淋巴细胞注射治疗习惯性流产的探讨

陈蔼仙

（广州女子医院，广东 广州 510370）

对于习惯性的流产，特别是不明原因的流产，至今仍是世界妇产科上的一个难题。当前，在我国国内不明原因习惯性流产患者主要还是以常规的保胎或者安胎为主，但疗效结果却并不都如人意。随着医学的不断发展，很多的医院已经开始在尝试使用免疫治疗方法来治疗不明原因的流产或者习惯性的流产。随着该技术的不断成熟与完善，相信该技术会被广泛应用于临床医学上[1]。

1 资料与方法

1.1 临床资料

所有患者均为连续流产3次以上，夫妻双方的身体状况正常，年龄段为23～35岁，平均年龄为27岁，流产时的孕期为6到11周。46例患者经进行各项相关的检查后，得出其中有21例患者曾有过1～2次的人工流产。对这些患者进行随机的分组，一组为25例，进行淋巴细胞注射的免疫治疗，另外的一组为21例，单纯使用静脉丙种球蛋白治疗，作为对照。

1.2 治疗方法

1.2.1 了解患者的情况

了解患者的月经规律、内分泌、生育史、过去病史、家族病史以及配偶等相关情况。

1.2.2 对患者进行常规性检查

宫腔镜检查，盆腔B超，夫妻染色体检查，性激素系列检查：孕酮（P），雌二醇（E2），黄体生成素（LH），促卵泡生成素（FSH），催乳素（PRL），睾酮（T），阴道分泌物涂片，丈夫精液等，以明确习惯性流产原因，对症下药。

1.2.3 主动免疫治疗的操作方法

具体操作方法为：①抽取丈夫的空腹静脉血28mL，使用肝素进行抗凝。②拿6个无菌的平底刻度试管，将每个试管内装入淋巴细胞分离液5mL。③将已经稀释好的静脉血进行摇匀，然后分别装入原先准备好的6个含有淋巴细胞分离液的试管中内，每管约5mL静脉血，使静脉血沿着试管壁慢慢流入，要让静脉血与分离液形成分明的界限，不能将两者摇匀。④然后，马上2500r/min转速离心20min，离心管内的液体被分成四层，从上而下分别是血浆层、淋巴细胞层、淋巴细胞分离液层、红细胞和多个核细胞层。淋巴细胞层最薄位于血浆和淋巴细胞分离液之间，白色，用无菌吸管将6支离心管内淋巴细胞吸出来，加到另外2支无菌刻度离心管内。⑤将无菌盐水加入两个刻度离心管内至9mL，用无菌玻璃吸管反复打散吸洗，然后以2500r/min转速离心10min，弃去上清。⑥将全部淋巴细胞用生理盐水配成4mL悬液，分装到4个耐低温无菌朔料管（液氮罐保存），每个管1 mL淋巴细胞悬液，最后得出的淋巴细胞悬液大概是在（2～3）×107/mL的范围。⑦选择患者前臂的内侧，进行皮内注射，每次注射1mL淋巴细胞悬液，分6个点注射，30min之后对局部的反应进行观察。每隔2周就注射1次，4次作为1个疗程。如果患者怀孕了，要继续增加1到3次的加强治疗；如果患者在半年内仍未怀孕，则需要再进行3次的治疗[2]。

1.2.4 对照组的治疗

患者在怀孕前为其注射静脉丙种球蛋白，每一次为20g，注射4次作为1个疗程，每隔2周就为其注射1次，怀孕之后要继续注射2次。

1.2.5 对患者的心理治疗

大部分的患者对主动免疫治疗的认识存在不足，会产生一种怀疑的心理。因此，对这些患者应该进行一些解释和说明，让患者了解到主动免疫治疗的重要性以及治疗效果，同时还让他们了解相关的注意事项，让患者对医生产生一种信任感，让她们在治疗过程中保持良好的心态，对进行的治疗能予以积极的配合，对于使用主动免疫治疗的患者，每一次注射之后都要对患者注射部位的红肿情况进行观察记录，对持续的时间、患者自身的感觉等也要做好相关的笔记。医护人员应该与患者建立良好的关系，让患者主动与医护人员交流内心感受，让他们将内心的顾虑或者自责发泄出来，不仅对患者缓解心理压力有很好的帮助，还有助于医生分析患者流产的原因[3]。

1.3 治疗效果的判断标准

如果患者怀孕了，而且怀孕时间超过了5个月，则为治疗成功；如果患者怀孕的时间在5个月就流产的，则为治疗失败。

2 结 果

在接受主动免疫治疗的25例患者中，怀孕为21例，其中成功分娩为12例，有9例的怀孕时间超过了5个月，未怀孕的为4例，治疗的成功率为84%；对照组的21例患者中，怀孕为15例，其中成功分娩为8例，有7例的怀孕时间超过5个月，怀孕时间少于5个月4例，未怀孕的为2例，治疗的成功率为71.4%。观察两组产下婴儿中，接受主动免疫治疗这一组的12名婴儿中，有9例的体质量在3.5～3.8kg的范围，体征均正常，有2例的婴儿由于在宫内的生长较缓慢，体质量分别为2.2kg和2.3kg。对照组的8例婴儿中，有5例的体质量在3.1～3.6kg，有3例因在宫内生长缓慢原因体质量在2.2～2.4kg，婴儿体征也均正常。两组婴儿的对比无显著差异（P＞0.05）。

3 讨 论

在本临床研究中，尚未发现有患者在接受免疫治疗的过程中出现感染或者过敏等不良现象。如果患者在第一次注射中皮肤出现严重的红润硬结，甚至还出现水泡的症状，再次妊娠一般是预后良好，由此也可以看出皮肤反应可以作为淋巴细胞注射免疫疗效的一个判断标准。对于失败的16%的患者，分析其原因，是因为在抗心磷脂抗体（ACA）、抗精子抗体（AsAb） 以及抗子宫内膜抗体（AEA）的这3项试验中有一项以上的阳性，患者获得的治疗效果都并不理想，再次进行妊娠的成功率就低了[4]。

随着生殖研究学的不断发展，众多研究人员认为原发性习惯性自然流产可能因为患者对于胚胎和半同种抗原的反应性不高，没有能力生产出相应的封闭抗体，进而致使胚胎受到排斥，在进行患者配偶的淋巴细胞进行免疫治疗时，夫妇两者的HLA抗原并不相容，这种胚胎携带的父源性HLA抗原可以刺激母体的免疫系统， 进而导致一类 IgG型抗体的产生，医学上称之为封闭抗体或封闭因子。封闭抗体不仅可以跟母体淋巴细胞的表面抗原进行结合，还以跟滋养细胞的本身相结合，这种结合可以使母体与胎儿之间的免疫识别和免疫反应被阻断。一些患者之所以出现反复的自然流产，是因为她们缺乏封闭抗体，母体内的免疫系统很容易会对胚胎产生免疫性的抗拒，导致流产结果的产生。使用患者配偶的静脉血进行淋巴细胞免疫的治疗，能够让患者的CD8增生，CD4/CD8比例恢复正常状态，诱使母体内部的T细胞受体产生抗夫的个别基因抗体，这种免疫功能变化可以通过封闭抗体的介导，增强母体对胚胎的保护，提高妊娠的成功率。依据免疫的原理，多次少量的异体抗原起到的刺激效果更容易产生保护性的抗体，并且出现不良反应的现象比大剂量的刺激要少得多。在本次临床研究中，我们使用的就是多次少量的免疫治疗方法（淋巴细胞为（2～3）×107/mL，4次作为一个疗程），同时还结合对患者的心理治疗，收到了显著的治疗效果[5]。

在本研究中，使用淋巴细胞注射免疫治疗的成功率明显高于单纯用静脉丙种球蛋白治疗的这一组，这说明淋巴细胞注射对习惯性流产是具有重要的临床意义的。在接受免疫治疗后，封闭抗体就会形成并增加，母体内的免疫能力就会增强，有利于提高妊娠的成功率。使用丈夫淋巴细胞主动免疫的治疗方法，母体的免疫反应会比较快，时间也短，并且没有明显的副作用出现。根据对两组产下婴儿的观察可看出双方并无显著的差异（P＞0.05）。让母体使用配偶血液分离出来的淋巴细胞进行治疗，还可以减少血源性感染的危险。

关于不明原因引起的习惯性流产病因尚不能得到确切的解释，一般认为绝大多数的原因都与母体内的免疫因素有关系，但是目前的一些检查免疫项目（CD8、CD4、HLA等）都较为昂贵，并且技术水平的要求很高，增大了确诊的难度。而使用淋巴细胞皮内注射治疗的方法不仅简单、方便，而从经济方面来讲也较为实惠，能够被大多数患者所接受。因此，笔者认为在排除原因确诊是习惯性流产后就可以使用淋巴细胞注射免疫治疗法，这样不仅可以减少患者尝试各种治疗的痛苦，还可以为他们较少一笔医疗开支。

[1] 李东明,甘腾华,穆小坚,等.习惯性流产患者免疫治疗前后封闭抗体的变化及其意义[J].广西医学,2009,38(1)：46-48.

[2] 廖丹,李凤英,谭秋慧.淋巴细胞免疫治疗反复早期自然流产53例[J].临床医学,2009,29(1)：75-76.

[3] 张瑞群.淋巴细胞免疫治疗自然流产49例分析[J].中国实用医药,2010,5(15)：45-46.

[4] 汪丽兰.淋巴细胞主动免疫联合HCG治疗复发性流产270例疗效分析[J].医学信息(中旬刊),2010,(12)：3531-3532.

[5] 丁克文,宋燕,刘娟,等.反复自然流产患者经配偶淋巴细胞免疫治疗后外周封闭抗体水平变化[J].中国免疫学杂志,2009,25(2)：157-158.