等报道，在接种疫苗后的第1个月，抗体阳转率达72．54%，GMT增加9．9倍［4］。李华东则报道在接种疫苗后的第1个月，抗体阳转率达81．42%［8］。由于本研究未采集疫苗接种前及接种后3～4w的血清样本，所以无法准确判断同时期抗体阳转率和GMT增加的倍数。另外，本研究对象的年龄构成以及接种后采血的时间与上述研究都不同，所以可能导致抗体阳性率及GMT不一致，但我们的结果同样说明了国产疫苗的良好免疫效果。

表4 HI抗体阳性者各年龄组在接种疫苗后不同时间段抗体水平Tab．4 Levels of serum HI antibody in different age groups with positive antibody at different time after vaccination

本研究显示，在接种疫苗后第6个月HI抗体阳性率和GMT分别为47．7%和28．4，在第9个月为40．9% 和24．5，在第12个月为35．43% 和23．6，呈现逐渐下降的趋势，而且有显著统计学意义。按男女性别分层分析，也证实了相同的趋势；按年龄组分层分析，不同年龄组的抗体GMT也随着时间的推移呈现显著下降。虽然不同年龄组的抗体阳性率在不同时间段无统计学显著差异，但也显示了随时间而下降的倾向。

对接种疫苗3个月后抗体呈阳性的79名对象的分析表明，在接种疫苗后的第6个月，抗体阳性率比第3个月下降近25% （100%vs 75．95%），GMT减少近一半（104．09vs 58．33）；在第9个月，抗体阳性率和GMT分别下降近35% （100%vs 64．56%）和58% （104．09vs 45．23）；在第12个月，抗体阳性率则下降近一半（100%vs 54．43%），GMT下降近59% （104．09vs 41．82）。以性别和年龄组进一步分层分析也显示，无论在不同性别或年龄组，HI抗体水平均显著快速下降。这些结果说明在抗体阳性者中，HI抗体水平呈现快速下降的趋势。另外，以年龄组分层分析也显示，在接种后的第3个月，≥56岁组的抗体GMT水平显著低于其他两个年龄组，可能与高年龄组的机体免疫功能较其他年龄组低有关，这个结果与其他研究报告相似［5］。

在接种疫苗后第3个月，女性的抗体阳性率和GMT均显著高于男性，而在其余时间段与男性相当。由于本研究的男女性对象在人数与年龄并未完全匹配，可能导致抗体结果的差异。在今后的研究中，除了有必要进一步分析疫苗接种3～4w后的抗体阳转情况之外，还必须对不同性别进行匹配。

我们的研究首次揭示，尽管甲型H1N1流感疫苗具有良好的免疫效果，但其免疫力并不持久。人群大规模接种建立起的免疫屏障并不长久牢固，因此，当再次发生甲型H1N1流感的大流行时，依然有必要对上一轮流行周期已接种过疫苗的人群进行再次接种，特别是重点人群，如幼年龄组和高年龄组，应是免疫接种的重点对象。

［1］National Center for Immunization and Respiratory Diseases，CDC．Use of influenza A （H1N1）2009monovalent vaccine：recommendation of the Advisory Committee on Immunization Practices（ACIP），2009［J］．MMWR Recomm Rep，2009，58（RR－10）：128．

［2］CDC．Safety of influenza A （H1N1）2009monovalent vaccines．United States，October 1November 24，2009［J］．MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2009，58（48）：1351－1356．

［3］Liang XF，Wang HQ，Wang JZ，et al．Safety and immunogenicity of 2009pandemic influenza A H1N1vaccines in China：a multicentre，double－blind，randomized，placebo－controlled trial［J］．Lancet，2009，375 （9708）：56－66．DOI：10．1016／S0140－6736（09）62003－1

［4］Chen EF，Yao FY，Zhou JH，et al．Study on immunogenicity and related factors of the influenza A （H1N1）vaccine in mass immunization［J］．Zhejiang Prevent Med，2011，23（7）：5－7．（in Chinese）陈恩富，姚风燕，周建红，等．甲型H1N1流感疫苗免疫效果及影响因素研究［J］．浙江预防医学，2011，23（7）：5－7．

［5］Zheng K，Yang RP，Zhang XC，et al．Evaluation on vaccination against 2009pandemic influenza A （H1N1）virus infection in Chengdu，2009［J］．J Prev Med Inf，2011，27（3）：177－179．（in Chinese）郑珂，杨汝沛，张晓春，等．2009年成都市甲型H1N1流感疫苗免疫效果评价［J］．预防医学情报杂志，2011，27（3）：177－179．

［6］Committee for Medicinal Products for Human Use，Note for guidance on harmonization of requirements for influenza vaccines，CPMP／BWP／214／96，issued 12March 1997．Available at：www．emea．Europa．Eu／pdfs／human／bwp／021496en．pdf（accessed 2December 2009）．

［7］Food and Drug Administration．Influenza A（H1N1）2009Monovalent Vaccine［EB／OL］．http／／www．fda．gov／downloads／biologicsbloodvaccines／vaccines／approvedproducts／ucm182401．pdf．

［8］Li HD．Security evaluation on the immunization with of influenz A（H1N1）vaccine in health population in Huarong County in 2009［J］．Practical Prevent Med，2011，18（7）：1244－1246．（in Chinese）李华东．2009年华容县人群甲型H1N1流感疫苗免疫效果分析［J］．实用预防医学，2011，18（7）：1244－1246．